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重组腺病毒载体Ad-LMP-1的构建及其转染 MSC后成骨活性
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2010 【目的】 快速构建大鼠LIM矿化蛋白-1基因重组腺病毒载体,转染MSC,探讨LMP-1基因对MSC成骨分化和成骨活性的影响65377; 【方法】 从大鼠成骨细胞内提取总RNA,并设计LMP-1特异性引物进行RT-PCR,获取LMP-1基因后利用Invitrogen公司的TOPO定向克隆技术创建入门克隆pENTR/D-LMP-165377;转化TOP10细菌后,挑取阳性克隆摇菌提取质粒,入门克隆再与表达载体pAD/CMV/V5-DEST进行同源重组反应得到病毒载体pAD/CMV/V5-LMP-1 ...
doaj
Effects of RNA Helicase DHX32 on Cell Proliferation, Migration and Invasion in Human Colorectal Cancer Cell Lines [PDF]
, 2014 RNA螺旋酶在RNA加工过程中发挥重要作用，能够利用水解NTP产生的能量参与前mRNA剪接、mRNA转运、翻译起始、RNA降解、核蛋白体生成以及细胞核和线粒体内RNA转录后加工等生物学过程。根据RNA螺旋酶结构域基序氨基酸残基序列的不同，RNA螺旋酶分为DDX和DHX两个家族。已有研究表明多种RNA螺旋酶在肿瘤中表达失调，部分RNA螺旋酶参与细胞分化、细胞周期、细胞凋亡、癌基因表达和肿瘤耐药基因表达的调控。DHX32是一种新的RNA螺旋酶，属于DHX家族，在急性淋巴细胞白血病中低表达 ...
刘文娟
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Zhongguo shiyan zhenduanxue目的 构建带有FLAG标签的BPIFC基因真核表达载体，建立稳定转染BPIFC基因的HaCaT细胞系。方法 设计引物通过PCR扩增出BPIFC基因片段，利用DNA重组技术将该基因片段定向插入pcDNA3.1-flag-N真核表达载体中，并对重组质粒进行双酶切及DNA测序鉴定。验证正确的重组质粒通过PI Max线性转染的方法转染至HaCaT细胞，通过G418筛选建立BPIFC稳定转染的HaCaT细胞系，并通过RT-PCR法和Western-blot法分别测定BPIFC mRNA和蛋白的表达量。结果 ...
陆娇娇 +5 more
doaj
人TIM-1和TIM-3 mRNA实时SYBR Green Ⅰ定量RT-PCR检测方法的建立
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2012 目的建立实时SYBR Green I定量RT-PCR检测人TIM-1和TIM-3mRNA的方法。方法从人外周血单个核细胞提取的总RNA中逆转录扩增人TIM-1和TIM-3的cDNA,将将纯化的人TIM-1和TIM-3的扩增产物分别与pMD18-T Simple载体进行连接,转化宿主菌DH5α,提取重组质粒DNA,PCR鉴定并测序分析。纯化质粒并检测260nm吸光值,确定重组质粒原液的拷贝浓度并以此制备荧光定量PCR梯度浓度标准品,进行实时荧光定量PCR实验。结果建立了TIM-1和TIM ...
陈治中 +3 more
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Population Genetics Research of Chiloscyllium plagiosum and Scoliodon laticaudus in China's Southern Coast [PDF]
, 2008 以鲨、鳐类为代表的软骨鱼类主要生活在海洋中，大约有1100种。作为食物链的顶级捕食者和海洋生态系统的重要组成部分，软骨鱼类会对许多其他海洋生物的种群结构产生影响。因此，当软骨鱼类遭到过渡捕捞后将严重影响海洋生态系统中生物群落组成及生态环境。 研究发现，相对于硬骨鱼类，大部分鲨、鳐类具有生长缓慢、成熟期长、生殖力低的特点。这些特点导致其具有较低的内禀增长率以及在捕捞压力下较低的种群恢复能力。因此，大部分软骨鱼类种群只能承受中等捕捞强度的渔业开发，否则将导致种群数量急剧减少甚至种群崩溃 ...
