Исследование фармакокинетики и биоэквивалентности воспроизведенного и оригинального препарата дабигатрана этексилата при однократном приеме у здоровых добровольцев

Лекарственный препарат с международным непатентованным наименованием дабигатрана этексилат (ДЭ) представляет собой пролекарственную форму дабигатрана для орального применения и является прямым обратимым ингибитором тромбина [1][2]. В настоящее время препарат применяется для лечения и профилактики тромбозов глубоких вен, тромбоэмболии легочной артерии, а также в ортопедии [1]. Инсульт является одной из самых частых причин инвалидизации и смерти (11,6%) в мире. В общей популяции чаще встречается ишемический инсульт (ИИ) (~62% от всех типов инсульта). Основной причиной кардиоэмболического ИИ является фибрилляция предсердий, которая обнаруживается у 25-35% пациентов с ИИ [3]. Венозная тромбоэмболия, определяемая как тромбоз глубоких вен и тромбоэмболия легочной артерии, является третьим по распространенности сердечно-сосудистым заболеванием после инфаркта миокарда и инсульта. В Соединенных Штатах ежегодно госпитализируется ~4 млн хирургических пациентов и 8 млн терапевтических пациентов с умеренным или высоким риском венозной тромбоэмболии [4]. После первичного эндопротезирования бессимптомные тромбозы глубоких вен встречаются в 12,6-31,1% случаев. Развитие клинически значимых тромбозов происходит в 0,75-2,10%, тромбоэмболии легочной артерии в 0,41-1,93% случаев [5]. На данный момент для профилактики и лечения ИИ при фибрилляции предсердий и возможных тромбоэмболических осложнений одобрены прямые антикоагулянты, к числу которых относится ДЭ [5][6]. ДЭ включен в Перечень жизненно необходимых и важнейших лекарственных препаратов для медицинского применения на 2020г (Приложение № 1 к распоряжению Правительства Российской Федерации от 12 октября 2019г № 2406-р). В России на данный момент зарегистрировано 10 препаратов ДЭ, среди которых как лекарственные средства производства зарубежных компаний (Sandoz, Boehringer Ingelheim), так и отечественного производства. Высокая частотность проведения антикоагулянтной терапии при широком спектре заболеваний, а также хорошая переносимость, простота применения, эффективный антикоагулянтный эффект, предсказуемая фармакокинетика и отсутствие необходимости в рутинном контроле свертывания крови на фоне приема ДЭ [1] делает целесообразной разработку более доступных для населения форм препаратов на его основе. В данной статье представлены результаты исследования биоэквивалентности препарата с торговым наименованием Дабигатрана этексилат (капсулы, производитель Компания ООО "НТФФ "ПОЛИСАН" (Россия)) в сравнении с препаратом под ТН Прадакса^®.

Целью настоящего исследования являлось изучение сравнительной фармакокинетики и подтверждение биоэквивалентности T и R препаратов ДЭ у здоровых добровольцев после однократного приема внутрь натощак.

Материал и методы

Этические принципы. Данное исследование было проведено после получения разрешения на проведение клинического исследования Министерства здравоохранения РФ (РКИ № 414 от 07.08.2023г), а также одобрения Совета по этике при нём и локального этического комитета исследовательского центра, в полном соответствии с требованиями надлежащей клинической практики Международного совета по гармонизации, правилами надлежащей клинической практики Евразийского экономического союза, этическими принципами, изложенными в Хельсинкской декларации Всемирной Медицинской Ассоциации. Все добровольцы подписали форму информированного согласия до начала процедур исследования. Протокол клинического исследования DBG-BE-2023, версия 1.1 от 11.08.2023 был одобрен Советом по этике при Министерстве здравоохранения Российской Федерации, выписка № 338 от 11.07.2023.

Дизайн исследования. Дизайн исследования был разработан с учетом как российских рекомендаций по проведению исследований биоэквивалентности ¹, так и международных руководств ². Данное исследование биоэквивалентности являлось открытым, сравнительным, рандомизированным, одноцентровым, репликативным, перекрестным клиническим исследованием с четырьмя периодами по оценке биоэквивалентности препаратов Дабигатрана этексилат, капсулы, 150 мг (ООО "НТФФ "ПОЛИСАН", Россия) (T) и Прадакса^®, капсулы, 150 мг (Берингер Ингельхайм Интернешнл ГмбХ, Германия) (R) при однократном приеме внутрь натощак у взрослых здоровых добровольцев мужского и женского пола.

