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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的研究RNA干扰（RNAi）对BEL7402细胞的N-ras基因表达的干扰效应。方法建立装载靶向N-ras基因小干扰性RNA（siRNA）的表达载体;用脂质体法将此表达载体转染BEL7402细胞株,以转染空载细胞作为对照;采用RT-PCR和Western blot检测N-ras基因的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果转染siRNA的表达载体可以抑制内源N-ras基因在转录和转译上的表达。N-ras基因的表达抑制与BEL7402细胞的凋亡相关联。结论转染siR ...
赵岳 +4 more
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siRNA对骨肉瘤U2OS细胞株MDM2-mRNA表达的抑制作用
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2007 目的研究载体介导的siRNA（small interfere RNA）技术对骨肉瘤细胞株U2OS中MDM2-mRNA表达的抑制作用。方法依据设计siRNA的原则,以MDM2为靶基因设计并合成有小发夹结构的两条DNA序列,经退火成互补双链,再克隆到载体PGCsilencerTM中构建重组体（PGCsilencerTM-MDM2 siRNA）。实验分转染重组质粒组,转染阴性对照质粒组和只加脂质体的空白组;RT-PCR法观察U2OS细胞中MDM2-mRNA表达改变 ...
吕佳音 +5 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2007 【目的】以人包皮成纤维细胞（HFF）为模型,通过系统比较针对不同靶点的小干扰RNA（siRNA）对酸性鞘磷脂酶1（SMPD1）基因的沉默效果,筛选获得最有效的小干扰RNA序列,同时观察沉默SMPD1对细胞凋亡的保护作用。【方法】设计合成三对靶向SMPD1基因的小干扰RNA作为实验组,同时设立阴性对照组和脂质体组（lipofectamine 2000）,瞬时转染原代培养的HFF细胞,采用荧光定量RT-PCR法及Western blot测定SMPD1表达抑制情况,并用化疗药物丝裂霉素诱导细胞凋亡 ...
高军, 周灿权, 张仁礼, 马芸
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2007 目的构建Nogo受体基因干扰RNA表达载体,为促进中枢神经轴突的再生、探索临床治疗脊髓损伤新途径奠定基础。方法GeneBank中NgR的序列,应用www.invitrogen.com网站的设计软件设计、合成NgR miRNA的相应Oligo DNA,与BLOCK-iT Poll miR RNAi Expression Vector相连接,转化感受态Eco.li TOP10。结果限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ酶切、测序鉴定重组载体BLOCK-iT Poll miR RNAi/NgR,显示NgR ...
王朝鲁, 孙红辉, 杨有庚
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2014 目的探讨RNA干扰技术沉默胰岛素生长因子结合蛋白2（IGFBP-2）对胶质瘤细胞株U251增殖、凋亡的影响,为胶质瘤的基因治疗提供一个可选择的靶点和方法。方法构建靶向IGFBP-2基因的RNAi表达载体;采用脂质体法将siRNA转染U251细胞,设非特异的siRNA阴性对照组和未转染siRNA的阴性对照组;采用RT-PCR法半定量检测siRNA对IGFBP-2基因表达的抑制作用;用MTT法测定U251细胞增殖变化;流式细胞术检测siRNA诱导细胞凋亡作用。结果构建的RNAi表达载体抑制了IGFBP ...
许淑芬 +6 more
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四川大学学报. 自然科学版, 2014 本文应用生物信息学和RT-PCR方法分别获得了三角褐指藻两个PEPC全长cDNA,分别称为:PtPEPC1和PtPEPC2,前者完整开放阅读框3030bp,编码1009个氨基酸,后者完整开放阅读框2634bp,编码877个氨基酸;基于克隆所得PtPEPC的ORF构建了反向互补RNA干扰载体pPha-PtPEPC1RNAi和pPha-PtPEPC2RNAi,并用轰击法（PDS-1000/He）转化野生型三角褐指藻,筛选鉴定到了所需的阳性转基因藻;实时定量RT-PCR结果揭示:含PtPEPC ...
冷鹂 +6 more
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二酰基甘油转移酶对三角褐指藻油脂积累及相关环境因子响应的研究
四川大学学报. 自然科学版, 2012 本文应用RT-PCR和RACE方法扩增出三角褐指藻二酰基甘油转移酶(Ptdgat)全长cDNA,其完整编码框(ORF)为1587 bp,编码528个氨基酸.基于克隆所得Ptdgat的ORF构建了反向互补RNA干扰载体,并用基因枪PDS-1000/He转化野生型三角褐指藻,筛选到了所需的阳性转基因藻.实时荧光定量PCR(qPCR)结果揭示:含Ptdgat RNA干扰结构的转基因藻的二酰基甘油转移酶的表达水平比野生型三角褐指藻该酶的表达水平有显著降低;野生型藻和转基因藻的油脂含量定量分析结果揭示 ...
凃丽 +6 more
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四川大学学报. 自然科学版, 2010 将半胱氨酸蛋白酶基因(Bncp5)cDNA序列片段正反向插入表达载体pFGC5941中,构建了RNA干扰表达载体pFGC-Bncp5-RNAi.采用根癌农杆菌介导法,转化甘蓝型油菜下胚轴.在5mg/L BastaMS培养基中筛选,PCR鉴定结果显示,获得Bncp5转基因植株28株.半定量PCR分析结果显示,半胱氨酸蛋白酶基因在转基因油菜中表达受到一定程度的抑制,表明Bncp5的干扰载体在油菜中得到表达.
安金玲 +4 more
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siRNA介导的ADAM17基因沉默对前列癌PC3细胞增殖和凋亡的影响
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2020 目的探究RNA干扰靶向沉默ADAM17基因对前列腺癌PC3细胞增殖和凋亡的影响。方法构建针对ADAM17的小干扰RNA(siRNA)表达质粒PGC-siADAM17,脂质法稳定转染PC3细胞,采用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染细胞ADAM17 mRNA的基因表达,噻唑蓝(MTT)法测定瘤细胞增值率,原位未端标记(TUNEL)法检测瘤细胞凋亡率,流式细胞术(FCM)检测瘤细胞周期比例。结果 PGC-si ADAM17使PC3细胞ADAM17蛋白分泌水平下调,对PC3细胞增殖的抑制率为53.6%
李雪 +5 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2020 目的探究GATA2/GATA6调控胃癌自噬和凋亡的机制。方法以人胃癌SGC-7901细胞为研究对象,建立干扰RNA转染模型,通过流式细胞术检测细胞周期改变,Annexin-V-FITC/PI双染检测细胞凋亡,倒置相差显微镜、透射电镜观察细胞形态,并应用MDC染色对细胞自噬进行测定。结果 GATA2与GATA6表达量与肿瘤直径、淋巴结转移呈正相关,肿瘤直径小于2cm的组织中GATA2与GATA6表达水平显著低于肿瘤直径大于2cm的组织 ...
洪森, 李世权, 刘涛, 康振华
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