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简化的人纤溶酶原饼环区5基因的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达
四川大学学报. 自然科学版, 2006 从正常人肝脏组织中提取总RNA,合理设计引物,利用RT-PCR直接得到简化的hPK-5基因.将该基因克隆至原核表达质粒pGEX-1λT,将此重组载体转化大肠杆菌JM109,经PCR、酶切及测序鉴定阳性克隆.用IPTG诱导阳性克隆表达融和蛋白,SDS-PAGE观察表达产物.再通过Western-Blotting鉴定.简化的hPK-5基因的RT-PCR产物为264bp.通过酶切、测序等方法鉴定简化的hPK-5基因正确克隆至原核表达质粒pGEX-1λT中.重组质粒pGEX-1λT/predhPK ...
王健琪, 翟朝阳, 孙剑
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齿肋赤藓AP2/ERF转录因子家族基因Scsoloist的克隆与功能分析
, 2016 植物为了适应环境，进化出了一系列的抗逆机制，而转录因子在其中起到非常重要的作用。AP2/ERF作为植物特有的转录因子参与了植物的抗胁迫信号途径，引起了众多的关注。但是对AP2/ERF转录因子的研究主要集中在DREB，ERF，RAV以及AP2亚家族，而对Soloist亚族报道极少。仅两篇文献报道Soloist亚族基因不仅参与了非生物胁迫还参与了生物胁迫的调控。为了更深入的了解Soloist亚族基因的功能，本研究克隆得到了极端耐干藓类植物齿肋赤藓（Syntrichia caninervis ...
李士敏
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的研制高效表达型T载体用于基因的表达及蛋白功能分析。方法限制性内切酶EcoR V酶切真核表达载体pcDNA3,回收线性化质粒片段与三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTTP）70℃退火,构成T克隆载体并回收纯化。将增强绿色荧光蛋白基因（EGFP）和中国旱獭α干扰素基因（cwIFNA5）分别扩增后直接克隆到新构建的表达型T载体,转化感受态细菌,挑选阳性菌并制备质粒瞬时转染真核细胞,荧光显微镜观察EGFP的表达,病毒保护试验检测中国旱獭α干扰素的生物学活性。结果成功构建了表达型T载体 ...
卢银平, 祝建芳, 刘朝, 董继华
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Erwinia chrysanthemi分离株CSCL006 hrpN基因的克隆与高效表达
, 2006 通过构建Erwiniachrysanthemi分离株CSCL006的DNA文库,克隆出hrpNCSCL006基因,测序结果显示该基因编码区长1020bp;推导的harpinCSCL006与ErwiniachrysanthemiEC16和3937编码的harpin蛋白同源性高,但与其它软腐菌的harpin蛋白同源性较低;在大肠杆菌中(Escherichiacoli)高效表达了hrpNCSCL006基因,重组harpinCSCL006蛋白分子量为34kD。以抗harpinEcc的抗体为探针 ...
崔亚亚, 李名扬, 汤承, 吴伯骥
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2001 【目的】分离和鉴定日本血吸虫(Schistosoma japonicum , S .j )新基因。【方法】应用免疫学方法筛选S .j cDNA 文库获得阳性克隆;通过PCR 直接序列测定技术, 表达序列标签(EST)同源性检索对阳性克隆插入片段进行鉴定;采用亚克 隆技术及生物信息学等技术, 对获得的日本血吸虫精氨酸酶编码基因序列进行结构与功能的分析。【结果】获得了一个含 1 061 bp外源插入片段的阳性克隆, 其cDNA 序列含有一个840 bp 的阅读框, 编码279 个氨基酸 ...
吴忠道 +3 more
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, 2006 从采绒革盖菌(Coriolus versicolor,常被称为杂色云芝)中筛选到产植酸酶基因.根据植酸酶基因的保守序列设计引物P1、P2,从云芝中分离克隆植酸酶基因的片段.再在分离到的已知序列的5′端和3′端设计嵌套的特异引物SP1、SP2、SP3和SP1′、SP2′、SP3′,利用TAIL-PCR技术进行分离已知序列的侧翼序列.结合Blastn、ORF和Primer5.0软件,在侧翼序列上设计特异引物P3、P4,最终从云芝中分离克隆到全长的植酸酶基因B4.再在B4序列的基础上设计引物phyP rt1、
杨帆, 郭丽琼, 林俊芳, 苗灵凤
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黑曲霉(Aspergillus niger)三磷酸甘油醛脱氢酶基因(GPD)的序列测定与同源性分析
四川大学学报. 自然科学版, 1999 ｐＡＮＧＰＤ是用构巢曲霉ＧＰＤ基因片段为探针，从黑曲霉基因组文库中筛选到的一个三磷酸甘油醛脱氢酶基因（ＧＰＤ）阳性克隆．作者对该阳性克隆进行了亚克隆和序列测定，结果表明，基因片段总长２４４１个核苷酸（ｎ．ｔ），其中５’－端非编码区长９８１ｎ．ｔ，编码区（从起始密码子ＡＴＧ到终止密码子ＴＡＧ）长１４４６ｎ．ｔ，３’－端非编码区长２４ｎ．ｔ，基因启动子区含有ｇｐｄ－盒和ＣＴ－盒序列，但无明显的ＣＡＡＴ盒和ＴＡＴＡ盒序列．ＧＰＤ基因由７个外显子和７个内含子构成，外显子全长１００８ｎ．ｔ ...
赵莲, 苟兴华, 张义正
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八肋游仆虫Rab家族新成员Eo-rab-1 N基因的克隆与序列分析
, 2006 Rab蛋白家族属于小分子GTP结合蛋白家族Ras超家族中最大的亚家族,主要在囊泡运输中起作用。实验运用PCR、RT-PCR等技术,从八肋游仆虫中克隆到一种新的rab基因。序列分析结果表明:在大核中,该基因全长884 bp,除去两端的端粒与非编码区,该基因在大核中由723 bp组成。从小核中克隆相应的基因片段,此基因片段序列与大核中序列一致,表明该基因在小核中无内部删除序列的存在。通过RT-PCR,从mRNA获得的该基因的开放读框为663 bp,表明该基因在转录过程中有内含子的删除 ...
柴宝峰 +4 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2008 目的克隆EB病毒早期蛋白p54的编码基因BMRF1,构建原核表达载体,为相应蛋白的表达和应用奠定基础。方法以含EB病毒的B95-8细胞培养上清为模板,PCR扩增出BMRF1基因。PCR产物经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后克隆至原核表达载体pGEX-5T,用双酶切和DNA测序鉴定重组质粒。结果PCR扩增的特异性片段长度为1 233bp,以此构建的重组质粒pGEX-5T-BMRF1双酶切的片段大小与预期符合,重组克隆外源基因的测序结果与GenBank中的EB病毒BMRF1基因cDNA序列一致 ...
伊强 +4 more
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, 2013 为寻找新型植物抗菌肽,通过生物信息学的手段在全基因组范围内进行油菜抗菌肽基因的预测和分析,初步筛选出与已知抗菌肽具有类似序列结构特征的候选基因BnPCD842895。BnPCD842895基因长度为189bp,编码48个氨基酸,通过overlap PCR方法,将合成的抗菌肽基因克隆到pET30a-EDDIE-GFP表达载体上。将大肠杆菌中表达得到的包涵体融合蛋白在体外复性,并通过融合蛋白EDDIE的自我剪切,从而获得不增加任何多余氨基酸的抗菌肽产物 ...
周瑢 +10 more
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