Клинический этап исследования биоэквивалентности был проведен на базе центра ООО "НИЦ Эко-безопасность" в период с 18 августа по 11 октября 2023г. Всего было скринировано 70 человек, из которых 68 здоровых добровольцев мужского и женского пола в возрасте от 19 до 45 лет (включительно) были отобраны в соответствии с критериями включения (по 34 в каждой группе). Все субъекты завершили участие в исследовании согласно протоколу, за исключением трёх добровольцев, которые досрочно завершили участие в исследовании по причине "Отзыв добровольцем информированного согласия" во время первого этапа.

Средний возраст включенных в исследование добровольцев составил 30,7 лет, средний рост — 173,7 см, средняя масса тела — 70,3 кг, средний индекс массы тела — 23,2 кг/м². По исходным демографическим и антропометрическим характеристикам добровольцев статистически значимых различий между группами обнаружено не было.

Все добровольцы были разделены на 2 группы: группа 1 (Г1) и группа 2 (Г2). Добровольцы, включенные в Г1, в первом и третьем периодах исследования получали по одной капсуле (150 мг ДЭ) Т, а представители Г2 — по одной капсуле (150 мг ДЭ) R. Во втором и четвёртом периодах, соответственно, наоборот: TRTR или RTRT (рис. 1).

На каждом из этапов добровольцы были госпитализированы вечером накануне дня приема препарата (как минимум за 12 ч) двумя когортами в одном клиническом центре и находились там до получения образца крови во временной точке 24 ч (24:00) после приема T/R, образец крови, предусмотренный во временной точке 48 ч (48:00) после приема T/R, был забран в амбулаторном режиме. Все процедуры были стандартизированы, их выполнение контролировалось сотрудниками исследовательского центра. Получение препарата и манипуляции с кровью проводились в одинаковых условиях. Все добровольцы из обеих групп получали одинаковую пищу в каждом из периодов госпитализации, соблюдался единый интервал времени между периодами.

Отбор проб и пробоподготовка. Временные точки отбора биообразцов для оценки концентрации дабигатрана в плазме крови были выбраны таким образом, чтобы получить наиболее полные данные для каждого фрагмента фармакокинетической кривой. С этой целью был предусмотрен частый отбор образцов вблизи T_max, а также не менее 3-4 точек в течение терминальной фазы. Всего у каждого добровольца в течение этапа было забрано 19 образцов крови: до начала приема тестового/референтного препарата (00:00), через 20 мин (00:20), 40 мин (00:40), 1 ч (01:00), 1 ч 20 мин (01:20), 1 ч 40 мин (01:40), 2 ч (02:00), 2 ч 20 мин (02:20), 2 ч 40 мин (02:40), 3 ч (03:00), 3 ч 30 мин (03:30), 4 ч (04:00), 5 ч (05:00), 6 ч (06:00), 8 ч (08:00), 10 ч (10:00), 14 ч (14:00), 24 ч (24:00), 48 ч (48:00) после приема препаратов.

Образцы крови отбирались с помощью кубитального гепаринизированного катетера, установленного в вену за 60-30 мин до приёма тестового/референтного препарата и удаленного после забора образца крови во временной точке 12 ч после приема препаратов. Далее отбор образцов крови осуществлялся посредством венепункции (с использованием вакуумных пробирок с цитратом натрия в качестве антикоагулянта). В каждую вакуумную пробирку отбиралось до 6 мл крови, пробирки осторожно перемешивали путем переворачивания 8-10 раз, не более чем через 30 мин центрифугировались при 1500 оборотах/мин с холодовым режимом +4±2^ С в течение 10 мин для отделения плазмы. Каждый образец плазмы разделялся на две аликвоты путем переноса в пластиковые криопробирки и замораживался при температуре не выше -25^ C.

Анализ концентрации действующих веществ в образцах. Исследование биоэквивалентности было проведено путем определения концентраций свободного и общего дабигатрана в плазме крови добровольцев с использованием валидированной методики высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией согласно требованиям для биоаналитических методов ³. В качестве внутреннего стандарта использовали дабигатран-d3. Анализ полученных образцов проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе Agilent 1260 Infinity II с масс-спектрометрической электроспрей-ионизацией и квадрупольным масс-анализатором Agilent G6470B.

