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RNAi-chk1在抑制小鼠Lewis肺癌细胞生长作用的实验研究
目的观察chk1-RNAi联合放疗对Lewis肺癌细胞的抑制及凋亡情况。方法以脂质体Lipofectimine-2000介导,将chk1-536的siRNA表达载体转染小鼠Lewis肺癌细胞株,将其分为空白对照组、错义序列组、siRNA组,2Gy照射组、2Gy照射+错义序列组、2Gy照射+siRNA组。应用MTT法检测转染细胞抑制率、流式细胞术分析转染siRNA后细胞的凋亡,并应用RT-PCR检测转染细胞chk1-mRNA表达水平。结果 chk1-siRNA转染联合辐射组的Lewis肺癌细胞 ...
侯吉光 +4 more
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目的探讨肾细胞癌患者手术治疗前后外周血T淋巴细胞亚群的变化特征,为了解病情、判断预后提供免疫学依据。方法应用三色荧光素标记CD4、CD8、CD3的单克隆抗体,对外周血淋巴细胞进行标记后,应用流式细胞仪进行检测分析。结果肾细胞癌患者CD3+、CD4+T细胞明显低于正常对照组,CD8+T细胞明显高于正常对照组,CD4/CD8比值倒置;肾细胞癌患者手术后CD3+、CD4+T细胞较术前明显升高,CD4/CD8比值恢复正常。结论肾细胞癌患者T淋巴细胞百分率异常,存在细胞免疫功能紊乱现象;手术后有效去除瘤负荷 ...
叶兴龙, 宋玉国
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新型伊立替康衍生物ZBH-1208的体外抗肿瘤活性及机制研究
目的研究新型伊立替康衍生物ZBH-1208体外对肿瘤细胞的生长抑制作用并初步探讨其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测分析ZBH-1208对人宫颈癌HeLa细胞、人非小细胞肺癌A549细胞、人小细胞肺癌NCI-H446细胞、人乳腺癌MCF-7细胞、人结肠癌SW1116细胞、人胃腺癌SGC-7901细胞、人肝癌SMMC-7721细胞及人胚肾293细胞的生长抑制作用,计算IC50值;流式细胞术检测ZBH-1208对肿瘤细胞周期及活化Caspase-3表达的影响。结果 ZBH ...
赵静 +8 more
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Hoechst 33342标记恒河猴皮肤干细胞向结膜上皮细胞分化
[目的]探讨皮肤干细胞诱导分化为结膜上皮细胞,为组织工程结膜探索一种新型的种子细胞,为严重眼表疾病的治疗奠定基础。[方法]在体外培养纯化鉴定恒河猴皮肤干细胞,并用Hoechst 33342标记,标记后的皮肤干细胞与结膜上皮细胞进行Transwell非接触共培养10d,然后对诱导后的细胞用细胞免疫化学以及流式细胞术检测结膜上皮细胞的特异性表面标志,包括角蛋白4和粘蛋白4,同时检测细胞的Hoechst 33342表达情况。[结果]纯化后的皮肤干细胞比例接近90%。Hoechst ...
卢蓉 +5 more
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Bcl-2抑制剂ABT737增加GSK3抑制剂SB216763引起的A549细胞凋亡
目的探讨SB216763联合ABT737对肺癌细胞增殖和凋亡的作用及其机制。方法MTT法检测SB216763或联合ABT737对A549细胞增殖的影响。流式细胞术检测SB216763或联合ABT737对A549细胞凋亡的影响。Western blot检测各组内的cleaved caspase3和cytochrome C蛋白表达水平。结果 SB216763抑制了A549细胞的增殖,且呈现剂量依赖性。ABT737增强了SB216763对A549细胞的抑制作用 ...
石少敏, 王静, 于杜娟, 赵永娟
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目的观察SBHL对甲状腺鳞癌SW579细胞生长的抑制作用,从分子水平探讨SBHL对甲状腺鳞癌SW579细胞生长抑制作用的机制。方法用MTT比色法观察不同浓度和作用时间的SBHL对甲状腺鳞癌SW579细胞增殖的影响;用流式细胞术对细胞周期进行分析;TRAP-银染法检测端粒酶活性。结果 5×10-5mol/L-1×10-3mol/LSBHL对甲状腺鳞癌SW579细胞增殖有明显的抑制作用,这种抑制作用随SBHL浓度的增加而增加;流式细胞术对细胞周期进行分析的结果显示,随着SBHL浓度的增加 ...
崔焕波, 艾金霞
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摘 要: 【目的】 观察苯甲酸钠(SB)对PC12肾上腺嗜铬细胞瘤细胞凋亡的诱导作用及对酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响。【方法】 以大鼠PC12细胞为多巴胺能神经元细胞模型,以10~ 50 mmol/L不同浓度的SB加入PC12细胞,培养24 h后,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;DAPI染色观察细胞凋亡形态;流式细胞术检测细胞凋亡状况以及用Westernblot检测TH蛋白表达。【结果】 SB可呈浓度依赖性抑制PC12细胞活性,并诱导PC12细胞核形态呈凋亡改变;流式细胞术检测显示随着SB浓度增加,
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目的用基因工程技术表达2′,5′腺苷酸酶(2-5AS)蛋白为抗原制备单克隆抗体,供荧光素标记抗体流式细胞术检测细胞内2-5AS应用。方法将2-5AS基因片段插入到带有His.Tag的pET-30a(+)质粒,并转化到宿主菌E.coli.BL21(DE3),ITPG诱导表达,Ni柱纯化,获得2-5AS蛋白后制备单克隆抗体。结果插入片段酶切测序证实,插入的片段与目的片段序列相符;Ni柱纯化过程中可见目的蛋白的洗脱峰;经Tricine-SDS-PAGE电泳,Western Blotting鉴定,得到表达蛋白 ...
宋玉国, 谭冲, 黄建文, 毕胜利
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急性早幼粒细胞白血病HL60细胞适配体亲和性鉴定方法的实验研究
目的 用三种不同的检测方法鉴定HL60细胞适配体单链DNA(ssDNA)亲和性,比较不同方法的鉴定结果。方法 用荧光显微镜、化学法(酶标仪)和流式细胞术三种方法,通过镜下观察、OD值、荧光强度和平衡解离常数等指标鉴定HL60细胞适配体的亲和性。结果 荧光显微镜法可见在蓝色背景下,被标记的适配体(5’-FAM-ssDNA)与HL60细胞结合,发出绿色荧光,并应用ImageJ对该荧光结果进行分析,发现L36P的亲和性最高;化学法测定OD值,通过GraphPad Prism7制作柱状图并进行统计学分析 ...
高丽君 +6 more
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恒河猴IL-4与变异IL-4促进外周血单核细胞向树突状细胞转化功能的比较
【目的】比较重组的恒河猴IL-4与变异IL-4在促进外周血单核细胞向树突状细胞转化方面功能的异同【方法】 利用葡聚糖-泛影葡胺梯度离心法分离恒河猴外周血单个核细胞,阴性筛选非CD3+细胞,随后贴壁分离外周血单核细胞并进行流式细胞技术确定筛选结果将所分离的外周血单核细胞分为阴性对照组,IL-4+GM-CSF组和vIL-4+GM-CSF组进行体外培养,收集细胞并表面染色CD14CD1aCD11c和CD83进行流式细胞分析【结果】 利用三步分离的方法得到了纯度达90 ...
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