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, 2005 以紫外线灭活的dsRNA病毒草鱼出血病病毒(GCHV)诱导和模拟诱导的牙鲆胚胎细胞为材料,利用抑制性差减杂交(SSH)技术,成功构建了双链RNA病毒诱导的牙鲆胚胎细胞(FEC)差减cDNA文库.以管家基因α-tublin作为差减指标,经检测,该文库差减效率达2 10倍,表明经病毒诱导后某些差异表达基因也得到了相应倍数的富集.将获得的cDNA片段连接到pGEM-T载体,PCR检测显示差减片段在250bp～2 000bp之间.该差减cDNA文库的构建为从分子水平研究牙鲆培养细胞对dsRNA病毒的免疫反应 ...
张义兵 +5 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2023 目的构建稳定共表达荧光素酶（Luc）和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的人源卵巢癌细胞SKOV3（SK-Luc-EGFP）并探究其在卵巢癌腹腔转移的体内外研究中的应用。方法利用重叠PCR扩增得到的Luc-T2A-EGFP基因片段，构建重组质粒pCDH-Luc-T2A-EGFP-Puro；采用三质粒慢病毒包装系统转染HEK 293T细胞，收集病毒液感染SKOV3细胞；通过嘌呤霉素筛选，流式细胞术检测，筛选高效表达EGFP的细胞（SK-Luc-EGFP），并通过体外生物发光实验验证Luc的表达。对SK-Luc-
万里舟, 杜汝沛, 陈康梅
doaj
, 2000 【目的】为探索腺病毒载体在基因治疗中的应用及其表达目的抗原的有效性。【方法】用 BamHⅠ 、EcoRⅠ双切 质粒 pBluscript KS+ -HBs, 回收 S 基因片段, 定向克隆插入质粒 pACCMVpL 中相应的酶切位点, 通过快速抽提酶切鉴定筛选 重组质粒。【结果】挑取的 8 个克隆经 BamHⅠ 、EcoRⅠ酶切鉴定, 有 950 bp 的目的基因片段, 证明为重组体。【结论】成功 构建表达 HBsAg ...
周 智 +4 more
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蛙虹彩病毒3β-羟基类固醇脱氢酶抑制鱼弹状病毒引起的细胞凋亡
, 2008 设计保守引物从蛙虹彩病毒(RGV)中克隆到3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)基因,将其亚克隆到真核表达载体 pcDNA3.1上,构建重组质粒 pcDNA3.1-HSD,经酶切分析和 DNA 测序表明其读码框正确。将 pcDNA3.1-HSD 和 pcDNA3 ...
张奇亚, 孙伟
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[[abstract]]本发明关于一种重组腺病毒载体，可用于产生免疫力以对抗肠病毒感染。于一具体实施例中，本发明之重组腺病毒载体包含一表现卡匣，其编码肠病毒之P1蛋白及3CD蛋白酶。于另一具体实施例中，本发明重组腺病毒载体包含一表现卡匣，其编码肠病毒之3C蛋白酶或3CD蛋白酶。本发明亦关于一种疫苗组合物，包含所述之重组腺病毒载体。本发明提供一种使用该重组腺病毒载体及疫苗组合物以诱发个体产生免疫反应，对抗肠病毒感染的方法。进一步提供一种产生肠病毒之类病毒颗粒之方法 ...
周彦宏;邹岳良;庄再成
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, 2008 水生病毒学是水生生物学与病毒学交叉的一门新兴学科。本书试图通过深入浅出、图文并茂的方式，从分子、细胞、机体、种群，乃至水生生态系统等不同层面，介绍水生病毒学的基本概念、原理和研究方法。本书以作者的科研经历和教学实践为主线，兼纳并蓄，尽可能展现水生病毒学的丰富内涵和盎然生机。全书共分8篇31章，内容包括水生病毒学导论、鱼类病毒及病毒病、两栖动物病毒及病毒病、水生爬行动物病毒及病毒病、水生无脊椎动物病毒及病毒病、浮游病毒、水生病毒生态、鱼类免疫及抗病毒作用。全书有图片约210多幅，并附12个研究事例 ...
张奇亚, 桂建芳
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, 2006 【目的】构建小鼠端粒酶蛋白亚单位（mouse telomerase reverse transcriptase，mTERT）基因重组腺病毒载体，为下一步研究其体外表达和动物实验研究提供基础。【方法】从肝癌细胞中提取总RNA。采用RT-PER技术扩增mTERT的基因编码区序列，将序列定向克隆至真核表达载体pAC，将此表达质粒与腺病毒重组质粒pJM17共同转染293细胞，经同源重组产生重组腺病毒载体Ad-mTERT，纯化后的重组腺病毒载体Ad-mTERT在293细胞大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化 ...
陆敏强 +7 more
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, 2000 本发明涉及名特优水产动物疾病防治的抗病毒疫苗。以蛙病毒CCTCC－V96004感染草鱼性腺细胞CO9510,得到大量扩增后,再用甲醛对其进行灭活处理,制备出抗蛙病毒疫苗。疫苗生产周期短,工艺简单,安全、无毒、不污染环境和水体,对蛙的免疫保护率高达95％
张奇亚, 李正秋, 桂建芳
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慢病毒介导靶向PRL-3 基因的siRNA 抑制肝癌细胞的侵袭性
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2010 【目的】 探讨肝再生磷酸酶-3(PRL-3)的表达对肝癌细胞侵袭能力的影响65377;【方法】 设计65380;合成4对针对PRL-3 基因siRNA 的寡核苷酸序列,分别构建质粒,转染293T 细胞,据其对PRL-3 的抑制率,筛选最有效的PRL-3 基因RNAi 靶序列,设计并合成其siRNA 的双链DNA Oligo,与含绿色荧光蛋白(GFP)编码基因的pGCL-GFP 线性化载体连接产生重组慢病毒质粒LV-PRL3-SiRNA,并行PCR 和测序鉴定65377;将LV-PRL3-SiRNA ...
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ΔNp63γ和ΔNp63a及其C端在H1299细胞凋亡中的作用
四川大学学报. 自然科学版, 2013 为了研究ΔNp63γ、ΔNp63a及其C端(p63aCT)在细胞凋亡中的作用,本研究扩增出人ΔNp63γ、ΔNp63a和p63aCT编码序列,并克隆至慢病毒表达载体pLVX-HA-Flag.通过将构建的pLVX-ΔNp63a、pLVX-ΔNp63γ、pLVX-p63aCT包装至慢病毒颗粒,感染人肺癌细胞株H1299后,用Western blot检测到ΔNp63γ、ΔNp63a及其C端能在H1299细胞中有效地过表达;通过PI染色以及流式细胞术检测发现ΔNp63a能有效挽救DNA损伤药物Cisplatin(
陈静, 易勇, 贺寒冰, 李成华
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