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采用碱热法溶解青霉素菌丝,研究酶法催化水解菌丝溶解液中蛋白质转化为氨基酸的过程。考察酶种类、溶解液pH值、酶与蛋白质质量比、反应温度和时间等因素对蛋白质水解度的影响,建立最佳水解工艺。结果表明,酶种类、酶与蛋白质之比、p H、温度和时间均对蛋白质水解过程产生影响。以单酶为催化剂,碱性蛋白酶催化水解效果最好,蛋白质水解度达31.43%。以碱性蛋白酶(A)和菠萝蛋白酶(B)组成的复合酶(A:B=2:1)催化水解效果更好,在复合酶与蛋白质的质量比9%、p H=10、反应温度50℃、反应时间3 h条件下 ...
张展敖, 刘庆芬
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辛伐他汀含药血清对U937单核巨噬细胞MMP-9及TIMP-1表达与分泌的影响
【目的】探讨辛伐他汀含药血清对U937单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达与分泌的影响。【方法】15只新西兰大白兔随机分为正常对照组(NL,n=5)、粥样硬化模型组(AS,n=5)和辛伐他汀含药血清组(SIM,n=5)。通过喂养高脂饲料,建立兔动脉粥样硬化模型后,予辛伐他汀药液灌胃,获得含药血清。分别予不同浓度含药血清(5%、10%、20%)培养U937单核细胞源巨噬细胞24 h,应用逆转录聚合酶链反应检测MMP-9 mRNA及TIMP-1 ...
刘金来, 朱强锋, 郝宝顺
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膜色谱结合了膜过滤高通量和液相色谱高选择性的特点,能够高效地从复杂料液如发酵液、血浆、乳清中获得纯度较高的生物活性分子,因此在生物产品制备领域具有广阔的应用潜力。然而,现阶段膜色谱介质(基膜材料)存在稳定性较差、机械性能欠佳及其制备工艺复杂、不易控制等问题。本研究采用简单易操作的聚多巴胺(PDA)涂覆对机械强度较高的微滤膜进行活化,然后以PDA为中间功能层偶联膜色谱配基构建多种膜色谱介质,并应用于蛋白分离纯化和酶的固定化。(1)通过将PDA涂覆于亲水性聚醚砜膜(PES)形成中间功能层 ...
樊金鑫
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垂体腺瘤中的PTTG、MMP-2、MMP-9的表达与垂体腺瘤侵袭性的关系
PTTG是近年来新发现的一种垂体瘤转化基因,肿瘤的侵袭性生长过程中,基质金属蛋白酶(MMPs)发挥了重要作用。本研究采用免疫组化的方法研究垂体腺瘤中PTTG、MMP-2、MMP-9的表达与垂体腺瘤侵袭性的关系,并探讨这些指标进入临床的可能意义,说明对侵袭性垂体腺瘤采取包括手术、放疗 ...
张扬, 张晓娜, 朱晓波, 韩志国
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蛋白质磷酸化是真核细胞中最普遍的翻译后修饰,几乎调控着蛋白的所有功能。在细胞信号转导中,激酶对底物的特异性磷酸化是研究得最多的重要调控机理之一,鉴定激酶底物不仅有助于研究细胞的生理学和病理学功能,而且有可能发现药物治疗的新靶点。本论文将蛋白质组学和体外磷酸化结合起来,发展了鉴定激酶底物以及底物模体的新方法。采用细胞裂解液作为蛋白来源,溴化氰活化的琼脂糖小珠作为蛋白载体,利用体外磷酸化和蛋白质组学策略发展了大规模鉴定激酶底物的新方法。当酪蛋白激酶2 作为模型激酶时,通过LC-MS/MS 检测 ...
张曼玉
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【目的】 对亚洲牛带绦虫钙调神经磷酸酶B基因(CaN)进行克隆65380;表达和免疫学初步研究65377;【方法】 将亚洲牛带绦虫成虫钙调神经磷酸酶B基因克隆到原核表达质粒pET*9鄄30a(+)中,在大肠杆菌BL*9鄄21/DE3中用诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠*9鄄聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS*9鄄PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹进行免疫学分析65377;【结果】 PCR65380;双酶切及DNA测序结果均表明重组质粒pET*9鄄30a ...
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目的探讨非小细胞肺癌患者血清基质金属蛋白酶-9水平与转移及预后的关系。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测67例肺癌患者血清MMP-9水平。结果肺癌组血清MMP-9水平显著高于正常对照组;有淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组;Ⅲ期、Ⅳ期组显著高于Ⅰ+Ⅱ期组;生存期小于12个月组血清MMP-9水平显著高于生存期大于12个月组。结论血清MMP-9水平测定可作为肺癌转移和预后的重要指标。
丁慧鑫, 王杨, 张爽
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目的观察大鼠坐骨神经挤压伤后基质金属蛋白酶(MMP)-2和-9的表达,及其随损伤后恢复时程的变化。方法建立大鼠坐骨神经挤压伤模型,用明胶酶谱测定损伤后神经组织内MMP-2和MMP-9的活性变化;Western-blot检测确认所消化条带的属性。结果正常坐骨神经组织内仅表达MMP-2,不表达MMP-9;坐神经挤压伤后1 d时,MMP-9表达水平最高;MMP-2在坐骨神经损伤后表达水平略有增加,7 d时最高。Westernblot检测确认所消化的条带是MMP-2和MMP-9。结论MMP-2和MMP ...
何凤君, 包晓群, 杨德君
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纳米材料在进入生物系统后会与生物系统中的蛋白质发生相互作用形成蛋白质环冠,从而使纳米材料的生物识别性质发生改变,引起细胞或生物体的不同生理反应。本论文的研究工作主要致力于以生物质谱为基础的针对纳米材料与蛋白质相互作用的蛋白质组学新技术和新方法及纳米材料上蛋白质环冠的研究。针对Fe3O4纳米材料表面蛋白质环冠的形成问题,以蛋白质组学方法对三种不同粒径Fe3O4纳米粒子的表面血浆蛋白质环冠进行了研究,发现粒径大小对于Fe3O4纳米粒子表面吸附的血浆蛋白质的种类和丰度均具有非常重要的影响 ...
胡争艳
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