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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2000 【目的】扩增日本血吸虫26 ku 谷胱甘肽硫-转移酶(Sj26GST)基因片段, 构建其重组原核载体, 以研制SjGST 重 组克隆。【方法】根据已知基因序列设计一对引物, 运用RT-PCR 技术扩增Sj26GST 目的基因cDNA 片段, 将其克隆到pBluescript( KS)质粒中, 并经酶切、PCR 和测序鉴定。【结果】获得GS T-pBluescript(KS)重组克隆。【结论】本实验获得Sj26GST 重 组克隆, 为进一步研制基因工程蛋白疫苗作准备。
李 焱 +7 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2007 [目的]克隆健康人苯丙氨酸羟化酶基因全长cDNA序列,构建并鉴定其原核表达质粒pTrcHisB/PAH。[方法]采用RT-PCR方法从人肝组织中扩增PAH基因全长cDNA,T/A克隆到pMD18-T载体中,双酶切后将cDA亚克隆入pTrcHisB载体,构建pTrcHisB/PAH质粒,经限制性内切酶鉴定并测序。[结果]人PAH基因cDNA正确克隆入pTrcHisB表达载体,与Genebank中PAH基因序列一致。[结论]成功构建pTrcHisB/PAH表达质粒 ...
张志 +8 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 1999 目的: 制备从尖吻蝮蛇蛇毒中分离的纤溶因子的单克隆抗体, 为克隆基因提供特异性的探针。方法: 将纤溶因 子免疫 Balb/C 小鼠,取脾细胞与 SP 2/0 骨髓瘤细胞融合, 筛选稳定分泌抗体的细胞株。采用血纤维蛋白平板法,观察单克隆 抗体能否抑制纤溶因子的纤溶作用。结果: 获得 2 株稳定分泌单克隆抗体的细胞株。 Western 印迹显示该单克隆抗体能特异 地与纤溶因子结合,与其它蛋白无交叉反应, 此外,这 2株单克隆抗体具有抑制纤溶因子溶解人血纤维蛋白的作用。结论: 这 2 ...
邱鹏新 黎明涛 苏兴文 陈家树 颜光美
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人DNA 聚合酶β 全长cDNA 的克隆、鉴定及真核表达载体的构建
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2002 【目的】克隆人类DNA 聚合酶(pol-β)基因全长cDNA, 构建该基因的真核高效表达载体。【方法】抽提人胚肺纤 维细胞HLF 总RNA 进行RT-PCR 扩增, 用pGEM-T 载体经T/A 克隆、DNA 测序确定后, 用双酶切将pol-β 全长cDNA 定向 克隆到绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1 , 转染大肠杆菌DH5α, 筛选阳性克隆, 双酶切鉴定重组质粒。【结果】经RT-PCR 获 得1.03 kb 的产物, 经DNA 测序, 确定所扩增片段为人类pol-β 基因全长cDNA ...
杜柳涛, 高 昆, 何 云
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深圳市妇女宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型E6、E7致癌基因的序列分析
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2014 目的检测深圳市宫颈癌患者癌组织中HPV16型E6、E7致癌基因的序列。方法采用PCR技术扩增1例在深圳生活17年宫颈癌HPV16型阳性患者组织中HPV16E6、E7基因,对其进行克隆、构建重组质粒并进行核酸限制性内切酶鉴定及DNA测序分析。结果成功地克隆了HPV16E6、E7基因,测序分析表明克隆的HPV16E6、E7基因与GenBank收录的德国标准株相比完全一致。结论深圳市妇女宫颈癌组织中HPV16型E6、E7致癌基因的序列与德国标准株相同。
关嵩青, 林莉, 叶菲
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2013 目的构建FRAT1siRNA真核干涉表达载体pSINsi-FRAT1,并测序鉴定证实克隆正确。方法设计以FRAT1基因为靶标的RNAi序列和阴性对照片段序列,并克隆入载体pSINsi-hU6,用基因测序进行重组克隆验证。结果 PCR检测证实siRNA插入pSINsi-hU6质粒,测序分析证实插入序列正确。结论成功构建FRAT1基因的RNAi载体,为研究FRAT1基因对结肠癌细胞增殖凋亡侵袭的影响提供了稳定转染的RNA干扰质粒。
于庆功 +4 more
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转移力不同的肺癌克隆细胞中nm23-H1基因产物NDPK 的表达
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2000 【目的】比较转移抑制基因nm23-H1 表达产物核苷酸二磷酸激酶(nucleoside diphosphate kinase , NDPK)在转移力 不同的肺癌克隆株中的表达。【方法】通过单细胞克隆技术及裸鼠接种筛选出高转移及低转移的人肺巨细胞癌克隆细胞株及 高转移的人肺腺癌克隆细胞株, 用LSAB 免疫组化法检测nm23-H1 基因产物NDPK 的表达。【结果】NDPK 在高转移及低转 移的人肺巨细胞癌克隆细胞移植瘤及转移瘤中均有表达, 高转移株的阳性细胞数目及强度均高于低转移株和裸鼠正常肺组
张 彬 +3 more
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Zhejiang Daxue xuebao. Lixue ban, 2007 抽提小鼠R5杂交瘤细胞的mRNA，逆转录成cDNA，扩增出R5单抗的轻重链基因.分析克隆到的轻重链基因的序列信息，得到互补决定区(CDR)序列信息.构建真核表达质粒并在真核细胞中表达.采用互补决定区移植（CDR-grafting）的方法人源化鼠源单抗R5基因.先从人种系(germline)抗体基因片段中选出和克隆到的小鼠R5抗体基因具有相同互补决定区正则结构类型(CDR canonical structure class)的片段，合成寡核苷酸并采用PCR重叠延伸(overlap extension ...
YUJun-ming(余君铭) +1 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2000 【目的】构建人瘦素基因 cDNA 克隆, 并进行序列分析。【方法】用逆转录聚合酶链反应扩增人瘦素基因 cDNA , 获得片段( 640 bp)连接至 pUC19 载体, 并转化大肠杆菌 DH5α。以末端终止法进行序列测定。【结果】所克隆的人瘦素 cDNA 含全长的人瘦素基因编码区,仅 287 位的腺苷酸被鸟苷酸代替, 导致 96 位编码谷氨酰胺的密码子 CAA 改变为编码精氨酸的 CGA, 其意义尚待阐明。【结论】以逆转录聚合酶链反应方法成功地构建了人瘦素基因 cDNA 克隆。
徐明彤, 钟光恕, 傅祖植
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