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递呈BAC5 单抗识别位点的M13噬菌体克隆系的建立 [PDF]
【目的】获得可递呈抗低分化和未分化癌细胞单克隆抗体(BAC5 单抗)抗原表位的M13噬菌体克隆系。【方法】以 BAC5 单抗为靶抗体, 对由M13噬菌体构建的随机12 肽文库进行生物淘洗。用抗体竞争方法从阳性克隆中选出与BAC5 单抗结 合率较高的克隆系。通过ELISA 方法检测BAC5 单抗对上述克隆的选择性识别。【结果】经过3 轮淘洗, 获得的阳性克隆率为 77 %(35/ 45)。来自C2、C17 和C29 号克隆的噬菌体对外加BAC5 单抗的结合率分别为71.6 %、49.4 %和64.0%
肖锡宾 +5 more
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目的: 制备从尖吻蝮蛇蛇毒中分离的纤溶因子的单克隆抗体, 为克隆基因提供特异性的探针。方法: 将纤溶因 子免疫 Balb/C 小鼠,取脾细胞与 SP 2/0 骨髓瘤细胞融合, 筛选稳定分泌抗体的细胞株。采用血纤维蛋白平板法,观察单克隆 抗体能否抑制纤溶因子的纤溶作用。结果: 获得 2 株稳定分泌单克隆抗体的细胞株。 Western 印迹显示该单克隆抗体能特异 地与纤溶因子结合,与其它蛋白无交叉反应, 此外,这 2株单克隆抗体具有抑制纤溶因子溶解人血纤维蛋白的作用。结论: 这 2 ...
邱鹏新 黎明涛 苏兴文 陈家树 颜光美
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用人新鲜胰腺癌组织免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0-Agl4融合,获得了分泌抗人胰腺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。本文重点报道以ABC免疫组织化学法检查YPC1单克隆抗体与人正常组织和肿瘤组织的反应性。结果表明YPC1单克隆抗体与16例被检测的胰腺癌组织发生反应。其中9例(56.3%)呈强阳性反应,与23种正常组织中的10种(43.5%)以及19种非胰腺肿瘤中的8种(42.1%)有不同程度的交叉反应,但多数反应较弱。本研究提示以新鲜人体肿瘤组织作为免疫原制备单克隆抗体是简便可行的 ...
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人BLyS 基因克隆、表达和抗人BLyS 单克隆抗体的制备 [PDF]
【目的】研制抗人BLyS 单克隆抗体, 以进一步探讨人BLyS 与自身免疫性疾病的关系。【方法】将人BLy S 基因 克隆到融合蛋白原核表达载体pGEX-4T-1 中, 构建重组质粒pGEX-4T-1/hBLyS , 用此重组质粒转化大肠杆菌BL21, 加IPTG 诱导大肠杆菌表达GST-hBLy S 融合蛋白, 用此融合蛋白免疫BALB/c 鼠, 取鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合, 用ELISA 法筛选阳 性克隆, 用免疫印迹和流式细胞仪进一步鉴定抗体的特异性。【结果】重组质粒双酶切结果和DNA ...
张志方
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单克隆多克隆抗体不同标记ELISA技术对HBeAg/抗-HBe检测评估
采用抗-HBe单克隆和多克隆抗体进行生物素或酶标记作酶免疫试剂检测HBeAg及抗-HBe,结果显示单克隆抗体(McAb)敏感性高于多克隆抗体(PcAb)。生物素试剂在检测HBeAg的稀释度为1:5000,比酶标法ELISA高1倍多,与RIA相当,且稳定性优于RIA。生物素标记抗体至少1年内保持效价不变,1年内批间变异系数为5.8%,相同标本重复检测变异系数为5.94%,是一种较理想的检测e系统的方法之一。另外,研究发现一孔一期法同时测HBeAg/抗-HBe时,无论标记抗体为单克隆或多克隆 ...
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摘 要 本实验在用感染兔血清和单克隆抗体对日本血吸虫(大陆株)成虫cDNA 表达文库进行筛选的基 础上, 对筛选出的阳性克隆插入片段DNA 进行了亚克隆和序列分析。
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【目的】 应用抗PBP2a单克隆抗体,以化学交联法致敏羧化聚苯乙烯乳胶,建立快速检测MRSA-PBP2a的乳胶凝集法?【方法】 以辛酸-硫酸铵法纯化PBP2a单克隆抗体,将纯化后单克隆抗体和羧化乳胶经碳化二亚胺(EDC)共价偶联,并对偶联条件(偶联抗体浓度?乳胶浓度?偶联时间和偶联缓冲液)进行探索和优化,建立检测PBP2a的乳胶凝集法?【结果】 140 mg/L的抗体浓度与15 g/L的羧化聚苯乙烯乳胶,在pH 5.8缓冲液中偶联8 h后有较好的凝集效果和偶联效率,所建立的乳胶凝集法敏感性和特异性良好?【
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用不实验室建立的亲和层析系统成功地址猪脑分离纯化了苯二氮卓受体(BZ-R)。结合试验显示,纯化的BZ-R和专一配基最大的结合容量为1970fmol/mg蛋白,解离常数Kd值为5.7lnmol/L,圆盘电泳和等电聚焦电泳均显示出单一区带。纯化受体经SDS一聚丙烯酰胺不连续电泳,可分离出分子量分别为59ku、56ku、51ku、48ku和38ku的5条区带。用这些区带蛋白免疫动物,得到了3种单克隆抗体,酶联免疫检测显示,它们和纯化受体结合的最大滴度分别为1:30000,1:22000,1:22000 ...
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【目的】 制备均一性和特异性高的抗组氨酰-tRNA 合成酶抗体,为研究皮肌炎和多肌炎的检测提供方法,为制备检测试剂盒提供原料?【方法】 采用常规融合和间接ELISA检测法,获取杂交瘤细胞株;Protein G Sepharose 4FF和Sephadex G50结合对含有单克隆抗体的腹水进行纯化;SDS-PAGA电泳技术进行单克隆抗体的鉴定?【结果】 筛选获得了2株稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为W001和W002;杂交瘤细胞克隆后,100%的检测孔保持了分泌抗组氨酰-tRNA合成酶抗体的能力;
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食管癌细胞核仁抗原单克隆抗体的制备 及其特性的初步鉴定 [PDF]
【目的】制备抗食管癌细胞核仁抗原单克隆抗体,用于寻找肿瘤的标志物和癌的病理诊断。【方法】以食管癌组 织核基质为抗原,采用足垫法免疫 Balb/c 小鼠,运用杂交瘤技术建立分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株, 制备食管癌细胞抗原 片和食管癌冰冻切片,采用免疫组化检测并采用蛋白印迹法(Western blotting)分析, 鉴定是否为特异性单克隆抗体。【结果】 获得一细胞株( 1 -7/E)能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,1-7/E 能与食管癌细胞和其他 10 种癌细胞的核仁反应, 不与正常食 管上皮细胞核仁反应。
刘乐和, 沈忠英
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