陈骁
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靶向存活素的RNAi联合X射线照射对肺腺癌移植肿瘤的抑制作用
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的利用RNAi、RT-PCR和Western blot技术,探讨靶向存活素的基因沉默联合X射线照射对肺腺癌移植瘤的抑制作用及相关机制。方法根据Genbank中存活素（Survivin）的cDNA序列设计RNAi序列,构建shRNA真核表达载体pGenesil-2-Survivin,经过酶切,测序鉴定后,将经脂质体包裹的pGenesil-2-Survivin注射到裸鼠移植肺腺癌瘤体内,并联合5 Gy X射线照射,利用RT-PCR和Western blot技术检测移植肿瘤内Survivin ...
李长锋 +4 more
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The susceptibility of Oncomelania hupensis from Hunan and Jiangxi to the miracidia of Schistosoma japonicum and their phylogenetic evolution [PDF]
, 2011 湖北钉螺是目前已知的日本血吸虫主要的中间宿主。不同地理株的钉螺对来自不同区域日本血吸虫的易感性有着显著差异。因此开展不同地理株的钉螺与来自不同区域日本血吸虫的相容关系和易感性研究，可为有关钉螺和血吸虫的遗传学研究提供理论依据，同时也为血吸虫病的防治对策提供了借鉴和参考，并对最终阻断和消灭血吸虫虫病有着一定的意义。 本课题从宏观方面对江西株和湖南株钉螺对血吸虫的易感性进行了分析，其方法是用湖南钉螺株和江西钉螺株和两地的血吸虫虫株进行了交叉感染研究，分析两地钉螺对两地血吸虫虫株的感染率和死亡率 ...
肖珺
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慢病毒介导靶向PRL-3 基因的siRNA 抑制肝癌细胞的侵袭性
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2010 【目的】 探讨肝再生磷酸酶-3(PRL-3)的表达对肝癌细胞侵袭能力的影响65377;【方法】 设计65380;合成4对针对PRL-3 基因siRNA 的寡核苷酸序列,分别构建质粒,转染293T 细胞,据其对PRL-3 的抑制率,筛选最有效的PRL-3 基因RNAi 靶序列,设计并合成其siRNA 的双链DNA Oligo,与含绿色荧光蛋白(GFP)编码基因的pGCL-GFP 线性化载体连接产生重组慢病毒质粒LV-PRL3-SiRNA,并行PCR 和测序鉴定65377;将LV-PRL3-SiRNA ...
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的运用实时定量PCR（quantitative real-time,qRT-PCR）检测结核分枝杆菌蛋白Ag85B、38kDa及MPT64编码基因的表达水平,探讨结核分枝杆菌耐药菌株和敏感株,北京基因型和非北京基因型的蛋白抗原在转录水平的差异性及qRT-PCR诊断活菌的价值。方法根据Genbank提供的序列,设计目的基因fbpB、psts1、mpt64及内参基因Sigа的特异性引物,将扩增片段克隆入载体pMD18-T simple,重组质粒经纯化及倍比稀释,应用SYBR ...
陈伟 +7 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2015 目的研究紫檀芪在体外循环术中作为心脏冷停搏灌注液的添加剂使用,对抗体外循环术中心肌缺血、再灌注损伤的作用。方法采用2-3月龄的幼猪,体重10.4-11.5kg,30只,随机分为三组,每组10只。组1为对照组,常规体外循环;组2常规体外循环,心脏冷停搏液中添加紫檀芪;组3常规体外循环,在心脏停跳前15min,静脉输入N’-硝基-L-精氨酸甲酯盐酸盐（L-NAME）,心脏冷停搏液中加入紫檀芪。测定三组动物血清肌酸磷酸激酶同工酶（CK-MB）水平及心肌组织髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO ...
吕民, 李哲, 赵冬梅
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