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siRNAs干扰EBNA1下调EBV阳性鼻咽癌细胞内ALOX12的表达
【目的】 利用RNA干扰技术抑制C666-1细胞中EB病毒核抗原1(EBNA1)的表达,探索氧化应激与抗氧化相关基因的表达变化65377; 【方法】 采用蛋白质印迹证实了能有效抑制EBNA1表达的干扰序列,使用甲基噻唑基四唑(MTT)方法检测C666-1细胞的存活率,利用实时定量PCR芯片技术探索了氧化应激与抗氧化相关基因的转录谱变化,并通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹进行了验证65377;【结果】 EBNA1-1414和EBNA1-1437干扰序列转染C666-1细胞48 h后 ...
doaj
RNA干扰pygo2基因对人脑胶质母细胞瘤U251生物学行为及wnt通路的影响
目的研究pygo2在胶质瘤细胞系U251中的表达、功能及作用机制。方法利用反义pygo2转染U251,下调pygo2的表达,应用流式细胞术和MTT法,评价细胞生长、增殖、凋亡及周期变化;细胞克隆形成试验和transwell侵袭试验分析细胞的克隆形成能力和侵袭能力,采用Western印迹法检测通路蛋白的表达变化。结果转染反义pygo2后,pygo2表达降低,MTT结果显示转染反义pygo2后细胞生长受到抑制且凋亡细胞增加;流式细胞术提示G1期到S期阻滞,细胞克隆形成能力下降,侵袭能力均受到抑制 ...
傅建华 +4 more
doaj
目的构建FRAT1siRNA真核干涉表达载体pSINsi-FRAT1,并测序鉴定证实克隆正确。方法设计以FRAT1基因为靶标的RNAi序列和阴性对照片段序列,并克隆入载体pSINsi-hU6,用基因测序进行重组克隆验证。结果 PCR检测证实siRNA插入pSINsi-hU6质粒,测序分析证实插入序列正确。结论成功构建FRAT1基因的RNAi载体,为研究FRAT1基因对结肠癌细胞增殖凋亡侵袭的影响提供了稳定转染的RNA干扰质粒。
于庆功 +4 more
doaj
目的观察特异的小干扰RNAs(small interfering RNAs,siRNAs)对胃癌细胞胰岛素样生长因子-Ⅰ受体(In-sulin-like growth factor-Ⅰ receptor,IGF-ⅠR)基因表达的抑制作用,研究其对肿瘤增殖的影响。方法设计并体外合成2条靶向IGF-ⅠR的siRNAs,脂质体法瞬时转染MGC803细胞,转染前后均使用WesternBlot法检测IGF-ⅠR的表达水平,MTT法检测细胞增殖,细胞计数并描记生长曲线。结果MGC803细胞中有IGF-ⅠR的强烈表达。
牛海静 +4 more
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人乳头瘤病毒(HPV)通过表达病毒癌基因,干扰机体正常信号转导、细胞因子活化及扰乱有效的细胞免疫应答形成了癌症发病的确切因素,但此过程需要经历长期且极其复杂的系列分子事件和多种编码基因与非编码基因的参与,并且在不同的感染部位,致癌的几率和病理过程差异很大[1,2];近年来,随着微小RNA(miRNA)的基因表达调控网络的逐渐发现,miRNA在肿瘤的发生 ...
丁建龙, 吴文安, 孟凡旭, 邓萍
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慢病毒携带shRNA抑制CR-1基因表达对 CNE-2细胞特性的影响
【目的】 应用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)技术,有效沉默鼻咽癌细胞CNE-2的CR-1基因表达,研究CR-1对鼻咽癌细胞生物学行为的影响65377; 【方法】 构建针对CR-1的siRNA慢病毒表达载体[含H1启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]65377;利用包装细胞293FT生产慢病毒,感染鼻咽癌细胞CNE-2, 流式筛选GFP阳性细胞65377;应用荧光定量PCR65380;Western blot检测病毒感染后CNE-2细胞中CR-1基因的mRNA和蛋白表达,获得干扰CR ...
doaj
RNA干扰(RNAi),又名RNA沉默,是指由双链DNA(dsRNA)引起的特异性基因抑制现象。目前,RNAi已经成为了一种非常强大的实验方法,用于大规模的基础和临床研究。虽然体外RNAi效果很好,但它在应用于体内仍有挑战性,这也是临床应用RNAi技术的难点 ...
张清 +7 more
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【目的】 通过RNA干扰技术(RNAi)建立稳定性BIRC7基因沉默的Jurkat实验细胞模型。 【方法】应用pSilencer 4.1-CMV neo 构建BIRC7 shRNA 表达载体,采用脂质体将载体导入Jurkat 细胞,利用G418筛选出稳定表达shRNA 细胞后,行RT-PCR 和Western blot 等技术检测细胞BIRC7表达水平。 【结果】成功筛选出分别携带二种重组shRNA表达的Jurkat细胞系。与对照组细胞相比,转染BIRC7 shRNA的细胞BIRC7 mRNA表达下降约>
吴红阳 +5 more
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慢病毒载体介导siRNA对裸鼠移植人肺腺癌A549抑瘤作用的实验研究
目的研究慢病毒载体介导siRNA抑制survivin基因表达后对人肺腺癌A549细胞体内增殖能力的影响以及对裸鼠移植人肺腺癌的抑瘤活性。方法应用裸鼠成瘤实验测定致瘤能力的改变,采用RT-PCR和Western-blot测定干扰后survivin基因及其蛋白的表达水平;流式细胞术检测肺癌细胞凋亡指数和增殖指数。结果靶向survivin基因的siRNA可以有效抑制survivin基因的表达,使survivin-mRNA表达减少50%-80%,蛋白表达减少60%;流式细胞术检测细胞凋亡率明显提高 ...
赵岐刚, 田小侠, 李鹏, 司磊
doaj
[A multi-level study of androgen deprivation therapy on the immune microenvironment in prostate cancer]. [PDF]
Tan Z, DU Y, Qin C, Xu T.
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