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以从正在萌发的诸葛菜种子中提取总RNA反转录成的cDNA作为模板,进行PCR扩增,获得了160 bp的植物防御素cDNA片段。然后将该片段克隆到pMD18-T栽体。经测序后将片段酶切回收,再克隆到GTK原核表达载体中。经0.1 mmol/L IPTG诱导表达,获得了与理论值相符的32 kD的融合蛋白质条带。用GST单克隆抗体做第一抗体进行Western-Blot检测,获得阳性结果。这为诸葛菜植物防御素基因功能的研究提供了基础。
钱磊 +8 more
doaj
副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)FlaⅠ基因的合成及其克隆与鉴定
根据副溶血弧菌野生型菌株BB22 FlaⅠ基因cDNA序列,通过合理的引物设计、链延伸反应、PCR反应以及分子克隆等技术,成功地合成出编码极鞭毛蛋白的FlaⅠ基因全长片段,并将其克隆至pMD18-T载体质粒上 ...
周化民 +5 more
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从采绒革盖菌(Coriolus versicolor,常被称为杂色云芝)中筛选到产植酸酶基因.根据植酸酶基因的保守序列设计引物P1、P2,从云芝中分离克隆植酸酶基因的片段.再在分离到的已知序列的5′端和3′端设计嵌套的特异引物SP1、SP2、SP3和SP1′、SP2′、SP3′,利用TAIL-PCR技术进行分离已知序列的侧翼序列.结合Blastn、ORF和Primer5.0软件,在侧翼序列上设计特异引物P3、P4,最终从云芝中分离克隆到全长的植酸酶基因B4.再在B4序列的基础上设计引物phyP rt1、
杨帆, 郭丽琼, 林俊芳, 苗灵凤
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[Humanized anti-CD25 monoclonal antibody as a salvage therapy for steroid-refractory acute graft-versus-host disease after hematopoietic stem cell transplantation]. [PDF]
Wu YX +10 more
europepmc +1 more source
深圳市妇女宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型E6、E7致癌基因的序列分析
目的检测深圳市宫颈癌患者癌组织中HPV16型E6、E7致癌基因的序列。方法采用PCR技术扩增1例在深圳生活17年宫颈癌HPV16型阳性患者组织中HPV16E6、E7基因,对其进行克隆、构建重组质粒并进行核酸限制性内切酶鉴定及DNA测序分析。结果成功地克隆了HPV16E6、E7基因,测序分析表明克隆的HPV16E6、E7基因与GenBank收录的德国标准株相比完全一致。结论深圳市妇女宫颈癌组织中HPV16型E6、E7致癌基因的序列与德国标准株相同。
关嵩青, 林莉, 叶菲
doaj
选取IV基因型HCV及中国和台湾代表株HCV的5’NCR区保守序列合成引物,以RT-PCR从输血后非甲非乙型肝炎病人血浆中扩增一段300bp的cDNA片段作目的基因,钝端插入pUC19的SmaI切点,构建了pUHCV-NC重组质粒。对pUHCV-NC分别或混合应用HCV序列特异的内外引物和载体序列特异的通用引物进行PCR扩增,所用产物分子量均同预期相符;酶切分析查出HCV基因所带有和克隆位点融合所产生的两个外源NcoI切点也存在;证实pUHCV-NC中克隆基因是HCV的5’NCR序列且插入方向为反向 ...
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固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)对小鼠Ⅰ型葡萄糖载体(mGLUT1)的表达调节
目的探讨SREBP1c对mGLUT1表达的影响。方法采用分子克隆技术,将SREBP1c和mGLUT1cDNA分别克隆到表达载体pSVsport和pGL3b上。SREBP1c与mGLUT1克隆载体同时或单独转染NIH3T3细胞,然后应用荧光素酶活性测定法、RTPCR及Northernblot等方法测定SREBP1c对mGLUT1的启动子活性调节及mRNA表达的影响。结果实验结果表明,SREBP1c可激活mGLUT1启动子的活性,并且可增加内源性mGLUT1的mRNA表达水平 ...
李天洙 +6 more
doaj
报道了一种简便高效克隆微卫星序列的方法。这一方法的实施步骤包括小片段基因组文库构建、三螺旋捕获、磁珠分离和PCR扫描。草鱼AG重复文库的冗余率为7.2%,富集效率为60.25倍,PCR扫描的准确率达100%,采用这一方法克隆到的AG重复序列中完美型、非完美型和混合型的比例分别为66.87%、17.17%和15.96%,不间断重复序列长度大于30 bp的微卫星座位占51%。34个微卫星座位中有25个表现出多态性,PIC值0.50—0.91,进一步分析表明AG重复序列的多态信息含量(PIC ...
连灏 +7 more
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鄂尔多斯高原地处半干旱区到干旱区的过渡带。通过沿鄂尔多斯高原从东到西的天然降水梯度的样带调查,分析了克隆植物的分布特征与降水的关系。结果表明:克隆植物的物种数量、占物种总数的比例和重要值以及根状茎型克隆植物的物种数量均与降水量呈显著正相关。5种优势植物克氏针茅、本氏针茅、黑沙蒿、赖草和短花针茅均为克隆植物,它们的分布也受降水影响。克氏针茅的密度、本氏针茅的盖度和密度、黑沙蒿的高度、盖度和密度以及赖草的高度均与降水量呈显著正相关。然而,赖草的盖度以及短花针茅的高度、盖度和密度均与降水量成负相关。因此 ...
董鸣 +4 more
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当真核细胞面临各种外界压力时,可通过磷酸化真核翻译起始因子eIF2a的Ser51位点来调节蛋白的合成。目前发现了四种磷酸化eIF2a的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,分别是HRI、PKR、GCN2 和PERK。本研究通过构建紫外灭活的草鱼出血病病毒(GCHV)诱导的牙鲆囊胚培养细胞(FEC) 的SMART cDNA文库,运用同源克隆法,成功克隆鉴定了牙鲆的两个eIF2a激酶基因PoHRI和 ...
张义兵, 张奇亚, 朱蓉, 桂建芳
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