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人HMGN5基因shRNA慢病毒载体构建与RNAi效率的鉴定
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的构建人HMGN5基因的shRNA慢病毒载体并鉴定在肺癌A549和H1299细胞上的沉默效率。方法设计HMGN5基因特异性siRNA靶点,构建于慢病毒pLL-3.7载体,并筛选获得有效的shRNA慢病毒载体,在293T细胞包装成病毒颗粒,将其感染肺癌A549和H1299细胞,应用Real-time PCR方法从mRNA水平上检测HMGN5的沉默效率。结果构建的慢病毒载体shRNA的PCR鉴定和测序正确,包装病毒后滴度达到5×108TU/ml ...
陈鹏 +8 more
doaj
Construction of Combind-RNAi Element Targeting to Conserved Regions of HIV-1 and Cell Receptor Gene [PDF]
, 2009 RNA干扰技术(RNAi)是HIV-1治疗研究方面已展示出具有很好的应用潜力。然而，由于HIV-1病毒的高突变率，其在RNAi靶点序列的碱基突变可显著降低或解除RNAi介导的抑制效果。因此有效的抗病毒突变策略是目前RNAi技术抗HIV-1研究的重点。多靶点抑制策略有望降低病毒逃逸突变对RNAi治疗措施的影响，本研究即探讨构建可高效靶向HIV-1与HIV-1细胞受体蛋白的多靶点RNAi元件。 本实验室在之前的研究中，设计了165个靶向HIV-1基因组不同保守区域的siRNA ...
魏丽华
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2018 【目的】建立稳定miR-18a过表达及表达的人鼻咽癌细胞系，为研究miR-18a在鼻咽癌发生发展中 的功能奠定基础。【方法】将miR-18a前体的编码基因片段及miR-18a反义寡核苷酸克隆到慢病毒载体中，DNA 测序鉴定；将构建好的载体转染293T细胞，获得重组miR-18a过表达及抑制表达的慢病毒载体，感染人鼻咽癌细 胞CNE1和CNE2，嘌呤霉素筛选获得稳定干扰miR-18a表达及过表达miR-18a的细胞系，PCR及western blot鉴 定。【结果】成功构建真核表达的慢病毒miR ...
常利红 +5 more
doaj
重组慢病毒对不同哺乳动物细胞基因转移及表达效率的研究 [PDF]
, 2008 慢病毒是一种具有独特优点和巨大应用潜力的哺乳动物细胞基因转移载体,我们对慢病毒载体对不同哺乳动物细胞的基因转移及表达效率进行了平行比较研究.应用第三代重组慢病毒系统构建了携带CMV启动子-EGFP报告基因表达元件的重组慢病毒Lenti-EGFP,分别对多种不同哺乳动物细胞进行转导实验,在转导48 h后应用流式细胞仪检测报告基因在不同细胞株中的转移及表达效率.我们共使用了29种哺乳动物细胞株,包括14种人类组织细胞,5种猴组织细胞,9种鼠组织细胞,1种兔组织细胞.结果显示,重组慢病毒具有良好的基因转移能力,
夏宁邵 +8 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2014 目的构建Tet-on调控的人HOXB4慢病毒载体,为体外扩增造血干细胞并保持其干细胞特性提供实验材料基础。方法应用PCR技术从质粒TAT-HA-HOXB4-Full中扩增编码人HOXB4的cDNA,用限制性内切酶EcoRI分别酶切HOXB4基因片段和带有Tet-on开关的可调控慢病毒载体,经T4DNA连接酶连接获得慢病毒载体Teto-Fuw-hHOXB4。对构建的HOXB4慢病毒载体进行酶切片段凝胶电泳及DNA测序分析。结果酶切片段电泳分析和DNA测序分析证明Tet ...
李秀英 +5 more
doaj
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的探讨慢病毒载体在CD34+脐血细胞（CBCs）中的基因转导效率,为基因治疗的临床应用提供关键材料。方法应用1型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）改造而成的第三代自身失活（self-inactivating,SIN）慢病毒载体（lentiviralvector）系统,通过流式细胞术检测基因导入细胞百分比,评价该载体系统在人CBCs中的基因转导效率。结果 HIV载体的转导效率在95%以上。结论基于慢病毒载体基因转导的高效性,该载体系统可作为CD34+CBCs基因转导的极好工具。
卢振霞, 白元松, 林玉梅
doaj
Epithelial-mesenchymal Transition in Renal Cell Carcinoma: The Role of Hepatocyte Nuclear Factor 4α [PDF]
, 2013 【背景及目的】 肾癌（renalcellcarcinoma，RCC）是起源于肾小管上皮细胞的恶性肿瘤，占肾脏恶性肿瘤的80％~90％，近年来发病率呈上升趋势。除传统手术治疗外，缺乏其它的有效治疗方法。上皮间质转化(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)是上皮细胞在细胞结构、形态、功能等方面获得间质细胞特性的过程，在肿瘤的发生、浸润、转移过程中具有重要作用，核心为上皮标志物E-cadherin表达降低和间质标志物表达增高。肝细胞核因子4α ...
谭伟
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应用双靶标CRISPR慢病毒载体在间充质干细胞中稳定敲除lncRNA DANCR基因
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2019 【目的】应用CRISPR/Cas9方法，构建特异性靶向长链非编码RNADANCR基因两端的双靶标慢病毒载体，稳定敲除间充质干细胞（MSC）中的DANCR基因，为研究DANCR的生物学功能奠定基础。【方法】首先设计靶向DANCR的5’和3’端的sgRNA（single-guideRNA），转染293FT细胞，提取293FT细胞基因组DNA，验证靶向序列的有效性。然后通过gateway和酶切连接的方法，将分别靶向5’和3’端的两条有效sgRNA序列连接至同一慢病毒CRISPR载体 ...
彭丹, 钟小敏
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靶向HIV-1pol的高效人工miRNA的构建与体外抗病毒能力评价 [PDF]
, 2010 RNAi技术在抗HIV-1治疗研究中已显示出巨大潜力,获得可高效特异抑制HIV-1的RNAi元件是进行相关研究的重要基础。miRNA在抑制和表达方式上相比siRNA具有更多的优势。本研究即探讨构建可高效特异靶向HIV-1的人工miRNA元件。选择以保守性较好的HIV-1pol基因为靶区筛选高效保守的RNAi序列,设计了16个可靶向pol区高保守区段的RNAi靶点,构建表达载体与HIV-1感染性克隆进行共转染抑制实验,筛选显示pol1026序列兼具高保守性及高抑制效率特点。以天然miR ...
夏宁邵 +7 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2012 目的研究靶向沉默增殖诱导配体（aproliferation-inducing ligand,APRIL）基因对人胃癌MGC803细胞增殖及细胞周期的影响。方法构建含有APRIL的siRNA序列的慢病毒载体并转染人胃癌MGC803细胞,以非特异性序列nonsilencing siRNA作为对照。通过Real-time PCR（RT-PCR）评价APRIL的沉默效率;MTT法检测沉默A-PRIL基因后,细胞增殖的变化;流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果 RT-PCR测序证实,成功构建APRIL siR ...
蒿姗姗, 李薇, 王畅, 崔久嵬
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