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自噬是一种高度保守的细胞自我调节机制,主要发生在哺乳动物和酵母细胞的溶酶体或液泡中,对维持生命活动及物质代谢的平衡至关重要。当细胞处于应激状态(如营养缺乏、物理化学刺激、感染、氧化应激等),或细胞质中积累了老化或受损的细胞器,自噬过程就会被激活,通过降解并循环利用受损的蛋白质和细胞器,清除潜在的有害物质,将降解产物用于能量供应和大分子的再合成,从而帮助细胞维持稳态。自噬激活剂是指能够促进细胞自清除过程的化合物或药物(如mTOR抑制剂、AMPK激动剂、SIRT1激活剂、溶酶体增强剂等 ...
侯宇, 赵英鹏
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【目的】获得可递呈抗低分化和未分化癌细胞单克隆抗体(BAC5 单抗)抗原表位的M13噬菌体克隆系。【方法】以 BAC5 单抗为靶抗体, 对由M13噬菌体构建的随机12 肽文库进行生物淘洗。用抗体竞争方法从阳性克隆中选出与BAC5 单抗结 合率较高的克隆系。通过ELISA 方法检测BAC5 单抗对上述克隆的选择性识别。【结果】经过3 轮淘洗, 获得的阳性克隆率为 77 %(35/ 45)。来自C2、C17 和C29 号克隆的噬菌体对外加BAC5 单抗的结合率分别为71.6 %、49.4 %和64.0%
肖锡宾 +5 more
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【目的】 探讨登革病毒2型(DV2)感染人静脉血管内皮细胞株EAhy926对细胞自噬的影响。【方法】 同一批EAhy926细胞分成对照组和感染组,感染组在DV2感染EAhy926细胞后12、24、36、48 h分别收集细胞,用流式细胞仪检测发生自噬的细胞百分率与酸性自噬泡的平均荧光密度,对照组相应时间点收集细胞做同样处理作为对照。实验重复5次,用方差分析和配对t检验进行统计分析。 【结果】 感染组4个时间点自噬的细胞百分率和酸性自噬泡的平均荧光密度较对照组相应时间点均有升高(P < 0.05)。48 ...
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联合自噬抑制剂增加PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235诱导的结肠癌细胞凋亡
目的探讨自噬对I3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235诱导的人结肠腺癌DLD1细胞凋亡的影响。方法PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235和(或)自噬抑制剂3-MA处理人结肠腺癌DLD1细胞,MTT法检测细胞生存率,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,Western Blot检测凋亡相关蛋白的表达。结果不同浓度的NVP-BEZ235作用于人结肠腺癌DLD1细胞24h后,MTT及流式细胞术结果显示,明显地抑制了细胞增殖,并增加了细胞凋亡率,同时观测到凋亡相关蛋白Caspase-3表达升高;采用3 ...
斯庆图娜拉
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β-淀粉样蛋白Aβ25-35诱导HT22细胞自噬及其对V-ATPase表达的影响
【目的】 探讨β-淀粉样蛋白Aβ25-35诱导HT22细胞产生自噬及与V-ATPase 变化的关系?【方法】 将HT22细胞分为对照组?无血清培养组?Aβ处理组和Aβ + Bafilomycin A1组,不同浓度的Aβ25-35作用于HT22细胞24 h,用CCK8测定细胞活力变化,免疫细胞荧光检测自噬斑点变化,及Western blot检测LC3?V-ATPase蛋白变化?【结果】 Aβ可以诱导HT22细胞出现明显的自噬现象,且这种自噬同Aβ的浓度以及作用时间具有一定的相关性?V ...
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【目的】 探讨自噬在血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导心肌细胞肥大中的作用.【方法】 原代培养的乳鼠心肌细胞,采用Ang Ⅱ干预建立心肌肥大的模型;在光学显微镜下观察心肌细胞的形态,采用Real time PCR技术检测心肌细胞肥大标志物心房利钠多肽(ANP)的表达,Western blot法检测LC3蛋白的表达.【结果】 Ang Ⅱ可抑制自噬相关基因LC3蛋白的表达,自噬阻断剂3-甲基腺嘌呤(3MA)会促进AngⅡ诱导的心肌细胞肥大.【结论】 AngⅡ可能通过抑制自噬来诱导心肌细胞肥大.
汪海宁 +3 more
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目的探究GATA2/GATA6调控胃癌自噬和凋亡的机制。方法以人胃癌SGC-7901细胞为研究对象,建立干扰RNA转染模型,通过流式细胞术检测细胞周期改变,Annexin-V-FITC/PI双染检测细胞凋亡,倒置相差显微镜、透射电镜观察细胞形态,并应用MDC染色对细胞自噬进行测定。结果 GATA2与GATA6表达量与肿瘤直径、淋巴结转移呈正相关,肿瘤直径小于2cm的组织中GATA2与GATA6表达水平显著低于肿瘤直径大于2cm的组织 ...
洪森, 李世权, 刘涛, 康振华
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紧密连接蛋白Occludin通过ANKRD37调控膀胱癌自噬的机制研究
目的探讨紧密连接蛋白家族成员Occludin(OCLN)在膀胱癌中的表达情况及调控膀胱癌细胞自噬的机制和临床意义。方法 (1)分析膀胱癌中OCLN在mRNA和蛋白水平的表达变化。(2)在膀胱癌T24细胞系中,敲降或过表达OCLN后,利用蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白LC3B,P62表达变化,同时利用qRT-PCR检测与自噬相关的ANKRD37的mRNA变化,并采用独立样本t检验的方法进行组间差异分析。结果 (1)OCLN的mRNA和蛋白表达量随着膀胱癌病理分期的升高逐渐上调;(2 ...
杨帆, 何建忠, 刘野
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脑卒中时缺血缺氧致脑组织功能损伤,且缺血后脑组织再恢复血液供应时,大量自由基、钙超载等引起脑缺血/再灌注损伤,进一步加重病情。自噬是一种维持细胞内环境稳态的自我保护机制,但过度自噬引起脑组织损伤。MiRNA为小的内源性非编码RNA分子,通过与其靶基因mRNA的3’ -UTR中的互补序列结合,导致翻译抑制或mRNA降解,从基因水平上调控多种生理活动。MiRNA不仅直接作用于自噬相关蛋白,还可通过多种信号通路,参与缺血/再灌注诱导的自噬调控。但关于miRNA调控脑缺血 ...
刘筱蔼, 罗友根
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【目的】观察槲皮素对急性髓系白血病HL-60 细胞凋亡与自噬的影响及腺苷酸活化蛋白激酶 (AMPK)活性的变化,探讨槲皮素抗白血病的分子机制。【方法】流式细胞仪、电镜、蛋白质印迹法检测槲皮素孵 育HL-60细胞24、48 h后细胞凋亡与自噬的水平;检测槲皮素作用后HL-60细胞AMPK、p-AMPK的表达;流式、 蛋白质印迹法检测不同浓度槲皮素与AMPK小分子抑制剂Compound C共同孵育HL-60细胞后AMPK活化的情 况及细胞凋亡、自噬的变化。【结果】槲皮素可诱导HL-60细胞发生凋亡 ...
肖洁 +8 more
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