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目的观察肝衰竭大鼠血清诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的作用,探讨大鼠骨髓间充质干细胞分离培养、体外扩增及其向肝细胞分化的体外培养条件和方法。方法从股骨胫骨分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,体外扩增培养、鉴定,并采用肝衰竭大鼠血清血清诱导培养,分别在诱导培养0、7、14、24、28天时留取细胞,观察细胞形态的变化,并采用免疫细胞化学方法检测肝特异性标记物(AFP、Alb、CK-18)、用PAS进行糖原染色实验,以验证诱导分化结果。结果诱导后5天间充质干细胞表现为肝细胞样,随着诱导培养时间的延长 ...
孙庆国 +3 more
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【目的】探讨原代培养垂体腺瘤的细胞纯化方法及其激素表达与分泌的特点。【方法】采用三种原代培养方法对垂体腺瘤细胞进行培养,方法Ⅰ为目前常用的垂体瘤细胞培养方法,方法Ⅱ结合使用右旋颉氨酸(D-valineDMEMD-valine)培养液,方法Ⅲ采用反复贴壁法结合DMEMD-valine培养液培养。观察其细胞形态变化和生长特征,放射免疫法测定不同培养时间培养液中相应激素的水平。免疫组织化学染色法检测培养细胞生长激素(growthhormone,GH)、泌乳素(prolactin,PRL)的表达。【结果 ...
徐伟光 +5 more
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目的培养符合实验要求的系统性红斑狼疮小鼠胸腺上皮细胞。方法剪切、胶原酶消化自发性系统性红斑狼疮小鼠(BXSB小鼠)胸腺,进行原代培养,胰蛋白酶消化法传代培养,光镜、免疫细胞化学染色进行细胞鉴定。结果经剪切、胶原酶消化的BXSB胸腺植块,在体外培养2~3天后,可见上皮样细胞从植块长出,8~15天后胸腺上皮细胞在培养瓶底部长满,细胞间通过胞浆突起连接成网孔结构。当原代培养的细胞长满瓶壁的90%左右时可传代,角蛋白染色阳性细胞纯度达95%以上。结论剪切、胶原酶消化法简便易行 ...
刘波, 毕黎琦
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Renca 条件培养基转化的调节性T细胞 对小鼠同种免疫的影响
【目的】 探讨小鼠肾癌细胞株Renca来源的条件培养基能否诱导CD4+ CD25- T细胞转化为具有免疫抑制效能的CD4+ CD25+ Foxp3+ T细胞65377; 【方法】 培养Renca提取上清获得条件培养基,将条件培养基与普通培养液按不同比例混合培养小鼠CD4+ CD25- T细胞7 d,以流式细胞仪检测CD4+ CD25+ T细胞和Foxp3+ 细胞的比例;再次分选CD4+ CD25+ T细胞检测其抑制细胞增殖的能力,体内过继性输入观察对移植物存活时间65380 ...
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目的探讨胎鼠皮肤间充质干细胞的体外增殖特性。方法取昆明小鼠胎鼠皮肤体外培养胎鼠皮肤间充质干细胞,MTT法检测所培养细胞对表皮生长因子(EGF)、角朊细胞生长因子(KGF)和碱性或纤维细胞生长因子(bFGF)的反应,观察其在体外培养条件下的增殖与生长特征。结果胎鼠皮肤间充质干细胞具有很强的增殖活性,传代培养潜伏期为24-48 h,对数增殖期为3-5 d,然后进入平台期。经过15代连续培养的细胞其增殖能力未见明显改变。应用MTT法检测发现,培养的细胞对bFGF具有良好的反应性,并在1.0μg.L ...
杨婧 +4 more
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目的探索乳鼠视网膜细胞体外诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的可行性。方法以大鼠BMSCs为研究对象,利用分层共培养的乳鼠视网膜细胞作诱导剂,进行增殖培养、分化诱导;免疫组化法进行细胞性质鉴定。结果加入乳鼠视网膜细胞共培养第7天有神经元样细胞形成,经nestin、NF鉴定为神经元样细胞。结论BMSCs在体外培养条件下,经过新生乳鼠视网膜细胞诱导,可以分化为神经元样细胞。
徐春玲, 苏冠方, 牟大鹏
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【目的】 研究双层胶原支架与人牙周膜细胞的体外生物相容性?【方法】 组织块培养法培养原代人牙周膜细胞?MTT法测胶原支架不同浓度浸提液的细胞毒性?将人牙周膜细胞与支架材料三维培养,通过扫描电镜?组织切片观察其复合情况,并检测三维培养后细胞碱性磷酸酶(ALP)?羟脯氨酸(HYP)的分泌情况? 【结果】 不同浓度材料浸提液毒性评级为0 ~ 1级?细胞与支架复合培养后,细胞在支架上黏附?增殖良好,支架材料内部细胞分布均匀,且致密层可起屏障膜作用,阻挡细胞进入支架内部?细胞与胶原支架复合培养24 h后 ...
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目的比较两种体外分离培养原代大鼠胚胎肝干细胞(EHSCs)方法,并对其进行鉴定。方法用胶原酶灌注法及剪碎消化法分离不同年龄的大鼠胚胎肝干细胞,用含10%优等胎牛血清的H-DMEM培养液培养。利用免疫细胞化学方法在激光共聚焦扫描显微镜下观察该细胞表面抗原的表达情况,进行鉴定。结果两种方法分离的大鼠胚胎肝干细胞体外培养24 h贴壁,5 d左右可长成单层,光镜下为致密圆形细胞,边缘清楚。8 d后细胞铺展,呈上皮样。表达甲胎蛋白(AFP)抗原、细胞角蛋白(CK)18、19 ...
胡小波, 曲丽梅, 李玉林
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目的探讨骨髓间充质干细胞体外分离培养和鉴定方法,找到一种能在质和量上均能满足需要的体外培养条件。方法无菌条件下分离处死后取小鼠双下肢骨,低糖DMEM培养液冲出骨髓,离心5mins,用5ml含10%胎牛血清的低糖DMEM培养液重悬细胞。加入等体积密度为1.073g/L percoll分离液离心30mins。取中层云雾状细胞。37℃、5%CO2培养箱中贴壁培养。取5-10代细胞培养至对数生长期后,洗涤离心。取100μl细胞悬液分别加入相应抗体,避光孵育30mins,洗涤离心。流式细胞仪检测 ...
银广悦 +6 more
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目的检测姜黄素对LPS诱导小鼠巨噬细胞极化的影响,并检测不同极化状态下细胞培养上清对小鼠胰岛β细胞的损伤作用;研究姜黄素通过拮抗LPS诱导巨噬细胞M1极化保护胰岛β细胞的效应与机制。方法体外培养小鼠小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞,通过LPS(2μg/ml)诱导建立M1极化模型,采用姜黄素(7.5 1μmol/l)单独或与LPS共同处理细胞。通过流式细胞术检测巨噬细胞CD40、CD86和CD206表达,并通过ELISA技术检测细胞培养上清液中TNF-α含量 ...
史立言 +4 more
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