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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 1996 选取５株ＨＣＶ共有序列合成一时５’端加端引物。上游加端为ＥｃｏＲⅠ切点，下游加端为ＢａｍＨＩ切点。以ＲＴ－ＰＣＲ扩增一长为５７８ｂｐ的ｃＤＮＡ作目的基因，相应酶切后，反向插入ＰＵＣ１８的多克隆位点，构建ｐＵＨＣ－Ｃ重组体。分别或混合应用ＨＣＶ特异内外引物和ｐＵＣ特异通用引物以ＰＣＲ扩增重组体，扩增产物分子片段均同预期一致。测序表明克隆基因与ＨＣＶ－ＣＨＮ最同源，在所测ＣＥ４９７个核苷酸及由之推导的１６０个氨基酸区域内。其核苷酸与氨基酸同源性都是９７．５％。
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Epstein-Barr 病毒DNA 多聚酶基因扩增和表达载体构建
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2000 【目的】扩增Epstein-Barr 病毒(EBV)DNA 多聚酶基因, 构建高效表达载体。【方法】根据EBV 全基因序列, 在 EBV DNA 多聚酶基因的3′、5′端设计一对附加EcoRⅠ 和Hind Ⅲ 酶切位点的特异性引物, 以B95-8细胞DNA 为模板, 采用改良 PCR 方法扩增出EBV DNA 多聚酶基因(3 044 bp)。用EcoRⅠ 和Hind Ⅲ 酶切该基因片断并克隆至表达载体pMAL-p2, 采用 蓝白斑试验筛选阳性菌落。EcoRⅠ 和Hin dⅢ 酶切分析 ...
谢民强, 杨 林
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2013 目的体外分离、培养、扩增及鉴定人脂肪来源干细胞（human adipose-derived stem cells,hASCs）,并向成骨诱导分化,为临床骨组织重建提供种子细胞。方法应用胶原酶消化法和贴壁筛选法相结合从人手术切除的脂肪组织中提取hASCs。MTS法绘制hASCs生长曲线;利用流式细胞术检测hASCs表面标志;以低糖DMEM含10%FBS及1%青/链霉素为基础培养基,含1nM地塞米松,10mM磷酸甘油,0.05mM维生素C的条件培养基连续培养4w进行体外成骨诱导,并利用硫酸茜红素S ...
赵强 +4 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 1995 １０例原发性肝癌手术切除的肿瘤标本用于分离培养肿瘤浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ）。分离制备ＴＩＬ采用机械剪切，酶消化和用Ｆｉｃｏｌｌ－Ｈｙｐａｑｕｅ分离结合的方法。分离制得的ＴＩＬ以一定浓度于含ｒＩＬ－２１０００Ｕ／ｍｌ，ＰＨＡ２０μｇ／ｍｌ的ＲＰＭＩ１６４０完全培养液中，在５％ＣＯ２，３７℃条件下培养３０～４０ｄ。实验观察了ＴＩＬ悬液中的细胞组成、ＴＩＬ的体外扩增及肿瘤细胞的消失情况；用透射电镜观察了培养前后ＴＩＬ的超微结构变化；实验采用免疫组化和单克隆抗体技术（ＡＢＣ法 ...
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2006 目的研究甲胎蛋白对树突状细胞免疫功能的影响。方法用流式细胞仪分析体外培养扩增的人外周血树突状细胞表面分子的表达及功能变化。MTT法分析树突状细胞增殖情况。结果甲胎蛋白可抑制人外周来源树突状细胞增殖,下调DC共刺激分子CD1a、CD83、CD80、CD86、CD11c的表达,甲胎蛋白的免疫抑制效应与其浓度有关。结论甲胎蛋白下调抑制树突状细胞生长及其免疫功能。
池诏丞, 王广义, 徐凯成, 赵岳
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 1995 应用多聚酶链反应技术体外扩增２０例初治或复发的急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）Ｔ细胞抗原受体，（ＴＣＲγ）基因重排，结果显示：１５例病人出现约４００ｂｐ的扩增产物，阳性检出率为７５％（１５／２０），产物电泳带位置略有差异提示其重排亚型的多样性。标准人急性Ｔ淋巴细胞白血病细胞株ＣＣＲＦ－ＣＥＭ细胞携带ＴＣＲγ基因重排，为阳性对照；而正常骨用及Ｒａｊｉ细胞检测阴性，为阴性对照。用系列稀释法证明本实验敏感性在１０－５水平以上。我们还探讨了该法在急性淋巴细胞白血病基因诊断 ...
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2006 【目的】构建携带大鼠脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）目的基因的复制缺陷型重组腺病毒，并初步检测其体外表达目的基因的能力。【方法】提取大鼠脑组织总RNA，使用RT—PCR方法扩增BDNF目的基因并将其克隆入pMD18-T Simple载体测序，将测序完全正确的BDNF目的基因克隆入pShuttle2中，然后利用体外连接法将BDNF目的基因克隆入Adeno—X^TM腺病毒骨架中。Lipofectamine^TM ...
王鹏 +6 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2009 【目的】 探讨犬骨髓基质干细胞的提取。分离和体外扩增的最佳条件,研究其在体外培养中定向诱导分化为软骨样细胞的可能。【方法】 从幼年犬骨髓中分离基质干细胞进行培养扩增,观察其生长特性,体外应用碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)和转化生长因子-B1(TGF-B1)对第3代传代细胞诱导分化,并通过细胞的染色和Ⅱ型胶原免疫组化鉴定诱导分化细胞的类型。【结果】 原代培养时形成由基质干细胞组成的细胞集落融合周期约6 ~ 9 d左右。第3代传代细胞经碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)和转化生长因子(TGF-B1 ...
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2008 目的建立大鼠骨髓间质干细胞（rat mesenchymal stemcells,rMSCs）体外分离、纯化及扩增的方法及诱导rM-SCs向成骨分化,并进一步研究,提供理想的种子细胞。方法采用贴壁筛选法分离rMSCs,并通过不断传代进行纯化和扩增培养,检测rMSCs生长周期,绘制细胞生长曲线。检测碱性磷酸酶活性,钙结节的形成。结果rMSCs在体外分离培养扩增,rMSCs形态呈长梭形,细胞周期显示第3代MSCs约有81.48%的细胞处于G0/G1期,细胞生长曲线呈S形。经地塞米松、β-甘油磷酸钠 ...
罗宗键 +4 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2003 目的 制备人TRAIL配体胞外区基因工程蛋白。方法 应用RT PCR技术从激活的人外周血淋巴细胞总RNA中扩增TRAIL配体胞外区cDNA ,克隆入PCR2 .1 载体 ,测序验证后用基因重组法构建了TRAIL配体胞外区和组氨酸盒的原核表达质粒pQE hTRAIL。将重组质粒转入大肠杆菌M15中表达 ,经 1mmol LIPTG在 37℃条件下诱导 4h ,亲和层析柱纯化。用SDS -PAGE电泳和Westernblot鉴定表达产物。结果 所表达融合蛋白为人TRAIL配体胞外区分子 ,分子量 30kD ...
路丽明 +8 more
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