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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2014 目的构建Tet-on调控的人HOXB4慢病毒载体,为体外扩增造血干细胞并保持其干细胞特性提供实验材料基础。方法应用PCR技术从质粒TAT-HA-HOXB4-Full中扩增编码人HOXB4的cDNA,用限制性内切酶EcoRI分别酶切HOXB4基因片段和带有Tet-on开关的可调控慢病毒载体,经T4DNA连接酶连接获得慢病毒载体Teto-Fuw-hHOXB4。对构建的HOXB4慢病毒载体进行酶切片段凝胶电泳及DNA测序分析。结果酶切片段电泳分析和DNA测序分析证明Tet ...
李秀英 +5 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的探讨慢病毒载体在CD34+脐血细胞（CBCs）中的基因转导效率,为基因治疗的临床应用提供关键材料。方法应用1型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）改造而成的第三代自身失活（self-inactivating,SIN）慢病毒载体（lentiviralvector）系统,通过流式细胞术检测基因导入细胞百分比,评价该载体系统在人CBCs中的基因转导效率。结果 HIV载体的转导效率在95%以上。结论基于慢病毒载体基因转导的高效性,该载体系统可作为CD34+CBCs基因转导的极好工具。
卢振霞, 白元松, 林玉梅
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2012 目的研究靶向沉默增殖诱导配体（aproliferation-inducing ligand,APRIL）基因对人胃癌MGC803细胞增殖及细胞周期的影响。方法构建含有APRIL的siRNA序列的慢病毒载体并转染人胃癌MGC803细胞,以非特异性序列nonsilencing siRNA作为对照。通过Real-time PCR（RT-PCR）评价APRIL的沉默效率;MTT法检测沉默A-PRIL基因后,细胞增殖的变化;流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果 RT-PCR测序证实,成功构建APRIL siR ...
蒿姗姗, 李薇, 王畅, 崔久嵬
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2013 目的构建人Shh基因过表达慢病毒载体,转染293T细胞,建立稳定转染人Shh基因的293T的细胞系。方法设计引物引入AgeⅠ酶切位点,使用PCR方法从质粒中扩增Shh基因的编码区序列,对所扩增出的目的片段回收纯化。将AgeⅠ内切酶消化后目的片段交换连接入pGC-FU载体,构建Shh慢病毒表达载体pGC-FU-Shh。酶切验证并测序正确后,将质粒pGC-FU-Shh与携带GFP的慢病毒辅助包装载体共转染293T细胞,荧光显微镜检测慢病毒载体转染细胞的结果,重组质粒pGC-FU-Shh的测序,Western
边学海 +6 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2016 目的构建重组HDAC1基因的短发夹RNA（shRNA）慢病毒干扰质粒并研究其对卵巢癌COC1细胞HDAC1表达的影响。方法针对HDAC1基因设计特异性siRNA靶点,构建慢病毒干扰质粒载体,筛选获得的有效shRNA慢病毒干扰序列,将其转染卵巢癌COC1细胞。采用Real-time PCR方法检测靶基因在mRNA水平的沉默效果,Western blot方法检测靶基因在蛋白质水平的沉默效果。结果构建的慢病毒载体shRNA的PCR鉴定和测序正确 ...
贾妍, 邹颖刚, 许天敏, 崔满华
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建介导人α-反义寡核苷酸的慢病毒载体,为α-反义寡核苷酸对β-地中海贫血基因治疗的体内试验提供稳定的转染细胞载体。方法根据人α-反义寡核苷酸序列设计siRNA、合成DNA片段,通过双限制性内切酶消化和连接的方法构建pGCSIL-vshRNA-GFP载体质粒,接着该质粒转化感受态的大肠杆菌E.coliDH5α,通过PCR及基因测序鉴定阳性克隆,再经Lipofectamine 2000将pGCSIL-vshRNA-GFP,pHelper 1.0和pHelper 2.0三质粒系统共转染293 ...
赖颖晖, 赖永榕, 杨高晖
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绿色荧光蛋白标记SOX9基因慢病毒载体的构建及在兔骨髓间充质干细胞中的表达
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2017 目的构建绿色荧光蛋白标记的SOX9基因慢病毒载体,转染兔骨髓间充质干细胞,观察SOX9基因的表达情况。方法双酶切从GeneArt提供的含SOX9基因序列的质粒13ABIV6C1366933并克隆到pLenti6.3MCSIRES2-EGFP载体,获得含SOX9基因的质粒pLMIG-13GS0345-1,通过293T细胞包装后获得绿色荧光蛋白标记的SOX9基因慢病毒载体（Lenti-SOX9-GFP）,将Lenti-SOX9-GFP转染兔骨髓间充质干细胞后观察SOX9基因的表达情况 ...
刘伟 +4 more
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大鼠TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体的构建及其对HSC-T6细胞TIMP1表达影响的研究
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2008 目的构建大鼠TIMP1 miRNA慢病毒RNAi载体,并观察其转染HSC-T6细胞后对TIMP1基因表达的影响。方法根据BLOCK-iT Poll miR RNAi Expression System with EmGFP要求,应用在线miRNA设计工具http://rnaidesigner.invitrogen.com/rnaiexpress/,针对大鼠TIMP1基因（GenBank:U06179）的598位点设计、合成Oligo DNA,退火形成双链DNA后,与载体pcDNATM6.2-GW ...
张红梅 +6 more
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, 2003 水生呼肠孤病毒为感染水生动物的一类病原体，隶属于呼肠孤病毒科新建水生呼肠孤病毒属。草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus，GCRV)是引起中国南方淡水养殖草鱼暴发性出血病病原，鲅鱼呼肠孤病毒(Threadfin reovirus，TFV)是引起海水养殖鲅鱼病毒病病原。本研究将GCRV与新加坡TFV分离株进行了部分特性比较研究。结果表明，GCRV与TFV均能感染CIK细胞，但对其它鱼类细胞系的敏感性有所差异。此外，凝胶电泳与逆转录聚合酶链式扩增显示，GCRV与TFV核酸属不同的基因型 ...
汪亚平, 方勤, 丁清泉, 朱作言
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, 2005 一种识别对虾白斑杆状病毒单链抗体的制备方法,经分离纯化病毒,将单链抗体基因克隆到噬菌体表达载体,融合蛋白的形式单链抗体片段由重链和轻链可变区域组成,用一可弯曲小肽连接成氨基酸单链,其DNA通过PCR技术对mRNA进行反转录和扩增,克隆到噬菌体表达载体,噬菌体抗体从重组噬菌体抗体cDNA文库淘选,选择专一识别对虾白斑杆状病毒的抗体,适用于对虾病毒病的早期检测,通过适合载体 ...
戴和平 +4 more
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