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, 2009 采用微流道反应器系统,优化甲胎蛋白单克隆抗体浓度,并装配在醛基改性后的硅片表面上,经牛血清白蛋白封闭后形成检测AFP芯片阵列。通过制作AFP浓度梯度标准曲线标定光学蛋白质芯片,实现肿瘤标志物AFP的检测,结果表明,该方法的最低测定浓度可以达到1.0ng/mL,变异系数为3.1%,回收率在94.4 105.0%之间,与人纤维蛋白原的交叉反应率≤0.25%、与1%葡萄糖≤0.08%、与人源IgG≤0.16%和与人血清白蛋白≤0.20%,说明光学蛋白质芯片技术检测AFP,灵敏度高、重复性好、操作简便 ...
靳刚, 陈艳艳, 黄承洪
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, 2004 一种蛋白质分析用微流控芯片，其特征在于：该芯片由四个基本单元顺序连接构成，每上一个基本单元的出样端与下一个基本单元的进样端相接；第一个基本单元为蛋白质的等电聚焦分离单元；第二个基本单元为蛋白质的筛分电泳单元，筛分介质选自纤维素、琼脂糖的有机聚合物；第三个基本单元为蛋白质的蛋白酶酶解单元，微通道全部或部分内壁键合特异性蛋白酶或填充带有特异性蛋白酶的填料；第四个基本单元为蛋白质的酶解产物到质谱的输送的接口单元。用本发明芯片对蛋白质进行分析能够在短的时间内获取大量信息，并且操作简单 ...
林炳承, 毛秀丽, 王克夷
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2014 目的利用ChAT启动子荧光素酶报告系统对中药小分子化合物进行筛选,以期找到能够促进ChAT表达的化合物。方法用构建的ChAT启动子荧光素酶报告体系从400余种中药小分子化合物中筛选ChAT启动子激活剂,并用RT-PCR和Western Blot方法对筛选得到的小分子化合物进行验证。利用免疫印迹法分析筛选得到的化合物对细胞内信号通路的影响。结果通过筛选发现大豆甙元能够激活ChAT启动子的活性,与对照相比具有显著性差异 ...
董明勤 +4 more
doaj
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2020 目的本研究旨在研究骨肉瘤细胞来源外泌体对靶器官微环境的调控作用及其分子机制。方法提取骨肉瘤细胞143B外泌体并鉴定，通过PKH26荧光染色后经尾静脉注入裸鼠体内，24 h后提取肝、脾、肺、肾及脑组织，荧光显微镜下计数不同视野红色荧光数量；通过免疫荧光检测不同类型细胞中外泌体摄取情况；143B外泌体与人肺成纤维细胞共培养，荧光显微镜检测摄取情况，进一步利用qPCR检测炎性因子IL-1β、IL-6及TNF-α表达水平，通过蛋白印迹法检测炎性信号通路NF-κB通路p-p65和MAPK通路p-ERK及p ...
谢显彪 +7 more
doaj
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2014 【目的】 探讨雌激素对原代培养的心肌细胞内脑钠肽（ＢＮＰ）的表达是否有影响以及雌激素影响ＢＮＰ表达的机制。【方法】 视实验目的给予无血清饥饿状态下的心肌细胞不同浓度的雌激素以及相应通路抑制剂处理，以ＲＴ－ＰＣＲ测定细胞内ＢＮＰ的ｍＲＮＡ水平，以Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔｔｉｎｇ测定细胞内ＢＮＰ的蛋白表达量以及相关通路的磷酸化水平，以免疫荧光技术观察雌激素刺激下心肌ＢＮＰ的亚细胞定位。【结果】 雌激素刺激能够显著上调心肌细胞内的ＢＮＰ ｍＲＮＡ以及蛋白水平（Ｐ＜ ０．０５），雌激素受体抑制剂ＩＣＩ １８２ ...
doaj
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2014 摘 要:【目的】 观察脂多糖(LPS)对巨噬细胞自噬的影响及p38/MAPK通路在其中的作用?【方法】 体外培养巨噬细胞株RAW264.7,分为对照组?饥饿状态激活自噬组?单纯LPS刺激组?LPS+P38抑制剂(SB203582)组和LPS+mTOR抑制剂(rapamycin)组?将前期构建的载体pcDNA3.1-GFP-LC3,转染RAW264.7,通过荧光显微镜观察各组细胞中自噬体形成情况?qRT-PCR方法检测各组中与细胞自噬相关的基因Atg5,Atg7,LC3-Ⅱ和Bnip3 ...
赖义明
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浙江大学学报. 农业与生命科学版The present study aimed to investigate the immunomodulatory effect and mechanism of Cirsii Herba glycoproteins (CHPs) on dendritic cells. The flow cytometry, Griess method, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), real time fluorescent quantitative ...
QIN Shiyue(秦诗越) +6 more
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, 2014 本发明涉及藻蓝蛋白类荧光蛋白质领域，具体为一种生产链霉亲和素标记的藻蓝蛋白类荧光蛋白质的方法及应用。本发明通过将链霉亲和素合成基因、藻蓝蛋白亚基合成基因、催化酶合成基因、色基合成基因重组于同一表达质粒中，实现多基因的组合表达，通过对诱导、纯化条件的优化，制备具备稳定荧光活性的融合蛋白。采用单一质粒完成荧光活性融合藻胆蛋白的组合表达，避免了多质粒在工程菌株中的稳定性及各基因表达的不同步问题，减少发酵过程中的抗生素的使用。本发明的方法有效提高了荧光蛋白质的稳定性 ...
秦松, 焦绪栋
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, 2007 本发明涉及动物血液的开发利用，一种珠蛋白酶解物，其以猪血中的血红蛋白脱除血红素后得到的珠蛋白为原料，通过加蛋白酶酶解的方法，制成富含活性肽的蛋白酶解物。该酶解物具有显著抑制血管紧张素I转换酶活性的作用，可用于治疗和预防高血压，同时具有增强机体防御功能、调节生理节律、预防疾病和促进康复等作用 ...
余奕珂 +5 more
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野生动物学报为研究梅花鹿（Cervus nippon）DLX5基因的结构和功能，进一步探究其与梅花鹿茸角骨化机制间的关系，采用RT-PCR技术对梅花鹿DLX5基因进行克隆，获得包含全部编码区的cDNA序列，对该基因的氨基酸序列进行生物信息学分析并构建系统进化树，通过KEGG富集分析其信号通路，运用实时荧光定量RT-PCR检测该基因在鹿茸生长不同时期的表达情况。结果表明：梅花鹿DLX5基因编码区长为870 bp，共编码289个氨基酸。DLX5蛋白为可溶性的不稳定蛋白，有2个保守结构域，主要定位于细胞核 ...
王鹏 +5 more
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