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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的建立沙门氏菌实时荧光定量PCR的快速检测方法 ,探讨该方法的可行性和应用价值。方法根据沙门氏菌fimY基因序列设计引物和探针,采用基因重组技术构建用于沙门氏菌检测的定量标准品,建立实时荧光定量PCR检测沙门氏菌的方法。结果成功构建了沙门氏菌重组质粒标准品和沙门氏菌实时荧光定量PCR方法 ;通过特异性、敏感性、稳定性和重复性验证,结果表明具有较好的特异性、敏感性、稳定性和重复性;对模拟标本与分离培养对比,二者符合率为100%。结论沙门氏菌实时荧光定量PCR检测方法的建立 ...
杨柳 +8 more
doaj
Sequencing and correlation analysis of miRNAome and transcriptome of Larimichthys crocea infected by Cryptocaryon irritans [PDF]
, 2016 大黄鱼（LarimichthyscroceaRichardson，1846）曾是我国的传统四大海洋渔业对象之一，也是我国目前最主要的海水网箱养殖经济鱼类之一，2015年养殖年产量超过14万吨。近年来由于发展模式的制约，养殖管理的缺失，加之养殖环境的严重污染，大黄鱼养殖过程中的各种病毒性疾病，细菌疾病和寄生虫疾病日趋严重，其中以刺激隐核虫（Cryptocaryonirritans）病的危害最为严重。其所感染大黄鱼并导致继发性的细菌感染，造成养殖大黄鱼大面积死亡，对该养殖产业损失极大 ...
乔莹
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人TIM-1和TIM-3 mRNA实时SYBR Green Ⅰ定量RT-PCR检测方法的建立
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2012 目的建立实时SYBR Green I定量RT-PCR检测人TIM-1和TIM-3mRNA的方法。方法从人外周血单个核细胞提取的总RNA中逆转录扩增人TIM-1和TIM-3的cDNA,将将纯化的人TIM-1和TIM-3的扩增产物分别与pMD18-T Simple载体进行连接,转化宿主菌DH5α,提取重组质粒DNA,PCR鉴定并测序分析。纯化质粒并检测260nm吸光值,确定重组质粒原液的拷贝浓度并以此制备荧光定量PCR梯度浓度标准品,进行实时荧光定量PCR实验。结果建立了TIM-1和TIM ...
陈治中 +3 more
doaj
Transcriptome and Proteome Analysis During Larval Settlement and Metamorphosis in Fujian Oyster(Crassostrea angulata) [PDF]
, 2016 附着变态衔接浮游阶段与底栖阶段，是海洋无脊椎动物生活史的重要环节，附着变态过程涉及到复杂的生理过程和行为形态的改变，人们至今未能很好地阐释其中涉及到的分子机制。福建牡蛎（Crassostreaangulata）是我国南方主要的贝类养殖种之一，具有典型的附着变态过程。然而关于牡蛎附着变态过程的分子研究停留在个别基因的克隆和定量表达的研究，这并不能反映附着变态过程的多基因的调控网络。有大量的药理学研究表明肾上腺素能够诱导牡蛎幼体未经附着而直接变态，但是肾上腺素诱导的分子机制的研究至今空白。本研究采用转录组学、
肖小伙
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野生动物学报, 2016 为探究低温条件下东北林蛙(Rana dybowskii)肝脏中GSK3β基因表达量变化,需利用荧光定量PCR(Fluorescence quantitative real-time PCR)对GSK3β基因表达量进行检测,而在此过程中PCR引物的筛选直接影响到检测结果数据的准确性与真实性。本实验以东北林蛙为实验对象,基于本研究组前期获得的东北林蛙转录组数据库,并参考其他物种GSK3β基因,利用Beacon Designer 7软件设计了6对引物,采用逆转录PCR和实时荧光定量PCR技术 ...
