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四川大学学报. 自然科学版, 2011 piggyBac(PB)转座子的末端反向重复序列(ITR)和转座酶编码序列(PBase)分别克隆于质粒PB1156、atub-pBac-K10.1TR与包含红色荧光蛋白表达序列(RFP)的质粒pmClherry-N1重组构成供体质粒(Donor);PBase与真核表达载体pEFrF-PGK重组构成辅助质粒(Helper).使用由供体质粒与辅助质粒组成的PB二元共转染系统转染HEK293细胞,结果表明该二元共转染系统具有较好的转座活性,并且在分子水平验证了转座的发生以及使用反向PCR(IPCR ...
缪辉, 刘华华, 吴传芳
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2012 目的在大肠杆菌中表达脑钠肽前体（proBNP）及氨基末端前体蛋白（NT-proBNP）。方法采用分子生物学技术构建重组质粒PGEX-20T-proBNP和PGEX-20T-NT-proBNP,分别对其进行PCR、双酶切和测序鉴定,然后将已测序鉴定的包含两种重组质粒的工程菌,转化至大肠杆菌BL21菌中表达脑钠肽前体及氨基末端前体蛋白,并用Western-blot鉴定纯化的重组蛋白。结果在大肠杆菌中成功的表达脑钠肽前体及氨基末端前体蛋白,两种蛋白均以可溶性形式表达,更有利于保存其生物学活性 ...
何涛君 +5 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2001 目的 研究端粒酶催化蛋白亚单位（ｈＴＥＲＴ）ｍＲＮＡ在肿瘤组织中的表达情况，建立一种恶性肿瘤诊断的新方法。方法 提取肿瘤组织总ＲＮＡ，用反转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法进行检测。结果７６例各型肿瘤组织中６６例阳性，５例恶性胸腹水全部阳性。结论 ＲＴ－ＰＣＲ法检测 ｈＴＥＲＴ ｍＲＮＡ是一种灵敏、简便的恶性肿瘤辅助诊断的新方法。
邱广斌 +3 more
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四川大学学报. 自然科学版, 2004 利用加端PCR技术在 pGEX 1λT质粒BamHI和PstI位点间 (片段BamHI端 )加入α amanitin线性八肽碳骨架编码序列 ,再将两次连续加端PCR产物连入BamHI、PstI双酶切的pGEX 1λT载体 ,得到含α amanitin线性碳骨架编码序列的阳性重组子pGAT 1 .序列测定和结果分析显示 ,构建的融合基因相位正确 ,阅读框通读 .通过对融合基因在大肠杆菌中表达条件的优化 ,目的融合蛋白的表达量可提高 33.5 %,占总蛋白表达量的 2 8.3%.
赵建 +6 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 1997 本研究采用改良的ＴＲＡＰ—银染法，检测了临床外科切除肝癌组织１５例，端粒酶阳性率为８６．６％（１３／１５）；邻近肝组织１５例，２例阳性（２／１５）；５例肺癌肺纤维支气管镜刷落细胞肺癌５例，阳性４例，肺炎７例均为阴性；肿瘤细胞株２例则为阳性。结果表明，肿瘤细胞的端粒酶活性明显高于正常细胞。在极少量脱落细胞中检测端粒酶活性也同样得到较满意的结果，提示我们的实验方法敏感、可靠、简便易行。
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2007 目的构建人PTEN绿色荧光蛋白真核表达载体并进行鉴定。方法参照PTEN基因全序列,在cDNA两端各设计一条对应引物,并引入各自的酶切位点。从正常人胎盘组织中提取mRNA作为模板合成第一链,并扩增目的基因序列片段,经双酶切后定向克隆至绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1中,筛选阳性重组质粒,分别经双酶切、测序法对重组质粒进行鉴定。结果双酶切和特异PCR结果表明克隆的基因片段约1.2 kb;测序法进一步证实该基因为PTEN编码基因,经NCBIBLAST分析与Gene Bank中基因序列完全相同 ...
武鸿斌 +4 more
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四川大学学报. 自然科学版, 1999 用来自大肠杆菌的潮霉素Ｂ磷酸转移酶基因（ｈｙｇｒ）作为遗传标记构建了启动子探针型载体ｐＳＵＰＶ８，该基因的转录和翻译起始区以及５’－端编码区两个密码子均被除去，载体骨架为大肠杆菌质粒ｐＵＧＶ２ ...
李维, 张义正
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2002 【目的】构建携带γ-干扰素基因(ifn-γ)的pIRES 改进型黄色荧光蛋白载体(pIRES-EYFPIFN-γ), 为γ-干扰素基 因的体内外表达及蛋白定位提供理想的标记。【方法】根据已知γ-干扰素基因序列, 设计在目的片段两端分别带EcoRⅤ和 Not Ⅰ 酶切位点序列的2 条引物, 用PCR 技术从质粒pcDNA3IFN-γ中扩增出ifn-γ(499 bp), PCR 产物用EcoRⅤ 和Not Ⅰ 双 酶切后回收纯化, 定向克隆至商品质粒pIRES-EYFP, 重组质粒pIRES ...
蓝育青 +6 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 近年来大量研究文献表明苦参碱具有抑制部分肿瘤细胞的增殖与转移,通过诱导肿瘤细胞的凋亡和分化,导至端粒酶和BCL-2表达的变化影响及抑制肿瘤转移等方面的研究取得了相应进展 ...
温本, 杨志华, 郑文滔
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[Research progress on cellular senescence and liver diseases]. [PDF]
Zhonghua Gan Zang Bing Za ZhiZhang LT, Hu JM, Wang JW, Li H, Qin YJ.
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