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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 1995 １０例原发性肝癌手术切除的肿瘤标本用于分离培养肿瘤浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ）。分离制备ＴＩＬ采用机械剪切，酶消化和用Ｆｉｃｏｌｌ－Ｈｙｐａｑｕｅ分离结合的方法。分离制得的ＴＩＬ以一定浓度于含ｒＩＬ－２１０００Ｕ／ｍｌ，ＰＨＡ２０μｇ／ｍｌ的ＲＰＭＩ１６４０完全培养液中，在５％ＣＯ２，３７℃条件下培养３０～４０ｄ。实验观察了ＴＩＬ悬液中的细胞组成、ＴＩＬ的体外扩增及肿瘤细胞的消失情况；用透射电镜观察了培养前后ＴＩＬ的超微结构变化；实验采用免疫组化和单克隆抗体技术（ＡＢＣ法 ...
doaj
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2013 目的体外分离、培养、扩增及鉴定人脂肪来源干细胞（human adipose-derived stem cells,hASCs）,并向成骨诱导分化,为临床骨组织重建提供种子细胞。方法应用胶原酶消化法和贴壁筛选法相结合从人手术切除的脂肪组织中提取hASCs。MTS法绘制hASCs生长曲线;利用流式细胞术检测hASCs表面标志;以低糖DMEM含10%FBS及1%青/链霉素为基础培养基,含1nM地塞米松,10mM磷酸甘油,0.05mM维生素C的条件培养基连续培养4w进行体外成骨诱导,并利用硫酸茜红素S ...
赵强 +4 more
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Establishment and Application of Pseudoviruses Neutralization Model for Human Papillomaviruses [PDF]
, 2006 人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV）感染能引起宫颈癌、生殖器疣等多种性传播疾病，严重危害着人类健康。由于HPV的生活周期依赖于上皮细胞的分化，传统的细胞培养方法不能实现HPV的扩增，同时从病人组织中分离的病毒也极其有限，这制约了HPV的分子生物学研究和HPV疫苗的保护性评价。研究人员已经发展出多种系统以克服病毒来源不足的限制：通过组织移植和筏式组织培养扩增一些HPV型的病毒，以及用重组痘病毒、腺病毒、酵母表达构建HPV假病毒。但是这些病毒/假病毒生产方法的操作较复杂，效率均不高，
卢五迅
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, 2006 【目的】探讨颞下颌关节盘纤维软骨细胞的分离及体外扩增的条件，观察关节盘纤维软骨细胞体外培养的生物学特性。【方法】在无菌条件下，切取2周龄新西兰白兔颞下颌关节盘，剪至1．0m^3的碎块，0．5g／mL胰酶消化30min、胶原酶消化4h，200目筛网过滤，获得关节盘纤维软骨细胞。在倒置显微镜下连续观察细胞的形态变化及贴壁率，甲苯胺蓝染色、、胶原免疫组化染色鉴定，测定其生长曲线。透射电镜观察细胞超微结构。【结果】原代培养的关节盘纤维软骨细胞12h可观察到贴壁细胞，48h贴壁细胞逐渐增多，大部分细胞为短梭形 ...
何一青 +5 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2006 目的研究甲胎蛋白对树突状细胞免疫功能的影响。方法用流式细胞仪分析体外培养扩增的人外周血树突状细胞表面分子的表达及功能变化。MTT法分析树突状细胞增殖情况。结果甲胎蛋白可抑制人外周来源树突状细胞增殖,下调DC共刺激分子CD1a、CD83、CD80、CD86、CD11c的表达,甲胎蛋白的免疫抑制效应与其浓度有关。结论甲胎蛋白下调抑制树突状细胞生长及其免疫功能。
池诏丞, 王广义, 徐凯成, 赵岳
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Construction of eukaryotic vector pcDNA3.1-flag-pygo2 and expression in C6 cell [PDF]
, 2008 目的构建pcDNA3.1-flag-pygo2真核表达载体并在C6细胞中进行表达。方法从小鼠脑胶质细胞中提取总RNA,RT-PCR法反转录合成c DNA,设计引物,调取目的片段,与pcDNA3.1-flag载体连接后转化大肠杆菌DH5α,LB平板筛选菌落,提取质粒。重组质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经过酶切鉴定及测序后,阳离子脂质体法转染C6细胞并经免疫细胞化学染色及蛋白印迹检测重组体的表达。结果重构质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经限制性核酸内切酶EcoRⅠ ...
王占祥 +5 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 1995 应用多聚酶链反应技术体外扩增２０例初治或复发的急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）Ｔ细胞抗原受体，（ＴＣＲγ）基因重排，结果显示：１５例病人出现约４００ｂｐ的扩增产物，阳性检出率为７５％（１５／２０），产物电泳带位置略有差异提示其重排亚型的多样性。标准人急性Ｔ淋巴细胞白血病细胞株ＣＣＲＦ－ＣＥＭ细胞携带ＴＣＲγ基因重排，为阳性对照；而正常骨用及Ｒａｊｉ细胞检测阴性，为阴性对照。用系列稀释法证明本实验敏感性在１０－５水平以上。我们还探讨了该法在急性淋巴细胞白血病基因诊断 ...
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2006 【目的】构建携带大鼠脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）目的基因的复制缺陷型重组腺病毒，并初步检测其体外表达目的基因的能力。【方法】提取大鼠脑组织总RNA，使用RT—PCR方法扩增BDNF目的基因并将其克隆入pMD18-T Simple载体测序，将测序完全正确的BDNF目的基因克隆入pShuttle2中，然后利用体外连接法将BDNF目的基因克隆入Adeno—X^TM腺病毒骨架中。Lipofectamine^TM ...
王鹏 +6 more
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, 1992 建立检测血清HBV DNA的多聚酶链反应技术。人工合成adr、adw和ayw三个业型HBV的两个共有序列NC1和NC2作为引物扩增一长428bp且含一BglⅡ酶切点的HBV C基因片段。含FD酶的反应体系在水浴93℃30秒、55℃60秒、72℃90秒依序循环30周期,当克隆HBV DNA模板最小加量为10 fg时,产物作琼脂糖凝胶电泳经溴化乙锭染色在紫外线下观察仍可见428 bp位置的阳性荧光带。阳性产物经BgⅠⅡ酶切后分为125 bp和303 bp的两个特异片段。同一条件下的阴性对照则出现阴性结果 ...
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2009 【目的】 探讨犬骨髓基质干细胞的提取。分离和体外扩增的最佳条件,研究其在体外培养中定向诱导分化为软骨样细胞的可能。【方法】 从幼年犬骨髓中分离基质干细胞进行培养扩增,观察其生长特性,体外应用碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)和转化生长因子-B1(TGF-B1)对第3代传代细胞诱导分化,并通过细胞的染色和Ⅱ型胶原免疫组化鉴定诱导分化细胞的类型。【结果】 原代培养时形成由基质干细胞组成的细胞集落融合周期约6 ~ 9 d左右。第3代传代细胞经碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)和转化生长因子(TGF-B1 ...
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