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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2007 目的在大肠杆菌中表达、纯化结核分枝杆菌Rv0173抗原,为研制新型结核病疫苗打下基础。方法将结核杆菌抗原Rv0173的全长cDNA插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建成Rv0173重组质粒。将重组质粒转入大肠杆菌BL21后用IPTG进行诱导表达,通过SDS-PAGE和Western-blot鉴定重组表达蛋白。结果获得了pGEX4T-Rv0173重组子,Rv0173蛋白在BL21菌中获得表达,表达的蛋白条带大小约45KD,与预期结果相符 ...
蒋天舒 +7 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2007 目的构建人白细胞介素-15（interleukin 15,IL-15）原核表达克隆并在大肠杆菌中表达。方法从经脂多糖刺激的外周血单核细胞中提出mRNA,RT-PCR扩增出IL-15成熟肽前体蛋白基因,构建原核表达克隆（PGEX-4T-2/IL-15）。IPTG诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白图谱。Western blot鉴定表达蛋白。结果经酶切和测序分析,表明成功构建了pGEX-4T-2/IL-15原核表达克隆;经IPTG诱导,转化的大肠杆菌表达出相对分子质量（Mr）为42 ...
董学东, 朱元祺, 姜岩
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小鼠分泌型内皮抑素原核表达载体pFLAG-ssEndostatin的构建
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建带有小鼠分泌型内皮抑素（ssEndostatin）的原核表达载体pFLAG-ssEndostatin。方法利用分子生物学方法,采用Kpn I内切酶将ssEndostatin从pcDNA3.1-Egr1-ssEndostatin质粒上切下,然后连接到pFLAG表达载体上,构建成原核表达载体pFLAG-ssEndostatin,并对其进行PCR、酶切鉴定。结果经酶切、PCR鉴定,所构建的原核表达质粒pFLAG-ssEndostatin与预测的一致 ...
杨志广 +4 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2014 目的人博卡病毒（HBoV）是近几年发现的一种导致人支气管炎的病原体,本研究旨在表达纯化其VP1衣壳蛋白独有区（VP1-U）抗原,为免疫学诊断治疗奠定基础。方法优化HBoV VP1-U DNA密码子,以适应大肠杆菌原核表达密码子亲嗜性。将密码子优化改造的DNA序列克隆到pET30a（+）原核表达载体,C末端融合表达组氨酸亲和纯化标签。LB培养基增菌,IPTG诱导表达。采用自行设计的纯化缓冲液体系,镍株亲和纯化,超滤浓缩。结果VP1-U蛋白表达效率约为50%,纯化活性蛋白浓度为3.3mg/ml ...
漆正宇, 龚英浩
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Survivin、Ki-67核抗原在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的表达意义
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的探讨生存素（Survivin）、Ki-67核抗原在宫颈癌和宫颈上皮内瘤变（CIN）中的表达及生物学意义。方法采用免疫组化S-P法,检测26例宫颈癌,78例宫颈上皮内瘤变（CINⅠ28例,CINⅡ23例,CINⅢ27例）及12例正常宫颈组织中Survivin、Ki-67的表达水平。结果 Survivin、Ki-67核抗原在正常宫颈组织、CIN及宫颈癌中的表达依次递增,Ki-67核抗原的表达随Survivin表达增加而上升,统计学上差异有显著意义 ...
田琦, 吕胜军
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2012 目的构建GRIM-19及其截断体原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达并纯化融合蛋白。方法用RT-PCR法从HeLa细胞中扩增出带BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点的GRIM-19及其截断体基因片段,将GRIM-19及其截断体基因片段克隆到pGEX-4T-3原核表达载体上,在大肠杆菌中诱导表达GST-GRIM-19及其截断体融合蛋白,用Glutathione Sepharose 4B纯化,纯化后蛋白经Western-blot鉴定。结果 pGEX-4T-3-GRIM-19及其截断体原核表达载体构建正确 ...
王青元 +5 more
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Survivin、Ki-67核抗原在涎腺基底细胞腺瘤、癌中的意义
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的探讨涎腺基底细胞腺瘤、癌中survivin表达与Ki-67核抗原表达的相关性,了解其在肿瘤恶性增殖及良恶性肿瘤鉴别诊断中的意义。方法应用免疫组织化学方法检测15例正常涎腺组织、28例涎腺基底细胞腺瘤、23例基底细胞腺癌组织中survivin及Ki-67核抗原的表达;RT-PCR分析2例涎腺基底细胞腺瘤及2例涎腺基底细胞腺癌survivin、Ki-67的mRNA表达水平。结果 Survivin及Ki-67核抗原在正常涎腺组织、基底细胞腺瘤、基底细胞腺癌中的表达依次递增,差异有统计学意义 ...
符良斌 +5 more
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丙肝核心抗原-CD40L胞外段真核表达载体的构建及其免疫原性分析
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2013 目的构建丙肝核心抗原-CD40L胞外段融合蛋白真核表达载体,并探讨其免疫原性。方法应用基因重组技术在原有载体的基础上构建真核表达载体pcDNA3.1-core-CD40L并加以鉴定。该表达质粒肌肉内注射免疫小鼠,ELISA法检测小鼠外周血中抗丙肝核心抗体,流式细胞仪检测小鼠外周血T淋巴细胞亚型,real time PCR法检测外周血单个核细胞内细胞因子,CTL杀伤实验检测小鼠脾淋巴细胞的杀伤活性。结果构建了真核表达载体pcD-NA3.1-core-CD40L ...
陈佳玉 +4 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2008 目的进一步分析优化结核杆菌抗原优势表位,获得高特异性融合抗原,以满足研制结核病检测试剂的需要。方法用分子生物学软件分析结核杆菌四种抗原MPT64、Mtb8、Mtb8.4和Mtb16.3的优势表位后,分别插入到pBVIL1载体中,构建表达质粒,并利用pBVIL1载体特点,将其基因连接后,进行融合表达,经纯化获得抗原,用间接ELISA法测其活性。结果各抗原优势肽段及融合抗原均获得了高效表达,融合抗原的特异性和灵敏性均高于各单一肽段。结论此融合抗原可用于研制结核病的诊断试剂。
宋晓国 +7 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建小鼠分泌型γ干扰素（IFN-γ）原核表达载体pFLAG-IFN-γ。方法利用分子生物学方法,从pcD-NA3.1-Egr1-IFN-γ质粒上将IFN-γ切下,然后连接到原核表达载体pFLAG-shift12TM上,构建成pFLAG-IFN-γ表达载体,进行PCR、酶切鉴定。结果经鉴定,所构建的质粒pFLAG-IFN-γ的鉴定结果与预期的一致。结论成功地构建了带有分泌信号的原核表达载体pFLAG-IFN-γ。
刘林林 +5 more
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