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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2004 【目的】研究大鼠急性局灶性脑缺血时缺血组织与非缺血组织中基因表达的差异,克隆出与脑缺血相关的基因。【方法】应用荧光差异显示PCR(FDDPCR)从同一例大鼠大脑皮层缺血组织和非缺血组织中筛选出有表达差异的基因片段,经反向Northernblot杂交,将杂交阳性的片段且经RT-PCR反复验证,选取差异明显的片段进行克隆测序;经生物信息学分析处理,选取同源性低的EST片段R6,利用cDNA5’端快速扩增PCR(5’RACE法)进行基因全长的克隆。【结果】利用5’RACE法成功地克隆EST片段R6至编码区 ...
臧林泉
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, 2001 植物基因克隆是当前植物学研究的前沿和热点。经过近 2 0年的发展 ,已经形成了一些克隆植物基因的方法 ,主要有功能克隆 ,PCR扩增 ,转座子或T DNA标签 ,定位克隆 ,差别杂交和减法杂交 ,mRNA差异显示和人工合成克隆。本文对这些技术的工作原理 ...
余懋群, 邓洪新,余懋群
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2007 【目的】构建以基因佐剂hGM-CSF基因为基础的真核表达质粒pIGM-CSF,并在宫颈癌细胞HeLa中表达与鉴定。【方法】采用聚合酶链反应从载体pORF-hGM-CSF中,扩增出hGM-CSF基因,克隆到双顺反子真核表达载体pIRES的多克隆位点B（MCSB）中,构建pIGM-CSF真核表达载体。然后采用脂质体转染法将其转染HeLa细胞,用RT-PCR在RNA水平和ELISA在蛋白水平检测其在真核细胞中的表达。【结果】所克隆hGM-CSF基因片段经测序完全正确;重组质粒转染Hela细胞后,检测有hGM ...
卢燕茹, 江振友
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, 2011 鱼类中IRF-1基因的克隆测序目前仅局限于辐鳍鱼类[1,2],而在软骨鱼类中未见报道。IRF-1是干扰素调节因子家族的成员之一[3]。除作为干扰素的转录调节因子外[4],还具有其他功能[5—10]。作为天然免疫重要的调节因子其基因在哺乳类中得到了广泛的克隆和分析。IRF-1与其他家族成员一样,在氨基末端前115个氨基酸都具较高同源性 ...
甘小妮, 陈新文
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, 1995 用质位ｐＢＲ３２２作载体，大肠杆菌Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５αＦ＇作受体，克隆到耐热芽孢杆菌Ｅ２菌株的羧甲基纤维素酶（ＣＭＣａｓｅ）基因。重组质粒ｐＢＧ３从产生ＣＭＣａｓｅ的转化子中分离得到。克隆到的ＣＭＣａｒｅ基因位于４．０ｋｂＨｉｎｄＩＩＩ片段上。功能状态ＣＭＣａｓｅ基因被亚克隆到２．４ｋｂＤＮＡ片段上。同位素杂交结果显示出克隆到的ＣＭＣａｓｅ基因与供体菌染色体ＤＮＡ的亲合性。重组质粒ｐＢＧ３所表达的ＣＭＣａｓｅ的最适作用ｐＨ为６．５，最适作用温度为５５℃，不作用于任何实验过的天然纤维素 ...
张义正 +1 more
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, 2006 本文运用抑制性差减杂交技术，构建了灭活大菱鲆弹状病毒诱导的牙鲆囊胚培养细胞和正常对照细胞间差异表达基因的差减cDNA文库。通过构建SMART-cDNA文库并结合RACE技术，从该细胞模型系统中克隆、鉴定了10个Hsp家族基因一个鱼类蛋白质精氨酸甲基转移酶基因的全长cDNA序列和PoCctz基因的部分cDNA序列。 进一步利用Real-time PCR对11个热休克蛋白家族基因在热休克和灭活病毒诱导下的表达时序的研究表明：在灭活病毒诱导下，牙鲆Hsp基因表达特征与在热休克状态下的表达特征相似 ...
董彩文
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青稞B-hordein基因对小麦面粉加工特性的影响及新B-hordein基因的克隆
, 2014 B组醇溶蛋白（B-hordein）是大麦的主要贮藏蛋白之一，其种类、数量和分布是影响大麦酿造、食用及饲养品质的重要因素之一，与大麦营养品质和加工品质密切相关。B组醇溶蛋白的结构与小麦低分子量谷蛋白（low-moleculer-weight glutenin subunit, LMW-GS）相似，推测其对小麦品质具有类似LMW-GS的功能。 本研究以“转B-hordein基因小麦”高代品系和其受体材料为研究对象，初步分析青稞B-hordein对转基因小麦面粉加工特性的影响。同时，从野生大麦和青稞中克隆B ...
马兴芹
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银鲫两个蛋白合成相关基因全长cDNA的克隆及其特征分析 [PDF]
, 2003 通过构建雌核发育银鲫心跳期SMARTcDNA质粒文库并从文库中随机挑选克隆测序 ,克隆得到银鲫翻译起始因子 3亚单位 2 (GTIF3 S2 )和翻译延伸因子 1亚单位α(GEF 1α)基因全长cDNA。银鲫翻译起始因子 3亚单位 2基因cDNA全长 12 80bp ,开放阅读框位于 117— 10 91bp之间 ,编码 32 5个氨基酸。其推断的氨基酸序列存在三个WD结构域。该基因在鱼类中为首次报道。银鲫翻译延伸因子 1亚单位alpha基因cDNA全长 1784bp
刘军,石耀华,尹隽,桂建芳
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, 2007 hir/hira基因最先作为组蛋白基因表达的一种负调节因子从酵母中被鉴定出来。现已证实,HIRA包含一组保守的蛋白家族,广泛存在于低等真核生物、无脊椎动物和脊椎动物等多种生物体当中,为生命发育所必需。关于hira基因在动物发育过程中的具体作用研究还不是很多,为了进一步探讨hira基因在鱼类发育过程中的作用,作者根据已知hira基因保守序列设计一对简并引物,分别以彩鲫基因组DNA和卵巢cDNA为模板克隆了彩鲫hira基因(Cahira)片段,该片段基因组序列为2181bp,基因组片段含有6个内含子 ...
王玉凤, 桂建芳, 杜新征
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2001 【目的】克隆人地中海贫血基因β654, 并进行序列分析, 为下游转基因小鼠模型的建立奠定工作基础。【方法】 以PCR 法扩增获得人β654 基因, 将其克隆入卸除了人β 基因的质粒pBGT51 中, 酶切、反向点杂交及测序法鉴定重组质粒。 【结果】所构建的重组质粒中含人β654 基因, 其引入方向正确, 序列分析结果正确。【结论】构建所得的重组质粒可用于下游 的转基因工作。
方小武, 曾瑞萍, 胡 彬
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