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研究45例慢性乙型肝炎患者的HCV重叠感染。病例均为后发抗HCV阳性的慢性HBsAg携带者,无先抗HCV阳性而后HBsAg阳性的个案,这可能反映HBV和HCV两种病毒感染的先后次序、不同传播方式及HBV对HCV易感性的增进作用。用RT-PCR检出30/45例血浆HCV RNA阳性,不仅确证HCV重叠感染诊断,还证实HCV复制及传染性。23/30例HCVRNA阳性者有输血史,提示输血是其获得HCV重叠感染的主要途迳。用PCR检出25/45例血清HBV DNA阳性,其中抗HBe阳性者的HBV ...
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采用异硫氰酸胍、柠檬酸钠、2-巯基乙醇、十二烷基肌氨酸钠作为变性裂解剂,结合水饱和酚、氯仿、异戍醇等进行快速程序式抽提血清HBV-DNA模板用于多聚酶链式(PCR)基因扩增。该提取法比一般方法简单、稳定、不易污染,抽提过程可在lh内完成。PCR应用结果表明敏感性高于地高辛素标记探针斑点杂交法。经酶切及a-32标记放射自显影鉴定PCR产物具有良好的特异性。
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以异硫氰酸胍裂解血清释放核酸使被二氧化硅吸附,经乙醇洗涤后用水悬浮,上清即含纯化DNA。结合双阶变温PCR建立一种简单快速的血清HBV-DNA检测方法。该法只需检测10ul血清,完成提取和扩增只要3h.操作很易掌握。用之检测56例HBsAg+/HBeAg+的血清、42例HBsAg+/HBeAg-的血清和54例HBsAg/HBeAg的血清,结果HBV-DNA检出率分别为86%、57%和13%。应用表明这是一种简捷有效的核酸纯化和扩增方法,适于对大量临床样本作检测之用。
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本研究建立一种Nested PCR技术检测HBV DNA,即采用内外两对引物分别进行连续两次扩增,使检测极限由一次PCR的10-2Pg提高到10-5Pg;经32P标记寡核苷酸探针作Southern转移杂交以及BgIⅡ作酶切分析证实两次扩增均为特异性扩增。通过抗-HBe阳性、单项抗一HBc阳性和单项抗-HBs阳性三种血清的HBV DNA的检测,表明该方法确能检出标准PCR所不能检出的极低水平的HBV感染,对提高乙型肝炎的诊断水平及更准确地评价药物疗效有重要意义。
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乙肝病毒PCR产物的鉴定及单项抗HBc阳性血清的HBV基因扩增
本文报道HBV基因扩增产物的限制性酶切分析和寡核苷酸探针杂交鉴定、应用血清HBVDNA的PCR扩增产物制备基因探针和单项抗HBc阳性血清的HBV基因扩增。PCR用adr、adw、ayw3种亚型HBV的C基因区共有序列为内外两对引物分单次或套式扩增,产物为66abp或428bp,两者序列中段共含-BgIⅡ酶切点并与一寡核苷酸探针同源。428bp产物被用以缺口平移标记32P探针作斑点和转印杂交检测。结合分子杂交的PCR结果从单项抗HBc阳性的8/42例慢性肝炎和2/12例无症状受测者血清中检出HBVDNA ...
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建立检测血清HBV DNA的多聚酶链反应技术。人工合成adr、adw和ayw三个业型HBV的两个共有序列NC1和NC2作为引物扩增一长428bp且含一BglⅡ酶切点的HBV C基因片段。含FD酶的反应体系在水浴93℃30秒、55℃60秒、72℃90秒依序循环30周期,当克隆HBV DNA模板最小加量为10 fg时,产物作琼脂糖凝胶电泳经溴化乙锭染色在紫外线下观察仍可见428 bp位置的阳性荧光带。阳性产物经BgⅠⅡ酶切后分为125 bp和303 bp的两个特异片段。同一条件下的阴性对照则出现阴性结果 ...
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将聚合酶链反应(PCR)成份分两组。先加一组含dNTPs、引物和MgCl2,并加1粒组织切片用石蜡凝固为盖层。再加另一组反应液含待扩增模板、TaqDNA聚合酶和KCl,以与第一组反应液分隔。PCR循环时高温可使中隔蜡层融化,两组反应液相混,蜡油上浮作为防蒸发屏障。由此避免室温混合加样和预置导致引物聚体形成和错导非特异扩增,提高PCR特异性和灵敏性。作者应用这一技术检测53例单项抗HBc阳性血清,检出HBVDNA13例,检测69例HBsAg阳性和抗HBe阳性血清,检出HBVDNA61例 ...
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随机引物引导的探针标记足一种比切中移位更为有效的探针标记方法,作者应用这种方法制备32P标记的乙型肝炎病毒(HBV)DNA探针。经液闪测定,探什比放射性为lxl09cpm/ug,(32)P掺入率为71.43%,均比切口移位有关参数上限高出数倍。将这种探针用于尼龙膜载样杂交,在每100cm2的样膜所加探针放射性强度为5 x106cpm、浓度为20ug/L条件下,放射自显影24小时即可出示清晰结果。并且检出HBV DNA灵敏度达0.1Pg,检测HBSAg和HBCAg双阳性血清,HBVDNA阳性率达87 ...
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[Research progress in the field of liver failure with artificial livers in 2025]. [PDF]
Han T.
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[Research progress on the quercetin target role and signaling pathway in anti-liver fibrosis]. [PDF]
Zhao RQ +9 more
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