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建立检测血清HBV DNA的多聚酶链反应技术。人工合成adr、adw和ayw三个业型HBV的两个共有序列NC1和NC2作为引物扩增一长428bp且含一BglⅡ酶切点的HBV C基因片段。含FD酶的反应体系在水浴93℃30秒、55℃60秒、72℃90秒依序循环30周期,当克隆HBV DNA模板最小加量为10 fg时,产物作琼脂糖凝胶电泳经溴化乙锭染色在紫外线下观察仍可见428 bp位置的阳性荧光带。阳性产物经BgⅠⅡ酶切后分为125 bp和303 bp的两个特异片段。同一条件下的阴性对照则出现阴性结果 ...
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PCR技术用于检测肝细胞癌石蜡包埋肝组织中的HBV DNA [PDF]
用多聚酶链反应(PCR)技术检测了16例肝细胞性肝癌(HCC)患者癌灶和癌旁双份组织石蜡包埋标本中的乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)。以C基因引物扩增HBV-DNA,32份标本中检出率71.87%。以新鲜冷冻肝标本作对照检出率81.25%,二者相比无显著性差别(X~=0.57,P>0.05)。以质粒提取HBV-DNA作灵敏度测定,PCR-EB可达10fg,PCR-SBH可达lag。应用非放射性的地高辛素标记探针作杂交灵敏度达~32P标记探针的水平。
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采用低浓度2-巯基乙醇作为裂解剂,配合高热变性处理血清等标本中丙型肝炎病毒核酸(HCVRNA)模板,将裂解上清直接逆转录,使HCVRNA转变为cDNA,再行套式多聚酶链反应(PCR)扩增.58份抗-HCV阳性血清标本中,可检出32份(55.2%)HCVRNA,虽与常规的酸胍酚抽提方法所检出相当(即30份被检出HCVRNA阳性,51.7%),由于这种直接法省去了用酚及氯仿抽提和醇类沉淀等步骤,具有明显的实用价值。
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摘 要 应用受体的放射配基结合分析(RBA)和多聚酶链反应-单链构象多态分析(PCR-S SCP)技术对未 经治疗的16 例前列腺癌和23 例前列腺增生症组织中雄激素受体的表达水平和雄激素受体基因第8 外显子突 变情况作检测。结果显示, 前列腺癌中雄激素受体的平均水平明显高于前列腺增生症, 在2 例前列腺癌和1 例 前列腺增生症标本中检出雄激素受体基因第8 外显子突变, 前列腺癌中雄激素受体的表达水平与雄素受体基 因突变和前列腺癌临床分期具有相关性。结果表明,在前列腺癌中雄激素受体有过量表达 ...
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以台湾株丙型肝炎病毒的非结构区基因序列(HCV-T3)设计内外五条呈巢式排列的引物,结合AGPC核酸一步抽提法,寡聚核苷酸探针5′末端标记法和Southern电泳转移杂交法,建立简捷特异检测HCV-RNA的逆转录一多聚酶链反应(RT-PCR)技术。应用这一技术对121例非甲非乙型肝炎患者和45例抗HCV阳性的慢性乙型肝炎患者进行了血浆HCV-RNA检测,结果阳性率分别为66.1%(80/121)和66.7%(30/45)。本文对这一技术的方法学、HCV-RNA与抗HCV的关系 ...
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窖蛋白-1(Cav-1)是胞膜窖的主要结构蛋白,可与多种信号分子相互作用,调节细胞的增殖、分化和凋亡,其异常表达与多种人体疾病的发生和发展密切相关,而在斑马鱼发育中的功能尚不很清楚。研究克隆出斑马鱼窖蛋白-1基因两个亚型的全长cDNA,与其他物种窖蛋白-1的氨基酸序列进行比较,发现该蛋白在脊椎动物中非常保守。利用逆转录多聚酶链反应检测发现,在斑马鱼多个成年组织中窖蛋白-1的两个亚型均有转录表达。利用胚胎整体原位杂交检测组织或器官特异基因的时空表达变化发现,过表达或利用Morpholino反义寡聚核苷酸(
厉洁 +4 more
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采用单克隆抗-HBe固相ELISA法检测118例HBV感染者血清中HBeAg特异免疫复合物(HBeAg/IC),结果表明∶HBeAg/IC与HBV复制相关,可作为HBV复制的一种血清学标志,HBeAg阴性、HBVDNA阳性者中,62.2%患者HBeAg/IC阳性,提示HBeAg/IC的形成致使夹心法不能检出HBeAg,这类患者仍可以是HBV野毒株感染,并非均为HBeAg缺陷变异株感染;HBeAg/IC阳性血清ALT异常率明显高于HBeAg/IC阴性血清(P<0.01),提示HBeAg ...
任建林, 刘宇卉, 张树林, 朱江
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Role of RNA helicase DHX32 in the metastasis of hepatocellular carcinoma [PDF]
肝细胞癌是全球性的高致死率肿瘤之一,血管侵犯和转移是肝细胞癌患者术后易复发及5年生存率较低的重要原因,有效的抗转移策略无疑能给患者带来福音。因此,越来越多的研究致力于探讨肝细胞癌发生侵袭转移的分子机制,并希望通过找到某些关键分子来干预肿瘤的转移。 DHX32是人类RNA螺旋酶的家族成员之一,最早被发现是在急性淋巴细胞白血病中低表达并参与淋巴细胞的分化,但是它的生物学功能尚未明确。我们课题组前期通过差异基因显示技术发现DHX32在结直肠癌中表达上调,功能研究结果显示DHX32与结直肠癌细胞的增殖 ...
胡情
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Expression, Biochemical Characterization and Structure Resolution of β-Glucosidase from Paenibacillus barengoltzii(巴伦葛兹类芽孢杆菌β-葡萄糖苷酶的表达、酶学性质及结构解析) [PDF]
A β-glucosidase gene from Paenibacillus barengoltzii CAU904 was cloned and heterologously expressed in E. coli. The recombinant enzyme was purified and biochemically characterized, and its crystal structure was further resolved.
HUANG Ping(黄平) +3 more
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