Нижний предел количественного определения свободного и общего дабигатрана в плазме крови составил 0,50 нг/мл (диапазон определяемых концентраций 0,50-400 нг/мл).

Статистический анализ. Статистический анализ параметров фармакокинетики проводили с помощью компьютерных программ Statistica 10.0, R 4.3.2 (Package "bear" 2.9.1 и "replicateBE" 1.1.3) и Microsoft Office Excel 2013. Пакет "bear" полностью валидирован относительно современного коммерческого программного обеспечения — WinNonlin. Математико-статистический анализ параметров безопасности осуществляли с использованием пакетов Microsoft Excel 2013 с надстройками AtteStat, XLStat и Statistica 10.0.

На основании полученных значений концентраций свободного и общего дабигатрана в плазме крови добровольцев в предусмотренные временные интервалы были определены и/или вычислены следующие фармакокинетические показатели: С_max — максимальная концентрация лекарственного вещества в крови добровольцев; T_max — время достижения С_max; AUC_0-t — суммарная площадь под кривой концентрации препарата от момента его попадания в организм до t-часа; AUC_0-∞ — площадь под кривой "концентрация-время" в интервале времени от 0 до бесконечности; AUC_t-∞ — остаточная (экстраполируемая) площадь под кривой; T_1/2 — период полувыведения; AUC_0-t/AUC_0-∞ — отношение площади под кривой "концентрация-время" за время наблюдения к расчетной площади под кривой "концентрация-время" от нуля до бесконечности; f' — относительная биодоступность (AUC_0-t(T)/AUC_0-t(R)); f'' — относительная скорость абсорбции (C_max(T)/C_max(R)). В тексте, согласно протоколу исследования, нормально распределенные данные представлены в виде GM±SD, ассиметрично распределенные — Me (Min; Max). Сравнительный анализ фармакокинетических параметров проводили с помощью непараметрического U-теста Манна-Уитни (Mann-Whitney test) или критерия Стьюдента для независимых выборок (t-test for independent samples) при нормальном распределении (нетрансформированные данные, двусторонний тест).

Оценка биоэквивалентности препаратов производилась путем сравнения границ доверительных интервалов (ДИ) для отношения геометрических средних или медиан показателей AUC_0-∞, AUC_0-t и C_max после приема исследуемого и референтного препаратов с установленными границами эквивалентности, равными 80,00-125,00% согласно пункту 81 раздела "Анализируемые параметры и допустимые пределы" ⁴. AUC_0-∞ использовался в качестве дополнительного параметра в связи с тем, что значение AUC_0-t превышало 80% значения AUC_0-∞. Для установления биоэквивалентности использовался дисперсионный анализ (ANOVA) логарифмически преобразованных показателей дабигатрана, необходимых для оценки биоэквивалентности (AUC_0-∞, AUC_0-t и C_max).

Исследование проведено при финансовой поддержке фармацевтической компании ООО "НТФФ "ПОЛИСАН" (Россия).

Результаты и обсуждение

Безопасность

На протяжении всего исследования как препарат T, так и R хорошо переносились добровольцами. Жизненно важные показатели (систолическое артериальное давление, диастолическое артериальное давление, частота сердечных сокращений, частота дыхательных движений, температура тела), параметры инструментальных (электрокардиограмма) и лабораторных исследований на протяжении всего исследования не выходили за пределы референтных интервалов. В ходе проведения исследования было зарегистрировано 32 нежелательных явления (НЯ). Все зарегистрированные НЯ по степени тяжести были легкими. Из них связь с препаратом была вероятной в 15 случаях (46,9%), возможной в 2 случаях (6,3%) и сомнительной в 15 случаях (46,9%) (табл. 1). Наиболее частыми НЯ были головная боль и анемия. Другими НЯ были желудочно-кишечные нарушения (тошнота, боль в животе и флатуленция), сонливость, головокружение, тромбоцитопения, удлинение активированного частичного тромбопластинового времени, повышение артериального давления, снижение аппетита и кровоточивость десен. Данные НЯ перечислены в брошюре исследователя. Во всех 32 случаях каких-либо действий не требовалось.

