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目的建立沙门氏菌实时荧光定量PCR的快速检测方法 ,探讨该方法的可行性和应用价值。方法根据沙门氏菌fimY基因序列设计引物和探针,采用基因重组技术构建用于沙门氏菌检测的定量标准品,建立实时荧光定量PCR检测沙门氏菌的方法。结果成功构建了沙门氏菌重组质粒标准品和沙门氏菌实时荧光定量PCR方法 ;通过特异性、敏感性、稳定性和重复性验证,结果表明具有较好的特异性、敏感性、稳定性和重复性;对模拟标本与分离培养对比,二者符合率为100%。结论沙门氏菌实时荧光定量PCR检测方法的建立 ...
杨柳 +8 more
doaj
Detection of MTAP Protein and Gene Expression in Non-small Cell Lung Cancer [PDF]
Background and objective The abnormal expression of MTAP, a tumor suppressor gene, is found in a variety of tumor tissues. The aim of this study is to detect the expression of MTAP mRNA protein and the clinical significance for the therapy of non-small ...
Baoqing DING +3 more
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人TIM-1和TIM-3 mRNA实时SYBR Green Ⅰ定量RT-PCR检测方法的建立
目的建立实时SYBR Green I定量RT-PCR检测人TIM-1和TIM-3mRNA的方法。方法从人外周血单个核细胞提取的总RNA中逆转录扩增人TIM-1和TIM-3的cDNA,将将纯化的人TIM-1和TIM-3的扩增产物分别与pMD18-T Simple载体进行连接,转化宿主菌DH5α,提取重组质粒DNA,PCR鉴定并测序分析。纯化质粒并检测260nm吸光值,确定重组质粒原液的拷贝浓度并以此制备荧光定量PCR梯度浓度标准品,进行实时荧光定量PCR实验。结果建立了TIM-1和TIM ...
陈治中 +3 more
doaj
Mechanism Analysis of TNF-α Production and Function Inhibited by Compound C2D [PDF]
本论文在前期进行的TNF-α抑制剂筛选工作基础上,对活性单体化合物 C2D拮抗TNF-α诱导的细胞坏死的作用机理进行了初步研究。研究内容包括: 1.构建绿色荧光蛋白-TNF融合蛋白;2.在细胞水平上探讨小分子拮抗剂的作用 机制。 肿瘤坏死因子(TumorNecrosisFactor,TNF)是一类由巨噬细胞和单核细胞 分泌产生的多功能细胞因子,其中由巨噬细胞分泌的称为TNF-alpha(TNF-α)。 作为炎症反应中重要的细胞因子,TNF-α可以通过细胞膜表面受体TNFR1和 ...
刘毅
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为探究低温条件下东北林蛙(Rana dybowskii)肝脏中GSK3β基因表达量变化,需利用荧光定量PCR(Fluorescence quantitative real-time PCR)对GSK3β基因表达量进行检测,而在此过程中PCR引物的筛选直接影响到检测结果数据的准确性与真实性。本实验以东北林蛙为实验对象,基于本研究组前期获得的东北林蛙转录组数据库,并参考其他物种GSK3β基因,利用Beacon Designer 7软件设计了6对引物,采用逆转录PCR和实时荧光定量PCR技术 ...
张 宇 巩珊珊 柴龙会 张晶钰 肖向红
doaj
Comparative proteomic analysis reveals cold acclimation enhances the cold tolerance in mangrove plant Sonneratia apetala [PDF]
低温是一种重要的非生物胁迫因子,对植物的产量、分布具有重要的影响,特别是对生长、发育起着至关重要的作用。无瓣海桑(Sonneratiaapetala)是一种重要的红树植物,自1985年从孟加拉国引入中国后,以其生长迅速、树体高大、结实率高、在抵御护花米草入侵中发挥重要作用等特点迅速成为红树林湿地生态恢复中的理想树种。但无瓣海桑对低温较敏感,不耐寒,因此温度成为其生长和分布的重要限制因子之一。本论文研究经低温驯化和未经低温驯化无瓣海桑响应寒害的生理变化以及差异表达蛋白特性,阐明无瓣海桑的可能耐寒机理 ...
罗美蓉
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目的探讨比较荧光定量RT-PCR、普通RT-PCR和细胞培养3种方法在流感病毒检测中的应用,从而确定每种方法各自的实用领域。方法通过荧光定量RT-PCR、普通RT-PCR和狗肾传代细胞(MDCK)培养3种方法检测398件流感样病例(ILI)咽拭子样本。比较3种方法的灵敏度和特异性。结果实时荧光RT-PCR检测阳性样本129件(阳性率为32.4%);普通RT-PCR检测出阳性样本93件(阳性率为23.4%);MDCK细胞培养法分离出流感病毒64株(阳性率为16.1%)。荧光定量RT-PCR的灵敏度达到0 ...
张巍巍, 张丽荣, 胡钰
doaj
Evaluation of Therapeutic Efficacy and Disease Activity in Early Syphilis Based on Real-time Quantitative PCR [PDF]
背景:至今,梅毒活动性和疗效评价依然困难,缺乏梅毒疗效评判标准,临床上通常采用血清非特异性抗体滴度和/或滴度四倍下降作为参考指标。然而,有关梅毒患者在梅毒螺旋体(Treponemapallidum,T.pallidum)自然感染过程中非特异性抗体变化仍然不清。本研究建立T.pallidum感染早期梅毒兔模型,监测自然感染和抗生素治疗过程中血清RapidPlasmaReagin(RPR)滴度和皮损中核酸载量变化,以及不同脏器中梅毒螺旋体核酸的分布,并进一步采用脏器标本接种新西兰兔观察感染率和疗效 ...
朱晓桢
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目的体外构建DNA氧化损伤模型,荧光实时定量PCR检测线粒体DNA氧化损伤。方法体外应用亚甲蓝联合可见光(MBL)方法建立DNA氧化损伤模型,通过8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(OGG1)特异性切割氧化损伤位点8-羟基鸟嘌呤(8-oxoG),运用荧光实时定量PCR法检测不同比例混匀的OGG1酶切与未酶切的DNA氧化损伤模板。结果成功构建体外氧化损伤DNA模型,OGG1酶能特异切割氧化损伤位点;OGG1酶切DNA在定量PCR体系模板中所占比例,与线粒体DNA编码基因COⅡ扩增Ct值呈正相关 ...
孙玉 +6 more
doaj
The association between the antioxidant property and ROS system in murine corneal epithelial progenitor cells [PDF]
目的:活性氧(ROS)是体内产生的一种高活性分子,低浓度可以调节细胞代谢,基因转录和磷酸酶的活性,高浓度则会导致氧化损伤。目前,有关干细胞自身特性的研究越来越受到学者们的重视,但既往文献中关于干细胞对氧化应激反应以及应激条件下细胞内相关酶活性的变化规律却很少报道。本课题聚焦于,在过氧化氢(H2O2)诱导的氧化应激条件下,活性氧生成关键因子NOX4和抗氧化酶核转录因子NRF2在小鼠角膜上皮祖细胞(TKE2)和成熟的小鼠角膜上皮细胞(MCE)中的不同作用及相关机制。 方法:利用小鼠角膜上皮祖细胞(TKE2 ...
周晶
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