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野生动物学报, 2012 由于火烈鸟在外观上雌雄极为相似,很难用常规方法对其性别进行鉴定。本试验首次确立了利用PCR技术对火烈鸟性别进行鉴定的分子标记方法。从火烈鸟血液中提取总基因组DNA,针对性染色体上的CHD基因和EE0.6序列,筛选了4对引物进行特异性扩增,其中3对引物组合成2个组（A/B和B/C）进行多重PCR。结果表明,3组引物都在雄性个体中扩增出1条片段,在雌性中扩增出2条片段;待测群体中雄性个体11只,雌性个体6只。经检验,利用3组引物都能准确鉴定火烈鸟性别,为该物种在分子水平上的性别鉴定奠定了基础。
李文斌 +5 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2005 【目的】构建人神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)受体(即酪氨酸蛋白激酶受体C, tyrosine protein kinase C, TrkC)基因重组的腺病毒表达载体。【方法】从人脑组织mRNA 中扩增TrkC 基因全长cDNA, 定向克隆于穿梭质粒pShuttle 中, 获得一个带有CMV 启动子的表达盒。再将表达盒与腺病毒骨架DNA ( Adeno-X viral DNA) 体外连接, 形成重组腺病毒质粒(pAd-TrkC)。用pAd-TrkC 转染人胚肾293 ...
王俊梅 +6 more
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TLR-2信号途径对新生儿免疫系统在淋巴细胞增殖和调节性T细胞扩增方面的影响
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2006 目的探讨TLR-2（Toll like receptor-2）信号途径对新生儿免疫系统在淋巴细胞增殖和调节性T细胞（Treg）扩增方面的影响及其与成人免疫系统的差别。方法应用TLR-2的配体-肽聚糖（PPG）和有丝分裂原-植物凝血素（PHA）刺激胎儿脐带血单核淋巴细胞（CBMC）和成人外周血单核淋巴细胞（PBMC）,然后采用3H胸腺嘧啶掺入法测淋巴细胞增殖情况及流式细胞技术检测活化T细胞,Treg细胞扩增情况。结果PPG和PHA刺激后,CBMC淋巴细胞总体明显增殖（P0.05）。PPG和PHA刺激后 ...
刘晶, 赵洪艳
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2012 目的探讨人骨髓间充质细胞（hMSC）在体内向造血细胞分化的潜能和造血重建能力。方法首先建立hMSC的分离培养扩增体系,以hMSC为供体细胞,亚致死剂量射线照射后的裸鼠为受体,通过病理、免疫组化、流式细胞术等方法观察hMSC在体内向造血细胞分化能力。结果将体外分离扩增的hMSC移植给亚致死剂量照射后的裸鼠,移植后第6周外周血白细胞明显恢复并接近正常水平。移植后8周裸鼠骨髓细胞增生活跃,可见各个阶段的细胞。通过流式细胞术、免疫组化的方法在骨髓中可以检测到CD34和CD45阳性的细胞,且能够形成造血祖细胞集落（
陈晓 +5 more
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pEgr-hPTEN体外稳定转染对人脑胶质瘤SHG-44细胞周期及增殖的影响
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2004 目的 探讨外源野生型PTEN基因对人脑胶质瘤SHG 4 4细胞周期及增殖的影响 ,阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法 脂质体包裹重组质粒pEgr hPTEN体外转染内源性PTEN基因突变的SHG 4 4胶质瘤细胞 ;G4 18筛选稳定表达细胞株并扩增培养 ;采用细胞计数法检测肿瘤细胞增殖速度 ;流式细胞术检测肿瘤细胞周期的变化。结果 经 10到 2 0dG4 18筛选得到稳定表达细胞株 ;重组质粒pEgr hPTEN稳定转染可明显抑制SHG 4 4细胞的体外增殖 ,细胞周期明显改变 ...
田梅, 朴春姬, 李修义, 杨巍
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间充质干细胞和内皮祖细胞对脐血造血干/祖细胞体外扩增效力的影响
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2012 目的比较脐带来源的间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）和内皮祖细胞（Endothelial progeni-tor cells,EPCs）对脐血造血干/祖细胞（Hematopoietic stem/progenitor cells,HSCs/HPCs）的体外扩增效力。方法正常人脐血中分离单个核细胞（Mononuclear cells,MNCs）,流式细胞术检测其中HSCs/HPCs所占比例,将MNCs分别接种于处理后的MSCs或EPCs或仅接种于培养液中 ...
迟玥, 段海峰, 于庭
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2001 【目的】丹参注射液体外定向诱导成人骨髓间质干细胞(MSC)分化为神经元样细胞。【方法】采用Ficoll-Paque 液离心分离成人MSC , 体外扩增, 流式细胞仪检测MSC 表面抗原表达, 分别采用含丹参注射液或硫代甘油等试剂的无血清达 乐伯克改良必需基本培养基(DMEM)诱导MSC 分化为神经元, 免疫组化鉴定神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白 (NF-M)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、巢蛋白(nestin)的表达。【结果】成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得0.5×106 ...
项 鹏
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2015 目的本研究拟构建人乳腺癌T7噬菌体展示文库,为进一步筛选特异性高的乳腺癌分子标志物原奠定基础。方法确诊乳腺癌患者手术标本20例,Trizol法提取总RNA,逆转录合成双链cDNA后,与T7Select 10-3载体连接,体外包装并扩增得到人乳腺癌T7噬菌体展示cDNA文库。结果构建了乳腺癌T7噬菌体展示cDNA文库,文库滴度2.1×107pfu/ml。随机从文库抽取50个克隆PCR扩增插入片段,电泳结果显示乳腺癌文库插入率98%(49/50)。结论成功构建了乳腺癌T7噬菌体展示cDNA文库 ...
韩冬, 徐煌, 肖燕萍
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2002 【目的】利用聚合酶链反应(PC R)技术对Wilson 病(WD)基因进行体外定点突变的研究。【方法】采用PCR 定点 突变技术, 首先设计两对引物, 将突变位点设计在引物上, 通过重叠延伸法两次PCR 扩增, 扩增片段上含有所需要的突变位 点, 最后将扩增片段克隆入pRc/ CMV 载体中。【结果】DNA 测序表明在预期位点已经发生突变,WD 基因第778 位密码子由 精氨酸(Arg)残基突变为亮氨酸残基(Leu), 用PCR 定点突变技术成功构建Wilso n 病基因突变体。【结论】PCR ...
闫振文 +4 more
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五种基于CHD基因的性别鉴定方法对雀形目鸟类有效性的实验评估
野生动物学报, 2019 性别鉴定是鸟类研究和保护中的一项基础工作。对于单态型鸟类，通过外观判定性别比较困难。已有的一些方法，如体尺测量、鸣声判定、翻肛鉴别、腹腔镜检、类固醇水平测定和核型分析等，要么可靠性不高，要么操作过程繁琐，要么对鸟体带来伤害。染色体螺旋蛋白结合基因（CHD）在Z和W染色体上内含子的大小存在差异，设计PCR引物来同时扩增Z、W染色体上的内含子片段，有差异者便可判定为雌性，无差异者判定为雄性。目前，常用的引物有5对，分别是P2/P8、2550F/2718R、CHD1F/CHD1R、sex1/sex ...
苏倡1李显达2邢晓莹1李波1 +2 more
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