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一株新的重组蛙病毒A67R-RGV的构建及基因67R的初步功能鉴定
, 2014 沼泽绿牛蛙病毒(Rana grylio virus, RGV)属于虹彩病毒科(Iridoviridae),蛙病毒属(Ranavirus),其基因组中含编码尿嘧啶脱氧核糖核苷三磷酸酶(dUTPase)的基因67R。通过构建缺失67R的重组病毒A67R-RGV,探讨67R在RGV复制和感染过程中的功能。首先构建携带有作为标记的绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescence protein, EGFP)基因的质粒(pGL3-67RL-p50-EGFP-67RR ...
裴超, 张奇亚, 黄星, 何利波
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, 2004 目前基因治疗,尤其是对癌症的基因治疗越来越多地得到人们的关注.随着基因工程技术的发展,对癌症在基因水平上的认识不断深化,发现了很多对治疗癌症有帮助的基因,但临床面临的最大问题就是如何建立一个安全、高效、实用、可重复的基因转移系统,将这些治疗基因有效地导入靶细胞.人们构建了各种载体,重组腺病毒就是基因治疗的重要载体之一.能否生产出大量高质量的腺病毒载体是制约体外实验和临床实验的关键因素.本文从感染机制 ...
祁丽,顾铭,丛威
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携带人可溶性TRAIL基因的重组腺病毒在肺癌细胞中的转染效率及表达特性研究
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的研究重组腺病毒感染肺腺癌细胞A549的转染效率及重组腺病毒介导的人可溶性肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（hTRAIL95-281）基因的体外表达。方法用不同感染滴度（MOI）（0-10 000 VP/cell）的重组腺病毒Ad-CMV-EGFP转染A549细胞后48 h收集细胞,经流式细胞仪检测其转染效率,并在共聚焦荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达;用MOI为5 000 VP/cell的Ad-CMV-EGFP感染肿瘤细胞后不同时间（24 h、48 h、72 h和96 h）收集细胞 ...
朴春姬, 田梅, 杨巍, 李修义
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SIK2 shRNA重组腺病毒载体构建及其在3T3-L1脂肪细胞的表达
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的构建特异性小鼠盐诱导基因（Salt induced kinase2,SIK2）的shRNA腺病毒载体,干扰脂肪细胞中SIK2的表达。方法设计3对靶向SIK2的shRNA,插入穿梭质粒pENTR/U6载体,转染3T3-L1脂肪细胞,通过Real-timePCR方法筛选最佳沉默SIK2效果的穿梭质粒,经腺病毒同源重组后,重组小鼠SIK2shRNA腺病毒载体经脂质体转染HEK293A细胞,在细胞内包装获得腺病毒颗粒AdV-SIK2-shRNA,并进行大量扩增和纯化。纯化的腺病毒感染成熟的3T3 ...
杜静 +5 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2004 目的 构建人VEGF16 5腺病毒表达载体 ,探讨应用血管内皮生长因子 （VEGF）基因治疗脑梗死的可行性。方法 采用分子克隆技术 ,以质粒hVEGF16 5·SR为模板 ,扩增hVEGF16 5成熟cDNA。经穿梭质粒PShuttle克隆到腺病毒质粒上 ,构成Adeno VEGF16 5腺病毒重组质粒 ,经酶切及测序鉴定正确后 ,包装成为重组Adeno VEGF16 5腺病毒 ,并进行电镜观察及滴度测定。用免疫印迹及免疫组化方法检测VEGF蛋白的表达。结果 ...
张海鸥, 吴军, 林凯华, 易黎
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四川大学学报. 自然科学版, 2009 用RT-PCR从A293细胞中克隆hPNAS-4编码区cDNA,将其酶切后连接至pEN-TRll载体上,再通过同源重组作用将hPNAS-4基因片段重组至腺病毒骨架载体上,构建腺病毒重组质粒,最后经293细胞的包装扩增后得到携带hPNAS-4基因的重组腺病毒;将重组腺病毒体外感染人肺癌A549细胞;RT-PCR测得感染细胞中hPNAs-4表达明显上调,MTT测得细胞增殖受到明显抑制,流式细胞仪测得细胞凋亡率明显升高,琼脂糖凝胶电泳显示其基因组DNA有明显的梯状条带.以上结果表明hPNAS ...
倪睿 +4 more
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, 1999 经对患暴发性传染病的鳜组织及病变细胞超薄切片的电镜观察，在细胞质、核及间隙中都有病毒颗粒。对该病毒进行了分离提纯，这是一种直径约为280um球形病毒。将粗提病毒液接种到培养细胞中，会引起细胞病变；病毒通过人工感染健康鳜，会引起鳜发病和死亡。对患病鳜进行解剖和组织病理观察，表明病鳜的5种器官都发生了病变。研究结果表明所分离的鳜病毒（Sinipercachuatsivirus，SCV ...
张奇亚,李正秋
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重组腺病毒载体携带反义微小RNA-21对膀胱癌细胞生长的作用
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的探讨重组腺病毒载体介导的微小RNA-21（miRNA-21）反义寡核苷酸（ASOND）对人膀胱癌细胞株T24生长的影响。方法构建反向插入miRNA-21基因的重组腺病毒载体（rAV-miRNA-21）,并用反义rAV-miRNA-21转染T24,即病毒载体用药组。采用噻唑蓝（MTT）法和原位末端标记（TUNEL）法检测T24细胞的增殖和凋亡情况。同时设对照组和空病毒组作为对比。结果 rAV-miRNA-21用药组、对照组和空病毒组T24细胞的增殖率分别为（37.1±6.8）%（、95.7±5.8）%（
朱德淳 +4 more
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两种不同AFP启动子控制下表达HIV vpr基因的重组非复制型腺病毒获得及鉴定
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2004 目的 构建及包装由全长 5 1kbAFP启动子和低氧反应元件 （HRE）与 0 3kbAFP启动子两者组合的杂合0 3kbAFP启动子控制下表达HIVvpr基因的两种重组非复制型腺病毒。方法 采用细菌内同源重组腺病毒载体制备方法和PacI酶切、PCR、SouthernBlot鉴定方法。结果 构建及包装出由这两种AFP启动子控制下表达HIVvpr基因的重组非复制型腺病毒 ,经PacI酶切、PCR和SouthernBlot基因整合分析证明构建成功。结论 我们成功构建了的全长5 ...
魏强 +4 more
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重组腺病毒介导RECK基因在大肠癌细胞中的表达及抑制癌细胞浸润能力的实验研究
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2005 目的 研究重组腺病毒介导RECK基因转染大肠癌细胞后基因的表达情况,并观察转染细胞浸润能力变化。方法 构建了RECK基因的复制缺陷型重组腺病毒载体adRECK ,以adRECK转染大肠癌癌细胞株后,用RT PCR法检测RECK基因在大肠癌中的表达。并用Boyden小室测试转染细胞的侵袭性。结果 RECK基因在转染细胞中有效的表达。被转染细胞浸润能力明显下降。结论 重组腺病毒介导RECK基因能够在大肠癌细胞中有效的表达,转染病毒的大肠癌浸润能力明显下降。
杨德君 +4 more
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