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应用双靶标CRISPR慢病毒载体在间充质干细胞中稳定敲除lncRNA DANCR基因 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2019 【目的】应用CRISPR/Cas9方法，构建特异性靶向长链非编码RNADANCR基因两端的双靶标慢病毒载体，稳定敲除间充质干细胞（MSC）中的DANCR基因，为研究DANCR的生物学功能奠定基础。【方法】首先设计靶向DANCR的5’和3’端的sgRNA（single-guideRNA），转染293FT细胞，提取293FT细胞基因组DNA，验证靶向序列的有效性。然后通过gateway和酶切连接的方法，将分别靶向5’和3’端的两条有效sgRNA序列连接至同一慢病毒CRISPR载体 ...
彭丹, 钟小敏
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Snail基因慢病毒载体的构建及其促进结肠癌细胞上皮间质化的研究
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2012 【目的】 构建Snail基因慢病毒载体,研究Snail基因的表达与结肠癌细胞上皮间质化的关系。【方法】 利用Gateway Technology法构建Snail基因表达质粒和空白对照质粒,行慢病毒包装,成功构建Snail基因慢病毒载体后,在结肠癌细胞系caco2中转染Snail基因质粒及空白载体对照,构建稳转细胞株caco2- Snail和caco2-vc,并在LoVo细胞中瞬时转染上述质粒,对Snail及E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达进行检测,并用划痕 ...
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使用FLAG标签肽及慢病毒载体共同筛选小鼠foxp3基因RNA干扰的有效靶点 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2007 【目的】筛选高效的foxp3 RNA干扰的靶点用于阻断CD4^＋CD25^＋ Treg细胞的免疫抑制功能。【方法】使用oligoengine软件设计foxp3基因shRNA序列，化学合成法合成4条shRNA序列，构建含foxp3的靶序列的慢病毒载体：构建出表达FLAG融合蛋白和目的基因的工具细胞293T细胞用于筛选RNA干扰的有效靶点。【结果】成功包装了4条foxp3基因靶序列相应的慢病毒颗粒；成功构建了表达融合蛋白和目的基因的293T工具细胞：在工具细胞上筛选出了2条RNAi效率分别为91.3％和95．
史艳侠 +5 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2014 摘 要: 【目的】 分析妊娠期慢性乙型肝炎病毒(HBV)携带者病毒载量与妊娠结局的关系? 【方法】 按HBV-DNA是否≥1.0 × 103 U/mL分为:HBV-DNA阳性组,172例;及HBV-DNA阴性组,206例;并设立非HBV携带者作为对照组1144例?分别比较各组产妇的住院时间?分娩孕周?剖宫产率?妊娠期并发症(早产?产后出血?妊娠期糖尿病?妊娠期高血压疾病?胎儿生长受限?羊水量异常?胎儿窘迫) 及新生儿出生体质量?新生儿窒息?新生儿高胆红素血症等的差异?【结果】 HBV-DNA阳性组 ...
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人血管内皮生长因子165慢病毒载体的构建及其抗放射所致细胞凋亡的作用
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2011 【目的】 构建人血管内皮生长因子165(hVEGF165)慢病毒表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFPhVEGF165,并转染至HT22 细胞,并进一步观察其对放射线损伤所致的细胞凋亡的保护作用【方法】 PCR扩增hVEGF165基因,克隆到pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体;通过酶切电泳,菌落PCR初步筛选和测序鉴定构建的pCDH-CMV-MCS-EF-GFP1-hVEGF165重组载体;采用磷酸钙共转染法转染293T细胞包装制备慢病毒液,并感染HT22细胞 ...
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Developmental Medicine &Child Neurology, Volume 61, Issue 3, Page E1-E35, March 2019., 2019 目的 本国际临床指南由欧洲残疾儿童学会（the European Academy of Childhood Disability，EACD）牵头制定，旨在解决发育性协调障碍（developmental coordination disorder，DCD）的定义、诊断、评估、干预以及与社会心理方面的临床应用关键问题。 方法 本指南针对五个领域的关键问题，通过文献综述和专家团队的正式讨论达成共识。为保证指南的循证基础，以“机制”、“评估”和“干预”为检索词, 对2012年更新以来提出的最新建议以及新增的“社会心理问题”和“青少年/成人”为检索词进行检索。根据牛津大学循证医学中心证据等级 (证据水平 [level of evidence, LOE]1–4) 将结果进行分类，最终转化为指南建议。并由国际 ...
Jing Hua +6 more
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一种可药物筛选及体内检测的新型慢病毒基因治疗载体的构建 [PDF]
, 2008 为实现基因治疗过程中的有效药物筛选及体内检测,首次利用核糖体内部进入位点(IRES)构建了同时携带O6-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶(MGMT)的突变型P140K基因和荧光素酶(Luciferase)基因的慢病毒载体pBobi-MIL。RT-PCR、免疫荧光、药物筛选克隆形成及化学发光检测等实验结果表明感染重组慢病毒L-MIL的细胞能同时表达MGMT及Luciferase。构建成功的新型慢病毒载体为今后的基因治疗奠定了基础 ...
程通 +9 more
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蛙病毒同源蛋白rgv27r和adrv85l的表达及其免疫原性分析
, 2019 沼泽绿牛蛙病毒(Rana grylio virus,RGV)和大鲵蛙病毒(Andrias davidianus ranavirus,ADRV)同属虹彩病毒科(Iridoviridae)蛙病毒属(Ranavirus)成员,是引起水产动物高死亡率的病原。其同源早期蛋白RGV-27R和ADRV-85L与蛙病毒代表株蛙病毒3型(Frog virus 3,FV3)25R基因所编码的大小为31 kD的早期蛋白P31K(FV3-P31K)同一性超过99%。我们在观察和比较RGV与ADRV感染大鲵胸腺细胞(Giant ...
柯飞, 张奇亚, 明成玥
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人HMGN5基因shRNA慢病毒载体构建与RNAi效率的鉴定
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的构建人HMGN5基因的shRNA慢病毒载体并鉴定在肺癌A549和H1299细胞上的沉默效率。方法设计HMGN5基因特异性siRNA靶点,构建于慢病毒pLL-3.7载体,并筛选获得有效的shRNA慢病毒载体,在293T细胞包装成病毒颗粒,将其感染肺癌A549和H1299细胞,应用Real-time PCR方法从mRNA水平上检测HMGN5的沉默效率。结果构建的慢病毒载体shRNA的PCR鉴定和测序正确,包装病毒后滴度达到5×108TU/ml ...
陈鹏 +8 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2018 【目的】建立稳定miR-18a过表达及表达的人鼻咽癌细胞系，为研究miR-18a在鼻咽癌发生发展中 的功能奠定基础。【方法】将miR-18a前体的编码基因片段及miR-18a反义寡核苷酸克隆到慢病毒载体中，DNA 测序鉴定；将构建好的载体转染293T细胞，获得重组miR-18a过表达及抑制表达的慢病毒载体，感染人鼻咽癌细 胞CNE1和CNE2，嘌呤霉素筛选获得稳定干扰miR-18a表达及过表达miR-18a的细胞系，PCR及western blot鉴 定。【结果】成功构建真核表达的慢病毒miR ...
常利红 +5 more
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