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目的: 制备从尖吻蝮蛇蛇毒中分离的纤溶因子的单克隆抗体, 为克隆基因提供特异性的探针。方法: 将纤溶因 子免疫 Balb/C 小鼠,取脾细胞与 SP 2/0 骨髓瘤细胞融合, 筛选稳定分泌抗体的细胞株。采用血纤维蛋白平板法,观察单克隆 抗体能否抑制纤溶因子的纤溶作用。结果: 获得 2 株稳定分泌单克隆抗体的细胞株。 Western 印迹显示该单克隆抗体能特异 地与纤溶因子结合,与其它蛋白无交叉反应, 此外,这 2株单克隆抗体具有抑制纤溶因子溶解人血纤维蛋白的作用。结论: 这 2 ...
邱鹏新 黎明涛 苏兴文 陈家树 颜光美
doaj
Functional Study of Ecdysone Signaling Pathway Related Genes During Ovarian Maturation and Juvenile Development of The Mud Crab, Scylla paramamosain [PDF]
蜕皮激素在节肢动物蜕皮、附肢再生以及繁殖等生理过程起着重要作用。蜕皮激素受体(Ecdysonereceptor,EcR)在整个蜕皮激素信号通路中起重要作用。当蜕皮激素合成达到一定浓度以后,能够诱导EcR与维甲酸X受体(retinoidXreceptor,RXR)形成有功能的EcR/RXR异源二聚体,进而启动蜕皮激素信号通路产生级联反应,诱导E75、E74、BroadComplex(BR-C)等早期应答基因的转录。这些早期应答基因进一步调控下游一些蛋白酶和其它基因的陆续表达,产生次级应答 ...
巩杰
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人DNA 聚合酶β 全长cDNA 的克隆、鉴定及真核表达载体的构建
【目的】克隆人类DNA 聚合酶(pol-β)基因全长cDNA, 构建该基因的真核高效表达载体。【方法】抽提人胚肺纤 维细胞HLF 总RNA 进行RT-PCR 扩增, 用pGEM-T 载体经T/A 克隆、DNA 测序确定后, 用双酶切将pol-β 全长cDNA 定向 克隆到绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1 , 转染大肠杆菌DH5α, 筛选阳性克隆, 双酶切鉴定重组质粒。【结果】经RT-PCR 获 得1.03 kb 的产物, 经DNA 测序, 确定所扩增片段为人类pol-β 基因全长cDNA ...
杜柳涛, 高 昆, 何 云
doaj
Characterization of the expression patterns, transcriptional regulation, antimicrobial mechanisms and immune activities of SpHyastatin from Scylla paramamosain [PDF]
拟穴青蟹(Scyllaparamamosain),简称青蟹,是我国东南沿海重要的经济养殖蟹类。迄今已有报道抗菌肽在青蟹抵抗海洋环境中病原微生物的入侵感染方面具有重要作用。抗菌肽广泛存在于自然界的生物中,是动物先天性免疫系统中的重要组分。自1996年甲壳类抗菌肽首次在岸蟹(Carcinusmaenas)中报道以来,已有几种抗菌肽在蟹类血淋巴系统和生殖系统中被发现,它们是蟹类重要的免疫因子。因此,青蟹中新抗菌肽的揭示对于深入阐明其免疫机制及其在复杂的环境中健康生存具有重要的科学意义和应用价值 ...
单忠国
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深圳市妇女宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型E6、E7致癌基因的序列分析
目的检测深圳市宫颈癌患者癌组织中HPV16型E6、E7致癌基因的序列。方法采用PCR技术扩增1例在深圳生活17年宫颈癌HPV16型阳性患者组织中HPV16E6、E7基因,对其进行克隆、构建重组质粒并进行核酸限制性内切酶鉴定及DNA测序分析。结果成功地克隆了HPV16E6、E7基因,测序分析表明克隆的HPV16E6、E7基因与GenBank收录的德国标准株相比完全一致。结论深圳市妇女宫颈癌组织中HPV16型E6、E7致癌基因的序列与德国标准株相同。
关嵩青, 林莉, 叶菲
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抽提小鼠R5杂交瘤细胞的mRNA,逆转录成cDNA,扩增出R5单抗的轻重链基因.分析克隆到的轻重链基因的序列信息,得到互补决定区(CDR)序列信息.构建真核表达质粒并在真核细胞中表达.采用互补决定区移植(CDR-grafting)的方法人源化鼠源单抗R5基因.先从人种系(germline)抗体基因片段中选出和克隆到的小鼠R5抗体基因具有相同互补决定区正则结构类型(CDR canonical structure class)的片段,合成寡核苷酸并采用PCR重叠延伸(overlap extension ...
YUJun-ming(余君铭) +1 more
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The genetic differentiation and mating system of Avicennia marina populations in China [PDF]
本研究利用SSR分子标记技术,以海南三亚河口、湛江特呈岛和泉州洛阳桥三个地区的白骨壤(Avicenniamarina)种群为研究对象,比较分析三个白骨壤种群的遗传多样性、种群之间的遗传分化和繁育系统模式(包括花粉流、异交率和种子流)。主要结果为: 1、10对核基因组SSR引物在742个个体检测到58个等位基因位点。每个引物扩增等位基因数在5-9个之间,平均5.8个。三个地区种群共出现了15个私有等位基因位点,在等位基因水平上已发现较大的分化与遗传距离。 2、湛江白骨壤种群遗传多样性水平最高 ...
侯蕊
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转移力不同的肺癌克隆细胞中nm23-H1基因产物NDPK 的表达
【目的】比较转移抑制基因nm23-H1 表达产物核苷酸二磷酸激酶(nucleoside diphosphate kinase , NDPK)在转移力 不同的肺癌克隆株中的表达。【方法】通过单细胞克隆技术及裸鼠接种筛选出高转移及低转移的人肺巨细胞癌克隆细胞株及 高转移的人肺腺癌克隆细胞株, 用LSAB 免疫组化法检测nm23-H1 基因产物NDPK 的表达。【结果】NDPK 在高转移及低转 移的人肺巨细胞癌克隆细胞移植瘤及转移瘤中均有表达, 高转移株的阳性细胞数目及强度均高于低转移株和裸鼠正常肺组
张 彬 +3 more
doaj
Entry and Molecular Regulation of White Spot Syndrome Virus (WSSV) into Crayfish Hpt cell [PDF]
白斑综合征病毒(Whitespotsyndromevirus,WSSV)是对虾的主要病原,该病毒致死率高、传染性强、宿主范围广,是水生甲壳类动物中最为严重的病毒性病原之一。因此,加深对WSSV感染致病机理的理解,寻找高效抗病毒防治方法,意义重大。培养细胞是病毒感染研究的有力工具,在甲壳动物原代细胞培养研究中,螯虾造血组织干细胞(Haematopoietictissuestemcell,Hptcell)—Hpt细胞培养较为稳定,是WSSV感染研究的首选。本研究以红螯螯虾 ...
陈荣元
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目的构建FRAT1siRNA真核干涉表达载体pSINsi-FRAT1,并测序鉴定证实克隆正确。方法设计以FRAT1基因为靶标的RNAi序列和阴性对照片段序列,并克隆入载体pSINsi-hU6,用基因测序进行重组克隆验证。结果 PCR检测证实siRNA插入pSINsi-hU6质粒,测序分析证实插入序列正确。结论成功构建FRAT1基因的RNAi载体,为研究FRAT1基因对结肠癌细胞增殖凋亡侵袭的影响提供了稳定转染的RNA干扰质粒。
于庆功 +4 more
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