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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2006 目的寻找人肝癌细胞N-ras基因的RNA干涉有效靶点。方法利用计算机网络资源及Oligo6.0、BlastResearch等生物学软件在N-ras基因编码区寻找RNAi有效靶点,并设计用于体内转录形成以U6启动子的siRNA发夹结构的DNA。结果成功筛选出RNA干涉的有效序列14个,并设计出siRNA发夹结构的DNA。结论这种对人肝癌细胞N-ras基因的RNAi有效靶点的筛选为进一步研究奠定了理论基础。其工作的开展将在RNAi治疗、肝癌N-ras基因功能研究、新药开发等方面发挥重要作用。
徐凯成 +4 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建针对细胞内氯通道4（CLIC4）的短链干涉RNA（siRNA）及其表达载体,转染细胞后观察其对CLIC4基因的干涉作用。方法设计CLIC4靶向的发夹状siRNA,据此设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接到pSilencer3.1-H1载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体转染法转染大鼠神经胶质瘤细胞C6,通过RT-PCR检测CLIC4基因表达水平的变化。结果酶切鉴定与DNA测序分析证明CLIC4基因的siRNA载体构建正确,RT-PCR结果表明CLIC4基因的表达水平明显降低 ...
袁兆新 +8 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2013 目的构建FRAT1siRNA真核干涉表达载体pSINsi-FRAT1,并测序鉴定证实克隆正确。方法设计以FRAT1基因为靶标的RNAi序列和阴性对照片段序列,并克隆入载体pSINsi-hU6,用基因测序进行重组克隆验证。结果 PCR检测证实siRNA插入pSINsi-hU6质粒,测序分析证实插入序列正确。结论成功构建FRAT1基因的RNAi载体,为研究FRAT1基因对结肠癌细胞增殖凋亡侵袭的影响提供了稳定转染的RNA干扰质粒。
于庆功 +4 more
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Zhongguo cuzhong zazhi目的 全脑缺血再灌注损伤后海马CA1区神经元死亡最为显著，但其原因尚不明确。本研究分析大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马CA1区的基因组变化，寻找可能的干预靶点。 方法 将Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组和模型组。采用四血管法制作大鼠全脑缺血再灌注损伤模型。假手术组及模型组大鼠在全脑缺血再灌注后的5个时间点（6、12、24、48、72 h）取海马CA1区脑组织进行RNA测序。测序结果采用对比分析、基因本体论（gene ontology，GO）富集分析，以及京都基因和基因组数据库（Kyoto
贾瑞琪，翟华筝，张晨，汪敬业（JIA Ruiqi, ZHAI Huazheng, ZHANG Chen, WANG Jingye）
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的研究RNA干扰（RNAi）对BEL7402细胞的N-ras基因表达的干扰效应。方法建立装载靶向N-ras基因小干扰性RNA（siRNA）的表达载体;用脂质体法将此表达载体转染BEL7402细胞株,以转染空载细胞作为对照;采用RT-PCR和Western blot检测N-ras基因的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果转染siRNA的表达载体可以抑制内源N-ras基因在转录和转译上的表达。N-ras基因的表达抑制与BEL7402细胞的凋亡相关联。结论转染siR ...
赵岳 +4 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的沉默HeLa细胞人端粒酶催化亚单位（human telomerase catalytic subunit,hTERT）基因、抑制细胞端粒酶活性,观察细胞生长状态和其对裸鼠体内移植接种成瘤能力的影响。方法RNAi技术,脂质体转染,筛选沉默hTERT基因稳定转染细胞株和无干扰效果的对照细胞株,端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附测定法（TRAP-ELISA）测定所筛选的细胞株端粒酶活性;进一步绘制各细胞株的生长曲线;裸鼠移植接种实验观察各株细胞在裸鼠体内成瘤能力。结果成功获得稳定转染具有沉默hTERT基因 ...
石英爱 +6 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2007 目的探讨RNA干扰技术沉默STAT3基因表达诱导人前列腺癌细胞凋亡的机制。方法针对人STAT3mRNA序列设计合成编码干扰RNA（siRNA）的DNA模板,构建pSilencer 2.1-U6-STAT3-siRNA重组质粒,转染人前列腺癌细胞株PC3,采用Western blot、Northern blot观察STAT3基因表达抑制后Bcl-2,C-Myc与Cyclin D1表达的变化,并用流式细胞技术及吖啶橙染色方法观察细胞凋亡。结果成功构建pSilencer 2.1-U6-STAT3 ...
于浩, 张灵, 高丽芳, 赵雪俭
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的进行丙型肝炎病毒（HCV）RNA干扰（RNA interference RNAi）作用研究。方法本实验选择HCV NS3基因片段作为靶序列,合成含有靶序列的DNA片段并克隆到pGCsi-U6/Neo/GFP/siNeGative载体中,构建可表达具有发夹结构双链siRNA的真核表达质粒pGCsi-U6/Neo/GFP/A,并转染Hela细胞,用HCV攻击该细胞,通过TCID50和HCV负链RT-PCR检测该载体对HCV感染细胞的保护效果。结果通过测序及荧光显微镜观察证明载体构建成功 ...
陈佳玉
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建含鼠LINGO-1短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）的复制缺陷型腺病毒载体。方法通过PCR法将带有LINGO-1 shRNA序列构建至U6启动子（U6sh LINGO-1）下游,与T载体连接,将质粒转化入大肠杆菌。将U6sh LINGO-1连到穿梭质粒pDC316上,与腺病毒基因组质粒pBHGlox△E1、3Cre共转染293T细胞,得到重组腺病毒载体（rAd LINGO-1）。经PCR鉴定正确后,进行扩增、纯化、滴度测定及感染性鉴定。结果PCR法得到U6sh ...
高峰, 孙红辉, 杨有庚
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的探讨RNA干涉技术抑制STAT3基因表达对过氧化氢（H2O2）复制的人胶质瘤U251细胞损伤模型的影响。方法转染pSilencer1.0-U6-SiRNA-STAT3重组质粒到U251细胞;Western blot方法观察转染重组质粒对STAT3蛋白表达的影响;MTT法检测细胞生存率,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、BAX表达。结果转染pSilencer1.0-U6-SiRNA-STAT3重组质粒能有效抑制U251细胞STAT3蛋白表达（抑制率>50%）;
苏静 +6 more
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