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使用FLAG标签肽及慢病毒载体共同筛选小鼠foxp3基因RNA干扰的有效靶点
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2007 【目的】筛选高效的foxp3 RNA干扰的靶点用于阻断CD4^＋CD25^＋ Treg细胞的免疫抑制功能。【方法】使用oligoengine软件设计foxp3基因shRNA序列，化学合成法合成4条shRNA序列，构建含foxp3的靶序列的慢病毒载体：构建出表达FLAG融合蛋白和目的基因的工具细胞293T细胞用于筛选RNA干扰的有效靶点。【结果】成功包装了4条foxp3基因靶序列相应的慢病毒颗粒；成功构建了表达融合蛋白和目的基因的293T工具细胞：在工具细胞上筛选出了2条RNAi效率分别为91.3％和95．
史艳侠 +5 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2020 目的探究GATA2/GATA6调控胃癌自噬和凋亡的机制。方法以人胃癌SGC-7901细胞为研究对象,建立干扰RNA转染模型,通过流式细胞术检测细胞周期改变,Annexin-V-FITC/PI双染检测细胞凋亡,倒置相差显微镜、透射电镜观察细胞形态,并应用MDC染色对细胞自噬进行测定。结果 GATA2与GATA6表达量与肿瘤直径、淋巴结转移呈正相关,肿瘤直径小于2cm的组织中GATA2与GATA6表达水平显著低于肿瘤直径大于2cm的组织 ...
洪森, 李世权, 刘涛, 康振华
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RNA干扰Ku70基因对宫颈癌Hela细胞放射敏感性影响的实验研究
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的观察ku70基因短干扰RNA（siRNA）对宫颈癌Hela细胞放射敏感性的影响。方法采用集落形成技术测定不同剂量射线照射对Hela细胞存活率的影响,观察Hela细胞对射线照射的敏感性。采用时定量PCR技术（quantitiv real time PCR,QRT-PCR）检测Ku70 mRNA水平表达。采用Western Blot免疫印记技术检测Ku70蛋白表达。采用RNA干扰（RNAi）技术抑制Hela细胞中Ku70蛋白的表达,观察Ku70蛋白表达下调对Hela细胞放射敏感性的影响 ...
张妍, 尹元
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四川大学学报. 自然科学版, 2015 本研究利用RT-PCR结合RACE方法扩增出了三角褐指藻甘油激酶(PtrGK)基因全长cDNA序列,其完整ORF为2079bp,编码692个氨基酸.基于上述序列构建了甘油激酶原核表达载体.构建反向互补RNA干扰载体并转化野生型三角褐指藻,得到含有甘油激酶反向互补干扰结构的转基因藻.研究表明:其甘油激酶表达水平、利用某油速率和细胞分裂速度都较野生型藻有了较大程度的下降.说明甘油激酶对三角褐指藻甘油兼养生长的重要作用.
陈波, 黄龙, 郭婷, 卿人韦
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建靶向人SSH1L的siRNA真核表达载体（pSUPER-SSH1L）。方法将设计好的SSH1L的siRNA的寡聚脱氧核苷酸链与真核表达载体pSUPER连接,构建重组pSUPER-SSH1L真核表达载体。对该重组表达载体进行酶切鉴定及DNA测序;通过Western blot检测SSH1L蛋白的表达。结果酶切鉴定、DNA测序以及Western blot检测结果证实表达质粒构建成功,无碱基突变。结论成功构建了靶向人SSH1L基因表达的siRNA干扰质粒载体pSUPER-SSH1L ...
邢志军, 赵建武, 王岩, 高忠礼
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的采用RNA干扰技术抑制树突状细胞（DCs）SOCS1的表达,并检测其对树突状细胞抗肿瘤活性的影响,为树突状细胞的临床应用奠定基础。方法针对SOCS1基因,采用化学合成法合成3对SOCS1 siRNA,并转染树突状细胞。Western blot检测树突状细胞SOCS1的表达情况,筛选出有效的siRNA序列,MTT法测定SOCS1沉默的树突状细胞抗肿瘤活性的变化。结果与空白对照组相比,序列3组SOCS1蛋白质表达水平明显降低;SOCS1沉默的树突状细胞抗肿瘤活性显著提高 ...
于鸿, 张健, 刘玉侠
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沉默FRAT1基因对结肠癌HT-29细胞增殖与凋亡的影响及其机制研究
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2014 目的探讨沉默FRAT1基因对结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响及其可能分子机制。方法将成功转染FRAT1基因RNA干扰序列的人结肠癌HT-29细胞扩大培养,MTT比色法检测细胞增殖,双染流式细胞术检测细胞凋亡率,单染流式细胞术分析细胞周期,免疫荧光法激光共聚焦显微镜下观察β-catenin蛋白变化。结果转染组细胞较对照组细胞生长明显减缓 ...
王苏雅 +5 more
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SOCS1-siRNA沉默SOCS1基因表达对脐血树突状细胞生物学活性的影响
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2012 目的采用RNA干扰技术抑制脐血树突状细胞（DC）SOCS1基因表达,并检测其对树突状细胞生物学活性的影响,为树突状细胞的临床应用奠定基础。方法针对SOCS1基因,采用化学合成法合成SOCS1siRNA,并转染脐血DC。RT-PCR和Western blot检测转染前后DC的SOCS1基因表达;流式细胞术检测细胞表面CD80、CD86及HLA-DR分子表达情况;ELISA法检测细胞培养上清中IL-12水平。结果与对照组相比,siRNA组SOCS1蛋白质表达水平降低,差异有统计学意义;DC表面CD80 ...
于鸿, 陈阳, 张健, 徐广伟
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2006 目的寻找人肝癌细胞N-ras基因的RNA干涉有效靶点。方法利用计算机网络资源及Oligo6.0、BlastResearch等生物学软件在N-ras基因编码区寻找RNAi有效靶点,并设计用于体内转录形成以U6启动子的siRNA发夹结构的DNA。结果成功筛选出RNA干涉的有效序列14个,并设计出siRNA发夹结构的DNA。结论这种对人肝癌细胞N-ras基因的RNAi有效靶点的筛选为进一步研究奠定了理论基础。其工作的开展将在RNAi治疗、肝癌N-ras基因功能研究、新药开发等方面发挥重要作用。
徐凯成 +4 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的探讨小分子Survivin干扰RNA（siRNA-Survivin）逆转人肺癌耐药细胞（A549DDP）耐药性的研究。方法应用RT-PCR法及Western-blot方法证明Survivin基因在人肺腺癌耐药细胞系（A549DDP）细胞系呈现高表达;并采用脂质体为转染介质,将Survivin小片段RNA导入A549DDP细胞沉默Survivin基因;应用MTT法观察顺铂、多西他赛、吉西他滨、表阿霉素对沉默Survivin基因后的A549DDP细胞的细胞增殖抑制及半数抑制浓度的变化。结果 1,Sur ...
李亚荣 +5 more
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