张 宇 巩珊珊 柴龙会 张晶钰 肖向红
doaj
Comparison of two highly expressed antimicrobial peptides Scygonadin and SCY2 in Scylla paramamosain gonads and their mechanism of reproductive immunology [PDF]
, 2013 拟穴青蟹(Scyllaparamamosain，以下简称青蟹)是我国南方最重要的海水养殖蟹类品种。近些年来，随着青蟹养殖规模的不断扩大，各种病害频繁发生引起养殖青蟹大量死亡，严重影响了我国青蟹养殖业的发展。青蟹以先天性免疫为主，抗菌肽是先天性免疫系统中重要免疫因子，对抵抗病原微生物感染发挥关键作用。 Scygonadin(SCY1)和SCY2是本实验室从雄性拟穴青蟹射精管中发现的两种新抗菌肽基因，前期研究已分别阐明了两种抗菌肽的基因组成与部分特性，并证明SCY1具有生殖免疫功能 ...
乔琨
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的体外构建DNA氧化损伤模型,荧光实时定量PCR检测线粒体DNA氧化损伤。方法体外应用亚甲蓝联合可见光（MBL）方法建立DNA氧化损伤模型,通过8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶（OGG1）特异性切割氧化损伤位点8-羟基鸟嘌呤（8-oxoG）,运用荧光实时定量PCR法检测不同比例混匀的OGG1酶切与未酶切的DNA氧化损伤模板。结果成功构建体外氧化损伤DNA模型,OGG1酶能特异切割氧化损伤位点;OGG1酶切DNA在定量PCR体系模板中所占比例,与线粒体DNA编码基因COⅡ扩增Ct值呈正相关 ...
孙玉 +6 more
doaj
Study on the microbial community structure, diversity and abundance in water-soil interface sediments on the watershed of three rivers [PDF]
, 2013 为了探讨无机盐分、养分及有机质矿化作用对微生物群落结构、多样性和功能微生物丰度影响，河流水土界面微生物群落结构和碳、氮、硫循环功能微生物种群的演替规律，本论文以九龙江、闽江和瓯江三江流域作为研究区域，并增加温室培养实验，对其中水土界面沉积物样品中的理化参数、微生物群落、多样性和功能微生物丰度进行测定；采用基因文库构建技术、变性梯度凝胶电泳技术（DGGE）和illumina高通量测序技术分析了样品中微生物群落结构及活动规律；利用实时荧光定量PCR（RT-PCR）技术对功能微生物进行定量 ...
李虎
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甲型肝炎病毒和戊型肝炎病毒双重荧光定量PCR方法的建立及应用
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2015 目的建立甲型肝炎病毒（HAV）和戊型肝炎病毒（HEV）的双重荧光定量PCR检测方法并应用于临床样本的检测。方法根据参考文献分别选取HAV以及HEV基因组的保守区域设计合成特异性引物和探针,从而建立并优化双重荧光定量PCR反应体系,之后评价反应体系的特异性、敏感性和稳定性。结果本研究建立的HAV和HEV双重荧光定量PCR技术应用于检测HAV核酸时检测极限可以达到1个拷贝/反应,对同一样品重复测定5次获得的Ct值的变异系数（CV）最大为1.5%,同时该体系检测HEV的最低检测极限也达到10个拷贝/反应 ...
张磊, 鲁淑婷, 李玉龙, 黄洲风
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Expression and biological behaviors of long non-coding RNA-ROR in gastric cancer [PDF]
, 2016 背景：胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤，发病率高，预后效果差。早期发现、早期诊断是目前提高胃癌患者生存率的关键环节，因此，寻找新的胃癌早期诊断的分子标志物是目前胃癌研究亟待解决的问题之一；此外，近年来肿瘤的分子靶向治疗方兴未艾，但这些靶向治疗药物价格昂贵、疗效不稳且大多依赖进口，因而，从我国国情的实际出发，寻找新的治疗靶点是我国目前肿瘤靶向治疗急需克服的困难。长链非编码RNA-ROR是最新发现对细胞重编程过程具有重要调控作用的非编码RNA。目前研究发现ROR与乳腺癌、肝癌及胶质瘤的发生进展密切相关 ...
朱长明
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