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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2023 目的构建稳定共表达荧光素酶（Luc）和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的人源卵巢癌细胞SKOV3（SK-Luc-EGFP）并探究其在卵巢癌腹腔转移的体内外研究中的应用。方法利用重叠PCR扩增得到的Luc-T2A-EGFP基因片段，构建重组质粒pCDH-Luc-T2A-EGFP-Puro；采用三质粒慢病毒包装系统转染HEK 293T细胞，收集病毒液感染SKOV3细胞；通过嘌呤霉素筛选，流式细胞术检测，筛选高效表达EGFP的细胞（SK-Luc-EGFP），并通过体外生物发光实验验证Luc的表达。对SK-Luc-
万里舟, 杜汝沛, 陈康梅
doaj
上调FoxM1增强骨髓间充质干细胞抗脂多糖诱导肺泡上皮细胞凋亡 [PDF]
, 2019 【目的】本研究旨在探讨上调骨髓间充质干细胞（BMSC）的FoxM1表达水平对其抗脂多糖诱导肺泡上皮细胞凋亡作用的影响，并初步探索其可能机制。【方法】采用全骨髓细胞贴壁培养法分离获取大鼠BMSC，通过慢病毒转染技术使BMSC过表达FoxM1，利用Transwell小室构建BMSC与肺泡上皮细胞共培养体系，使用TUNEL法与Annexin V法检测不同FoxM1表达水平BMSC的抗脂多糖诱导肺泡上皮细胞凋亡作用，采用MILLIPLEXMAP液相芯片检测共培养体系中多种细胞因子的表达水平。【结果 ...
张莉珊
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Snail基因慢病毒载体的构建及其促进结肠癌细胞上皮间质化的研究
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2012 【目的】 构建Snail基因慢病毒载体,研究Snail基因的表达与结肠癌细胞上皮间质化的关系。【方法】 利用Gateway Technology法构建Snail基因表达质粒和空白对照质粒,行慢病毒包装,成功构建Snail基因慢病毒载体后,在结肠癌细胞系caco2中转染Snail基因质粒及空白载体对照,构建稳转细胞株caco2- Snail和caco2-vc,并在LoVo细胞中瞬时转染上述质粒,对Snail及E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达进行检测,并用划痕 ...
doaj
Research of RNAi Components Expressing Multiple siRNAs Targeted to HIV-1 [PDF]
, 2009 艾滋病已成为一场人类、社会和经济的灾难，对个人、社区和国家都产生了深远影响。目前常用的艾滋病治疗方法是化学药物的鸡尾酒疗法，该方法可明显降低患者体内的病毒载量，控制病情的发展。然而，该方法并不能达到治愈艾滋病的效果，急需开发新的更为有效的治疗方法。RNAi是近年来发现的一种序列特异性的转录后水平抑制基因表达的机制，目前已在HIV-1的抗病毒研究中显示出巨大的应用潜力。然而，HIV-1具有的高突变率使得病毒很容易逃避传统的单靶点RNAi的抑制。多靶点策略是克服病毒突变逃避抑制的有效方法 ...
张涛
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2011 【目的】探讨PTEN基因在子宫内膜癌PI3K/AKT通路中的作用，评估PTEN基因在抗肿瘤治疗中的意义。【方法】利用慢病毒载体系统, 构建人PTEN基因RNA干扰慢病毒载体和PTEN基因过表达慢病毒载体,分别转染PTEN野生型的HEC-1A细胞和PTEN突变型的Ishikawa细胞, 建立PTEN 基因敲减及过表达的细胞模型，Western Blot方法检测PTEN基因敲减或过表达前后PTEN蛋白的表达和AKT通路的活化情况, MTT法检测慢病毒转染前后细胞增殖的变化 ...
doaj
Exonuclease Ⅲ-mediated DNA Molecular Cloning [PDF]
, 2016 DNA克隆技术,作为最基本的现代分子生物学实验技术之一,已经成为生物医学研究领域的重要研究手段。传统的分子克隆方法需要经过限制性内切酶酶切和DNA连接酶连接的步骤,是否存在合适的酶切位点和DNA连接酶的效率成为影响克隆的重要限制因素。本文描述了一种由外切核酸酶Ⅲ介导的,以3'-5'外切核酸酶活性和细菌细胞内DNA修复机制为理论基础的DNA分子克隆方法,称为不依赖连接酶的分子克隆(ligation-independent cloning,LIC);证明了该方法的高效性和可靠性,并进一步对酶的用量、反应温度、
梁耀极, 洪丽欣, 谢昌传
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The protective function of Connexin43 on adipose derived stem cell when exposed to tert-butyl hydroperoxide induced injury [PDF]
, 2012 背景及目的：通过基因修饰的方法实现对干细胞生物学特性的改造，是保证移植细胞存活及增殖能力的重要手段，也是减少干细胞移植相关心律失常事件的重要手段。既往的研究证实通过上调Cx43的表达，可产生抗心律失常作用。本研究将明确Cx43基因转导ADSC可否提高T-booh损伤后ADSC细胞的存活率 方法：构建Connexin43和GFP双基因共表达的重组慢病毒载体质粒，脂质体转染法包装产生慢病毒颗粒。携带目的基因病毒颗粒感染ADSCs构建工程干细胞，运用流式细胞仪、荧光显微镜、Westernblotting、RT-
陈晓敏
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Advances in the treatment of adrenoleukodystrophy [PDF]
Adrenoleukodystrophy (ALD) is an X-linked, potentially fatal peroxisome disease, characterized by three main clinical phenotypes: adrenomyeloneuropathy (AMN), cerebral adrenoleukodystrophy (CALD), and primary adrenal insufficiency.
CAO Li, LIU Xiaoli
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靶向HIV-1 vif的高效人工miRNA的构建及慢病毒介导的体外抗病毒研究 [PDF]
, 2010 RNAi在HIV-1的治疗研究中得到了广泛的应用,构建高效并且安全的RNAi抗病毒元件是开展相关研究的基础。vif37是以前的研究中筛选获得的靶向HIV-1 vif的高抑制效率兼具保守性的RNAi靶点。miRNA在抑制效率和启动子的选择上比常用的shRNA具有优势。本研究探索以人工miRNA结构引发vif37靶点对应的RNAi。本研究以天然的miR-155前体为骨架,采用步移的方式设计了3个靶向vif37的人工miRNA,以RNA聚合酶Ⅱ类启动子指导表达。miRNA表达质粒和HIV ...
夏宁邵 +7 more
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Valproic Acid Enhances Sensitivity Of Triple-Negative Breast Cancer Cells to Paclitaxel [PDF]
, 2017 第一部分丙戊酸诱导人三阴性乳腺癌细胞凋亡及其机制研究 目的： 丙戊酸（VPA）系一临床广谱抗癫痫药；作为一组蛋白去乙酰化酶抑制剂，近年来诸多研究还表明其对多种肿瘤均具有较强的抗癌活性，但其确切的作用机制尚未完全阐明。鉴于目前临床上对三阴性乳腺癌的治疗手段尚有限，现有的治疗方案的临床疗效也比较局限，因此本研究第一部分的主要目的在于从体外细胞水平探讨VPA对三阴性乳腺癌可能的治疗作用，并初步探索相关的分子机制。 方法： 1、MTS方法检测不同浓度的VPA（0、0.125、0.25、0.5、1、2mmol/L）
左伟敏
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