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Snail基因慢病毒载体的构建及其促进结肠癌细胞上皮间质化的研究
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2012 【目的】 构建Snail基因慢病毒载体,研究Snail基因的表达与结肠癌细胞上皮间质化的关系。【方法】 利用Gateway Technology法构建Snail基因表达质粒和空白对照质粒,行慢病毒包装,成功构建Snail基因慢病毒载体后,在结肠癌细胞系caco2中转染Snail基因质粒及空白载体对照,构建稳转细胞株caco2- Snail和caco2-vc,并在LoVo细胞中瞬时转染上述质粒,对Snail及E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达进行检测,并用划痕 ...
doaj
Exonuclease Ⅲ-mediated DNA Molecular Cloning [PDF]
, 2016 DNA克隆技术,作为最基本的现代分子生物学实验技术之一,已经成为生物医学研究领域的重要研究手段。传统的分子克隆方法需要经过限制性内切酶酶切和DNA连接酶连接的步骤,是否存在合适的酶切位点和DNA连接酶的效率成为影响克隆的重要限制因素。本文描述了一种由外切核酸酶Ⅲ介导的,以3'-5'外切核酸酶活性和细菌细胞内DNA修复机制为理论基础的DNA分子克隆方法,称为不依赖连接酶的分子克隆(ligation-independent cloning,LIC);证明了该方法的高效性和可靠性,并进一步对酶的用量、反应温度、
梁耀极, 洪丽欣, 谢昌传
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2011 【目的】探讨PTEN基因在子宫内膜癌PI3K/AKT通路中的作用，评估PTEN基因在抗肿瘤治疗中的意义。【方法】利用慢病毒载体系统, 构建人PTEN基因RNA干扰慢病毒载体和PTEN基因过表达慢病毒载体,分别转染PTEN野生型的HEC-1A细胞和PTEN突变型的Ishikawa细胞, 建立PTEN 基因敲减及过表达的细胞模型，Western Blot方法检测PTEN基因敲减或过表达前后PTEN蛋白的表达和AKT通路的活化情况, MTT法检测慢病毒转染前后细胞增殖的变化 ...
doaj
siRNA对VEGFR2的表达抑制及对HL60细胞和人内皮细胞的影响 [PDF]
, 2006 【目的】为探索治疗白血病的新思路研究了小干扰RNA（siRNA）对肿瘤细胞株HL60和人血管内皮细胞（EC）株EA·hy926血管内皮细胞生长因子受体2（VEGFR2）基因表达的抑制作用。【方法】制备并筛选VEGFR2基因的最有效siRNA，并据此设计shRNA寡核苷酸链，构建pENTR^TM／U6干扰表达载体。瞬时转染细胞．采用MTF法、RT-PCR法及Western blot测定VEGFR2表达抑制情况。【结果】VEGFR2 siRNAa、b、c抑制HL60细胞效率分别为77．5％、45．0％、80．
夏焱 +5 more
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Establishment of MDCK cell lines which stably express visualable human neonatal Fc receptor [PDF]
, 2017 [目的]建立稳定表达融合EGFP的人新生儿Fc受体（h FcRn）的MDCK细胞株。[方法]构建重组慢病毒质粒p EGFP-h FcRn,采用四质粒包装系统共转染HEK 293T细胞生产重组慢病毒,感染MDCK细胞后对EGFP阳性细胞进行流式单细胞分选;通过Western Blot及EGFP-β2m荧光共定位验证h FcRn的完整性,并用流式细胞仪检测h FcRn与人Ig G的结合活性。[结果]测序结果表明成功构建p EGFP-FcRn慢病毒表达载体;感染后EGFP阳性MDCK细胞比例约为26.5 ...
周兵 +6 more
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靶向HIV-1 vif的高效siRNA的筛选及慢病毒介导的体外抗病毒研究 [PDF]
, 2008 RNAi技术在艾滋病治疗研究中已展现出巨大的潜力,兼具高效抑制特性和保守性的siRNA靶位是其获得成功应用的重要基础。本研究选择以HIV-1 vif基因为靶区筛选高效保守的RNAi序列,共选择设计了30个识别不同位点的siRNA序列,以pSUPER为载体构建了相应的shRNA表达质粒。通过与pNL4-3质粒在293FT细胞中进行共转染抑制实验,以及对初筛获得的高效序列进行保守性分析显示siRNA-vif37序列具有高效抑制效率和较好的保守性特征。通过与pGL3-vif报告质粒的共转染实验证明siRNA ...
夏宁邵 +8 more
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Roles of Receptor UNC5B in Vascular Development and Tumor Metastasis [PDF]
, 2012 血管和神经系统都构成复杂的分支网络，遍布身体的各个区域，并提供信息的双向流动（感觉和运动神经元；动脉和静脉血流）。在体内分布上血管和神经纤维也总是相伴而行到达同一远隔靶位，二者在结构和功能上的相似性，暗示着它们可能受到某些共同信号分子调控。很多神经导向因子都参与了对血管生长发育的调节。UNC5B是首个被证实参与血管发育调控的UNC5受体。但目前对于UNC5B在血管发育中的作用因所使用的动物模型以及UNC5B基因敲除后对表型分析的不同而存在很大的争议，争议的焦点在于UNC5B是促进，还是抑制血管的发育 ...
解宏
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Advances in the treatment of adrenoleukodystrophy [PDF]
Adrenoleukodystrophy (ALD) is an X-linked, potentially fatal peroxisome disease, characterized by three main clinical phenotypes: adrenomyeloneuropathy (AMN), cerebral adrenoleukodystrophy (CALD), and primary adrenal insufficiency.
CAO Li, LIU Xiaoli
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The mechanism and function of extracellular matrix protein Mindin in the colon cancer progression [PDF]
, 2015 在世界范围内，结直肠癌是临床上常见的恶性肿瘤之一。结肠癌的发病机制也在不断细致、深入的研究。然而结肠癌这种实体肿瘤不像单纯的肠癌细胞系。相反，它是由多种类型的细胞和细胞外基质组成的功能失调的器官。细胞外基质是肿瘤微环境的重要组成部分，包含各种各样的细胞因子和代谢产物，具有向细胞传导各种环境信号的作用。这些信号对于细胞生命过程的方方面面都必不可少，包括增殖、分化和死亡等。然而，细胞外基质蛋白在结肠癌发生发展的演变过程中的作用尚未完全明确。 分泌型的细胞外基质蛋白Mindin作为Mindin-F ...
肖传兴
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Searching for the novel mediators of LPS/TLR4/MyD88 signalling [PDF]
, 2016 TRAF6蛋白在LPS/TLR4介导的MyD88依赖型的信号通路中起核心的作用，目前已有报道TAK1作为TRAF6的下游底物，与TAB1/TAB2/TAB3形成复合物，进而激活NF-kB、MAPK信号通路，促进细胞炎症因子的释放。但是，随后有实验室利用最新基因敲除技术在小鼠或细胞水平敲掉TAK1、TAB1、TAB2，MEKK3等基因后，用LPS刺激诱导MyD88依赖型信号通路，发现对NF-kB和MAPK信号通路均没有影响。因此，在LPS诱导的LPS/TLR4/MyD88信号通路中 ...
李婉芸
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