Фармакокинетические параметры и оценка биоэквивалентности

Фармакокинетические параметры ДЭ в плазме крови добровольцев. Основой для оценки биоэквивалентности являлись концентрации общего и свободного дабигатрана в плазме крови добровольцев. По результатам анализа концентрации общего и свободного дабигатрана в плазме крови добровольцев были рассчитаны значения основных параметров фармакокинетики тестового и референтного препаратов. Обобщённые фармакокинетические параметры общего дабигатрана представлены в таблице 2. Сравнительный анализ фармакокинетических параметров препаратов T и R по общему дабигатрану показал, что р-значения для большинства изучаемых показателей были больше 0,05, что свидетельствовало об отсутствии статистически значимых различий между ними. Статистически значимые различия средних установлены только для показателя T_1/2 (р=0,033), которые не относятся к числу основных фармакокинетических параметров.

Обобщённые фармакокинетические параметры свободного дабигатрана у добровольцев после введения препаратов представлены в таблице 3. Сравнительный анализ фармакокинетических параметров препаратов T и R по свободному дабигатрану показал, что р-значения для большинства изучаемых показателей были больше 0,05, что свидетельствовало об отсутствии статистически значимых различий между ними. Статистически значимые различия установлены только для медианных значений показателей T_1/2 (р=0,001) и AUC_t-∞ (р=0,013), которые не относятся к числу основных фармакокинетических параметров.

Усредненные значения изменения концентрации общего дабигатрана во времени (точках забора препарата) в линейных и полулогарифмических шкалах, соответственно, после однократного приема изучаемых препаратов представлены на рисунках 2 и 3. Как видно из представленных в графическом виде данных, фармакокинетические профили сравниваемых препаратов существенно не отличались, как в линейных координатах, так и для логарифмически преобразованных значений концентрации. Следует отметить более низкий уровень профиля для препарата Т в большинстве анализируемых точек.

Усредненные значения изменения концентрации свободного дабигатрана во времени в линейных и полулогарифмических шкалах, соответственно, после однократного приема изучаемых препаратов представлены на рисунках 4 и 5. Как видно из представленных в графическом виде данных, фармакокинетические профили сравниваемых препаратов существенно не отличались, как в линейных координатах, так и для логарифмически преобразованных значений концентрации. Необходимо отметить, что, как и для общего дабигатрана, наблюдали более низкий уровень профиля для препарата Т в большинстве анализируемых точек.

Оценка биоэквивалентности. Биоэквивалентность тестового и референтного препаратов оценивали на основании фармакокинетических данных общего и свободного дабигатрана с использованием ANOVA. Препараты считались биоэквивалентными, если границы оцененного ДИ для AUC_0-t, AUC_0-∞ и C_max находились в пределах 80,00-125,00%. Рассчитанные значения 90% ДИ для отношения средних геометрических значений фармакокинетических параметров AUC_0-t, AUC_0-∞ и C_max и коэффициенты внутрииндивидуальной вариации (CV_intra) для Т и R по общему и свободному дабигатрану приведены в таблицах 4 и 5.

Полученные ДИ ФКП общего и свободного дабигатрана для AUC_0-t, AUC_0-∞ и С_max лежат в пределах, установленных руководящими документами, что говорит о том, что исследуемые препараты биоэквивалентны.

Заключение

В рамках регистрации воспроизведенного препарата Дабигатрана этексилат было проведено исследование его биоэквивалентности относительно препарата Прадакса^® при однократном приеме 150 мг ДЭ здоровыми добровольцами натощак. На основании полученных данных сделано заключение, что исследуемые препараты характеризуются высокой степенью сходства показателей фармакокинетики. Индивидуальные и усредненные профили фармакокинетических кривых воспроизведенного и референтного препаратов ДЭ имеют совпадающие формы. Исследуемые препараты характеризуются близкими значениями показателей относительной биодоступности ДЭ. ДИ для отношений средних геометрических значений оцениваемых показателей тестового и референтного препаратов ДЭ полностью соответствуют установленным пределам.

Также был показан благоприятный профиль безопасности и удовлетворительная переносимость препарата Дабигатрана этексилат, сопоставимые с профилем референтного препарата Прадакса^®.

Таким образом, выполненное исследование позволяет констатировать биоэквивалентность воспроизведенного препарата Дабигатрана этексилат, капсулы, 150 мг (ООО "НТФФ "ПОЛИСАН", Россия) относительно референтного препарата Прадакса^®, капсулы, 150 мг ("Берингер Ингельхайм Интернешнл ГмбХ", Германия).

Отношения и деятельность. Исследование проведено при финансовой поддержке фармацевтической компании ООО "НТФФ "ПОЛИСАН" (Россия).