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大鼠BDNF基因复制缺陷型重组腺病毒的构建与鉴定 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2006 【目的】构建携带大鼠脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）目的基因的复制缺陷型重组腺病毒，并初步检测其体外表达目的基因的能力。【方法】提取大鼠脑组织总RNA，使用RT—PCR方法扩增BDNF目的基因并将其克隆入pMD18-T Simple载体测序，将测序完全正确的BDNF目的基因克隆入pShuttle2中，然后利用体外连接法将BDNF目的基因克隆入Adeno—X^TM腺病毒骨架中。Lipofectamine^TM ...
王鹏 +6 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2004 【目的】构建小鼠T-bet基因重组腺病毒载体,为T-bet基因在支气管哮喘治疗中的作用研究提供有效的T-bet生物表达系统。【方法】采用内切酶从质粒T-bet/GFP-RV中切获约1.7kb的小鼠T-betcDNA片段,与穿梭质粒pShuttle连接,再通过稀有酶切位点将含T-betcDNA的表达盒与Adeno-X腺病毒载体骨架连接,构建重组载体pAdeno-T-bet,测序鉴定无错配及插入移位等DNA顺序改变,并转染HEK293细胞,出现CPE后取含病毒上清的细胞培养液抽提病毒DNA行PCR鉴定 ...
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人神经营养素-3 受体基因的扩增及其重组腺病毒载体的构建 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2005 【目的】构建人神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)受体(即酪氨酸蛋白激酶受体C, tyrosine protein kinase C, TrkC)基因重组的腺病毒表达载体。【方法】从人脑组织mRNA 中扩增TrkC 基因全长cDNA, 定向克隆于穿梭质粒pShuttle 中, 获得一个带有CMV 启动子的表达盒。再将表达盒与腺病毒骨架DNA ( Adeno-X viral DNA) 体外连接, 形成重组腺病毒质粒(pAd-TrkC)。用pAd-TrkC 转染人胚肾293 ...
王俊梅 +6 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2000 【目的】为探索腺病毒载体在基因治疗中的应用及其表达目的抗原的有效性。【方法】用 BamHⅠ 、EcoRⅠ双切 质粒 pBluscript KS+ -HBs, 回收 S 基因片段, 定向克隆插入质粒 pACCMVpL 中相应的酶切位点, 通过快速抽提酶切鉴定筛选 重组质粒。【结果】挑取的 8 个克隆经 BamHⅠ 、EcoRⅠ酶切鉴定, 有 950 bp 的目的基因片段, 证明为重组体。【结论】成功 构建表达 HBsAg 基因的重组腺病毒载体。
周 智 +4 more
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携带人胰岛素样生长因子-1重组腺病拆的构建和鉴定 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2004 ［目的 l 采用Cre-LoxP同源重组系统构建并鉴定携带人胰岛素样生长因子-1 (human insulin-like growth factor-I, hIGF-1)目的基因的复制缺陷重组腺病毒，为椎间盘退变的h!GF-1基因治疗奠定基础。［方法】 PCR合成h!GF-1基因，用pMD18-T载体克隆h!GF-1目的基因，酶切、测序并进行NCBI BLAST相似性在线分析。将pMD18-T- hIGF-1和pDNR-lr质粒分别行EcoR I和BamH I双酶切，DNA连接酶连接双酶切产物 ...
黄宗强
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重组腺病毒载体Ad-LMP-1的构建及其转染 MSC后成骨活性
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2010 【目的】 快速构建大鼠LIM矿化蛋白-1基因重组腺病毒载体,转染MSC,探讨LMP-1基因对MSC成骨分化和成骨活性的影响65377; 【方法】 从大鼠成骨细胞内提取总RNA,并设计LMP-1特异性引物进行RT-PCR,获取LMP-1基因后利用Invitrogen公司的TOPO定向克隆技术创建入门克隆pENTR/D-LMP-165377;转化TOP10细菌后,挑取阳性克隆摇菌提取质粒,入门克隆再与表达载体pAD/CMV/V5-DEST进行同源重组反应得到病毒载体pAD/CMV/V5-LMP-1 ...
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2002 【目的】研究不同病情慢性乙型病毒性肝炎患者甲状腺激素水平的变化。【方法】76 例慢性乙型病毒性肝炎病人(36 例重度肝 炎和 40 例中度肝炎)和 40 例健康对照者,测定血清总 T 3( TT3)、总 T4( T T4)、游离 T3( FT3)、游离 T4( FT4)、反 T3(rT3)和促甲状腺素( TSH)。 【结果】与对照组和中度肝炎组比较,重度肝炎患者 T T3、TT4、FT3 和 FT4 水平显著下降, TSH 水平轻度下降, rT 3 水平显著升高; 与对照组比 较,中度肝炎患者 T T4
张国超
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草鱼出血病病毒873株基因组外发现缺损性干扰颗粒的亚基因组成份
, 2001 草鱼出血病病毒基因组由 11条dsRNA片段组成。最近在研究其基因组时发现 ,在病毒基因组外存在许多核酸成份 ,但在核苷酸数量上少于基因组成份 ,表现为较小分子量的RNA片段。在完整地克隆了这些片段的全长cDNA后 ,测定了其中两个克隆的序列组成 ,发现它们为病毒基因组经剪切后的部分片段 ,已经重新装配 ,而且都含有原基因组某一片段 3′端和 5′端的保守区和倒转重复区 ,缺失中间部分。根据其特点来看 ,它们应为目前病毒学研究的重要材料——&mdash ...
朱作言, 邱涛, 张菁, 陆仁后
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2008 目的利用小鼠盐诱导基因（Salt induced kinase2,SIK2）的重组腺病毒载体,研究脂肪细胞中SIK2的表达。方法重组小鼠SIK2基因腺病毒载体经脂质体转染293A细胞,在细胞内包装获得腺病毒颗粒AdV-SIK2,并进行大量扩增和纯化。纯化的腺病毒感染成熟的3T3-L1脂肪细胞,通过real-time PCR及免疫印迹法检测鼠SIK2在3T3-L1脂肪细胞中的表达。结果纯化后的病毒滴度达0.5×1012病毒颗粒/ml。重组腺病毒载体能在成熟3T3-L1脂肪细胞中高表达鼠SIK2 ...
杜静 +5 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2012 目的研究重组腺病毒载体感染小鼠神经瘤细胞（N2a）的感染效率及重组腺病毒介导的人鞘氨醇激酶-1（sphingosine kinase-1,SPK1）基因在N2a细胞表达特性。方法用流式细胞仪检测感染效率,用激光共聚焦显微镜观察绿色荧光蛋白的表达;用Western blot方法检测SPK1蛋白的表达。结果 N2a细胞的感染效率和绿色荧光蛋白表达量在一定范围内随着病毒感染复数（Multiplicity of infection,MOI）的增加而增高,MOI为100时感染效率达峰值为（99.57±0.133）%
杨阳 +6 more
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