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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2008 目的构建人PTEN基因的真核表达载体并在COS-7细胞中高效表达。方法从人喉粘膜组织中分离总RNA,经逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）得到PTEN全基因。克隆入PTEM-T easy载体上,经过PCR、酶切鉴定为阳性的克隆,进行测序分析。然后将所获得的基因定向克隆入PCI-neo载体中构建表达载体。并将其转入COS-7细胞中进行瞬时表达。结果反转录PCR扩增后的产物,在约1.4 kb处可以看见特异性条带,序列分析表明与GenBank中的PTEN基因序列相同。PCI-PTEN真核载体转染COS ...
陈鸥 +5 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2006 【目的】构建携带大鼠脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）目的基因的复制缺陷型重组腺病毒，并初步检测其体外表达目的基因的能力。【方法】提取大鼠脑组织总RNA，使用RT—PCR方法扩增BDNF目的基因并将其克隆入pMD18-T Simple载体测序，将测序完全正确的BDNF目的基因克隆入pShuttle2中，然后利用体外连接法将BDNF目的基因克隆入Adeno—X^TM腺病毒骨架中。Lipofectamine^TM ...
王鹏 +6 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2006 目的构建人β-防御素2的融合性原核表达载体,为今后基因工程手段表达纯化及生产人β-防御素-2奠定基础。方法体外基因合成人β-防御素2（HBD-2）的基因片段,并克隆入pMD18T中间载体中,经酶切鉴定后再克隆入pET32a原核表达载体中,与载体中所固有的TrX-A形成融合基因。结果构建的融合性原核表达载体经酶切鉴定无突变发生。结论成功地构建了pET-32a-（HBD-2）。
魏洪涛, 董震, 张国利
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野生动物学报, 2009 根据GenBank上已发表的猪甘露聚糖结合凝集素A基因序列,设计一对特异性引物,通过RT-PCR法成功地从野猪肝脏中克隆到MBL-A基因序列。该克隆基因全长为875 bp,包含MBL-A的完整开放阅读框。同源性分析显示野猪MBL-A基因与家猪核苷酸序列同源性在99%,推导的氨基酸序列同源性为100%;与其他哺乳动物相比核苷酸序列同源性在73%～83%之间,推导的氨基酸序列同源性在60%～81%之间。
孙玉刚 +4 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2004 【目的】 构建GATA-3基因正义?反义重组质粒,为进一步研究GATA-3在T细胞发育分化中的作用提供基础?【方法】 采用PCR技术扩增GATA-3基因,通过酶切?连接?转化等分子生物学技术,将该全长基因亚克隆至表达载体pCDNA3,构建质粒后转染大肠杆菌,并在大肠杆菌中扩增?同时用脂质体法感染大鼠脑细胞?【结果】 从大鼠脑细胞中成功地克隆出全长1335 bp的GATA-3基因,并经序列分析筛选证实GATA-3基因以正向?反向重组转染入载体,且在大肠杆菌中得到扩增,同时用RT ...
杨培增, 黄祥坤, 纪淑兴
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2008 目的用基因工程技术表达2′,5′腺苷酸酶（2-5AS）蛋白为抗原制备单克隆抗体,供荧光素标记抗体流式细胞术检测细胞内2-5AS应用。方法将2-5AS基因片段插入到带有His.Tag的pET-30a（+）质粒,并转化到宿主菌E.coli.BL21（DE3）,ITPG诱导表达,Ni柱纯化,获得2-5AS蛋白后制备单克隆抗体。结果插入片段酶切测序证实,插入的片段与目的片段序列相符;Ni柱纯化过程中可见目的蛋白的洗脱峰;经Tricine-SDS-PAGE电泳,Western Blotting鉴定,得到表达蛋白 ...
宋玉国, 谭冲, 黄建文, 毕胜利
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四川大学学报. 自然科学版, 2002 纳豆杆菌 (Bacillusnatto)是从日本传统食品纳豆中筛选出来的 ,它具有较强的溶栓作用 .根据已发表的纳豆激酶基因序列设计一对引物 ,利用聚合酶链式反应 (PCR) ,从纳豆杆菌的基因组DNA中扩增和克隆到纳豆激酶基因 .序列分析表明 ,该纳豆激酶基因成熟肽编码区含有 82 5bp ,编码 2 75个氨基酸残基 ,与文献已报道的序列分别有 93.4 %和 94 .5 %的同源性 ,显示了极高的同源性 .但该基因与该室克隆的豆豉溶栓酶基因的同源性仅为 80 .1 ...
彭勇, 黄庆, 张义正
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[Characteristics of immunoglobulin heavy-chain gene clonal rearrangements by next-generation sequencing of patients with multiple myeloma]. [PDF]
Zhonghua Xue Ye Xue Za Zhi, 2021 Yao L +7 more
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丙型肝炎病毒基因高变区（E1，E2／NS1）的分子克隆及基因型鉴定
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 1995 对广东省一个患者血清中的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因高变区进行分子克隆及基因型鉴定。采用微粒吸附法提取ＨＣＶＲＮＡ，随机引物逆转录后进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）。所用引物位于Ｅ１，Ｅ２／ＮＳ１区，扩增产物８０６ｂｐ，产物提纯后定向插入ｐＢＶ２２０质粒载体，重组体转染ＤＨ５α菌株，筛选菌落经增殖后碱变性法提取质粒，再通过ＰＣＲ及酶切法鉴定阳性克隆。我们还用酶切法对此株克隆的基因型作了初步鉴定，证明属于１组Ⅱ型。
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四川大学学报. 自然科学版, 2012 本文以长白猪(Landrace)大脑cDNA为模板,克隆得到长白猪细胞因子抑制因子SOCS-3基因,并首次克隆得到长白猪SOCS-1和SOCS-4基因.此外,还利用长白猪基因组DNA为模板克隆得到SOCS-3假基因(pseudo-SOCS-3).序列分析显示:长白猪SOCS-1基因cDNA编码220个氨基酸的前体蛋白,与人、小鼠、大鼠和牛的氨基酸序列一致性分别为94%、91%、91%和94%;SOCS-3基因cDNA全长690 bp,编码229个氨基酸的前体蛋白,与人 ...
段庆梓 +4 more
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