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乙型肝炎病毒(HBV)是属于嗜肝DNA病毒(Hepadna)的一种,完整病毒颗粒(Dane颗粒)的核心部分,含有双股环状脱氧核糖核酸(DNA),近年来对HBV DNA的研究取得迅速发展,HBV DNA克隆成功,而且可以用切口翻译方法把32P标记上克隆的HBV DNA,把它作为探针与血清中提取的DNA杂交,检测血清标本中是否存在HBV DNA,提供一种极为灵敏的检测血清中HBV的方法,我们开展了这个检测项目,应用斑点杂交试验直接检查血清标本的HBV DNA。
郑锡澄
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PCR技术用于检测肝细胞癌石蜡包埋肝组织中的HBV DNA [PDF]
用多聚酶链反应(PCR)技术检测了16例肝细胞性肝癌(HCC)患者癌灶和癌旁双份组织石蜡包埋标本中的乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)。以C基因引物扩增HBV-DNA,32份标本中检出率71.87%。以新鲜冷冻肝标本作对照检出率81.25%,二者相比无显著性差别(X~=0.57,P>0.05)。以质粒提取HBV-DNA作灵敏度测定,PCR-EB可达10fg,PCR-SBH可达lag。应用非放射性的地高辛素标记探针作杂交灵敏度达~32P标记探针的水平。
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Nested PCR检测HBV DNA技术的建立与应用 [PDF]
本研究建立一种Nested PCR技术检测HBV DNA,即采用内外两对引物分别进行连续两次扩增,使检测极限由一次PCR的10-2Pg提高到10-5Pg;经32P标记寡核苷酸探针作Southern转移杂交以及BgIⅡ作酶切分析证实两次扩增均为特异性扩增。通过抗-HBe阳性、单项抗一HBc阳性和单项抗-HBs阳性三种血清的HBV DNA的检测,表明该方法确能检出标准PCR所不能检出的极低水平的HBV感染,对提高乙型肝炎的诊断水平及更准确地评价药物疗效有重要意义。
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建立检测血清HBV DNA的多聚酶链反应技术。人工合成adr、adw和ayw三个业型HBV的两个共有序列NC1和NC2作为引物扩增一长428bp且含一BglⅡ酶切点的HBV C基因片段。含FD酶的反应体系在水浴93℃30秒、55℃60秒、72℃90秒依序循环30周期,当克隆HBV DNA模板最小加量为10 fg时,产物作琼脂糖凝胶电泳经溴化乙锭染色在紫外线下观察仍可见428 bp位置的阳性荧光带。阳性产物经BgⅠⅡ酶切后分为125 bp和303 bp的两个特异片段。同一条件下的阴性对照则出现阴性结果 ...
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随机引物引导的乙型肝炎病毒DNA探针标记和重复杂交 [PDF]
随机引物引导的探针标记足一种比切中移位更为有效的探针标记方法,作者应用这种方法制备32P标记的乙型肝炎病毒(HBV)DNA探针。经液闪测定,探什比放射性为lxl09cpm/ug,(32)P掺入率为71.43%,均比切口移位有关参数上限高出数倍。将这种探针用于尼龙膜载样杂交,在每100cm2的样膜所加探针放射性强度为5 x106cpm、浓度为20ug/L条件下,放射自显影24小时即可出示清晰结果。并且检出HBV DNA灵敏度达0.1Pg,检测HBSAg和HBCAg双阳性血清,HBVDNA阳性率达87 ...
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实时二维剪切波弹性成像评估慢加急性肝衰竭患者的预后 [PDF]
【目的】探讨实时二维剪切波弹性成像(2D SWE)评估慢加急性乙型肝炎肝衰竭(ACLF-HBV)患者预后的临床 应用价值。【方法】入组对象为2013年10月1日至2015年12月31日我院感染科确诊的312例慢加急性乙型肝炎肝衰竭患 者。观察终点为90 d,根据临床结局分为好转组192例和恶化组120例。入组后3 d内,应用2D SWE进行肝脏硬度测量, 收集患者血常规、凝血、生化等血清学指标,观察患者肝实质回声均匀度、肝包膜光滑度、右肝厚度、胆囊壁厚度、脾脏指 数、腹水指数、门静脉主干内径 ...
吴莉莉 +5 more
core
目的探讨血清纤维化标志物检测评估慢性丁型肝炎肝纤维化程度的临床意义。方法选取2015年12月-2016年12月我院收治的未接受任何抗病毒治疗的50例慢性丁型肝炎患者作为研究对象,对患者血清纤维化指标透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、谷丙转氨酶(ALT)和乙肝病毒的脱氧核糖核酸(HBV DNA)进行检测,并实行肝活组织检查检测肝组织纤维化程度。比较丁型肝炎患者血清学检测结果、不同纤维化分期血清学指标,并分析丁型肝炎患者血清学指标与肝硬化分期的相关性 ...
周丹
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目的 探讨乙肝患者血清HBVDNA定量检测的临床意义及与乙肝抗原抗体模式的关系。方法 用Light CyclerTM对 315例乙肝初诊患者进行HBVDNA定量检测 ,同时定量测定乙肝表面抗原、表面抗体 ,e抗原、e抗体和核心抗体等指标 ,观察患者血清中乙肝病毒基因组含量与抗原抗体表型组合的关系。结果 在 16 9例患者血清中检测出HBVDNA ,病毒基因组拷贝值范围为 3 77× 10 2 ~ 3 12× 10 8copies ml,平均拷贝值为 3 6 7× 10 6 copies ml ...
夏伟, 傅雷, 王书奎, 王自正
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肝炎基因诊断芯片同时检测慢性乙型肝炎患者血清及肝组织HBVDNA的临床研究
目的 用肝炎基因诊断芯片同时检测乙型肝炎患者血清及肝组织中HBVDNA ,并与雅培试剂、免疫组织化学和原位分子杂交法比较。方法 用点样仪将PCR扩增的HBCDNA探针点到特殊处理过的玻片上制成基因芯片 ,对 15例慢性乙型肝炎患者的血清及肝活检组织 ,分别用基因芯片、原位分子杂交法、免疫组织化学法、雅培试剂检测HBVDNA、HBcAg、HBsAg、HBeAg .结果 15例HBsAg、HBeAg阳性的乙型肝炎血清 ,基因芯片检测均阳性。 15例肝组织标本 ,免疫组化法阳性 15例 ,原位分子杂交阳性 ...
赵伟 +5 more
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目的 观察死胎胸腺组织中HBVDNA表达的情况 ,探讨通过产妇传播到死胎胸腺组织中的HBV是否存在复制。方法 采集 4 0例乙型肝炎产妇产下的死胎 ,常规尸检 ,取胸腺组织。采用原位分子杂交法 ,检测其中的HBVD NA ;回访产妇产前静脉血HBVM的检测结果。结果 死胎胸腺组织中HBVDNA的检出率为 2 7/40 (6 8% )例。产妇产前静脉血HBV呈高、低和无复制状态时 ,胸腺组织中HBVDNA的检出率分别为 2 /4(5 0 % )例、11/2 0 (5 5 % )例和 14 /16(88% )
赵伟 +4 more
doaj

