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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2006 【目的】构建小鼠端粒酶蛋白亚单位（mouse telomerase reverse transcriptase，mTERT）基因重组腺病毒载体，为下一步研究其体外表达和动物实验研究提供基础。【方法】从肝癌细胞中提取总RNA。采用RT-PER技术扩增mTERT的基因编码区序列，将序列定向克隆至真核表达载体pAC，将此表达质粒与腺病毒重组质粒pJM17共同转染293细胞，经同源重组产生重组腺病毒载体Ad-mTERT，纯化后的重组腺病毒载体Ad-mTERT在293细胞大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化 ...
姜楠 +7 more
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FKBP12．6重组腺病毒载体的构建及其心肌细胞感染效率测定 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2006 【目的】构建携带FKBP12．6基因的重组腺病毒载体以研究FKBP12．6在心力衰竭时心室肌电重构中的作用。【方法】将平端化的FKBP12．6片段连接到穿梭质粒pAdTrack-CMV构建重组穿梭质粒pAdTrack／FKBP12．6，用Xho I单酶切进行鉴定。采用电穿孔法将线性化pAdTrack／P12．6转化AdEasier-1细菌。产生重组腺病毒质粒pAdEasy-1／FKBP12．6。采用脂质体介导法用线性化pAdEasy-1／FKBP12．6转染293细胞，从病变的293细胞分离 ...
李德, 伍卫, 周淑娴
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腺病毒载体介导的大鼠DNA 多聚酶β重组体的构建及其在PC12 细胞中的表达 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2005 【目的】为探讨DNA多聚酶β在神经细胞损伤中的作用与机制，构建其重组腺病毒载体，并在PC12细胞中表达。【方法】RT-PCR获取大鼠DNA多聚酶β(POLβ)的编码序列，TA克隆测序，酶切POLβ基因并连入穿梭质粒pAdTrack-CMV，电转至含腺病毒pAdeasy骨架质粒的大肠杆菌BJ5183。重组腺病毒质粒(pAd-polβ)和Lipofectamine2000转染293细胞，用重组腺病毒感染PC12细胞。【结果】10个TA克隆中有3个克隆的序列与GENE BANK中大鼠POLβ ...
钟建辉
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人神经营养素-3 受体基因的扩增及其重组腺病毒载体的构建 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2005 【目的】构建人神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)受体(即酪氨酸蛋白激酶受体C, tyrosine protein kinase C, TrkC)基因重组的腺病毒表达载体。【方法】从人脑组织mRNA 中扩增TrkC 基因全长cDNA, 定向克隆于穿梭质粒pShuttle 中, 获得一个带有CMV 启动子的表达盒。再将表达盒与腺病毒骨架DNA ( Adeno-X viral DNA) 体外连接, 形成重组腺病毒质粒(pAd-TrkC)。用pAd-TrkC 转染人胚肾293 ...
王俊梅 +6 more
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表达大熊猫源犬瘟热病毒H蛋白复制缺陷型重组腺病毒的构建及鉴定
野生动物学报, 2021 为构建能够表达大熊猫源犬瘟热病毒（CDV）分离株giant panda/SX/2014 H蛋白的复制缺陷型重组腺病毒，利用反转录聚合酶链反应（RTPCR）扩增株giant panda/SX/2014 H基因，通过TOPO连接克隆至入门载体pENTR/DTOPO，得到重组入门质粒pENTR/DTOPOCDVH，然后与腺病毒骨架载体pAd/CMV/V5DEST进行LR重组，获得重组质粒pAdCDVH；重组质粒用PacⅠ酶切线性化后转染293A细胞，获得重组腺病毒rAdCDVH ...
陈廷炜 1 +4 more
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大鼠BDNF基因复制缺陷型重组腺病毒的构建与鉴定 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2006 【目的】构建携带大鼠脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）目的基因的复制缺陷型重组腺病毒，并初步检测其体外表达目的基因的能力。【方法】提取大鼠脑组织总RNA，使用RT—PCR方法扩增BDNF目的基因并将其克隆入pMD18-T Simple载体测序，将测序完全正确的BDNF目的基因克隆入pShuttle2中，然后利用体外连接法将BDNF目的基因克隆入Adeno—X^TM腺病毒骨架中。Lipofectamine^TM ...
王鹏 +6 more
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携带人胰岛素样生长因子-1重组腺病拆的构建和鉴定 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2004 ［目的 l 采用Cre-LoxP同源重组系统构建并鉴定携带人胰岛素样生长因子-1 (human insulin-like growth factor-I, hIGF-1)目的基因的复制缺陷重组腺病毒，为椎间盘退变的h!GF-1基因治疗奠定基础。［方法】 PCR合成h!GF-1基因，用pMD18-T载体克隆h!GF-1目的基因，酶切、测序并进行NCBI BLAST相似性在线分析。将pMD18-T- hIGF-1和pDNR-lr质粒分别行EcoR I和BamH I双酶切，DNA连接酶连接双酶切产物 ...
黄宗强
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TK-1 和 TIMP-1 过表达对大鼠心肌梗死后心室重塑的影响 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2020 【目的】探讨重组腺病毒介导的人TK-1和TIMP-1基因过表达对大鼠心肌梗死后的左室（LV）功能、炎症因子表达的影响及其机制。【方法】通过结扎Sprague-Dawley雄性大鼠冠脉左前降支诱导心肌梗死模型。观察假手术组（10只）、生理盐水组（13只）、对照病毒组（13只）、TK-1组（13只）、TIMP-1组（13只）、联合基因组（13只）的大鼠术后的心功能参数改变、心肌梗死面积、及各组大鼠基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、核因子-κB（NF-κB ...
郑熙, 余惠珍, 高洁, 朱鹏立
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2000 【目的】为探索腺病毒载体在基因治疗中的应用及其表达目的抗原的有效性。【方法】用 BamHⅠ 、EcoRⅠ双切 质粒 pBluscript KS+ -HBs, 回收 S 基因片段, 定向克隆插入质粒 pACCMVpL 中相应的酶切位点, 通过快速抽提酶切鉴定筛选 重组质粒。【结果】挑取的 8 个克隆经 BamHⅠ 、EcoRⅠ酶切鉴定, 有 950 bp 的目的基因片段, 证明为重组体。【结论】成功 构建表达 HBsAg 基因的重组腺病毒载体。
周 智 +4 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2004 【目的】构建小鼠T-bet基因重组腺病毒载体,为T-bet基因在支气管哮喘治疗中的作用研究提供有效的T-bet生物表达系统。【方法】采用内切酶从质粒T-bet/GFP-RV中切获约1.7kb的小鼠T-betcDNA片段,与穿梭质粒pShuttle连接,再通过稀有酶切位点将含T-betcDNA的表达盒与Adeno-X腺病毒载体骨架连接,构建重组载体pAdeno-T-bet,测序鉴定无错配及插入移位等DNA顺序改变,并转染HEK293细胞,出现CPE后取含病毒上清的细胞培养液抽提病毒DNA行PCR鉴定 ...
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