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生物体都在不断地更新,细胞和细胞内的成分不断地被重塑和循环利用,因此,都会发生低水平的基础性自噬,以执行细胞稳态功能。例如细胞通过自噬分解异常蛋白质和受损细胞器,获得可供循环利用的核苷、氨基酸等大分子物质及能量,从而维持细胞代谢平衡。然而自噬又是可以高度诱导的,尤其是在细胞内和(或)细胞外应激的情况下,例如营养匮乏、缺氧、氧化应激、代谢失衡、致癌基因激活、病原菌感染时,诱导细胞启动自噬作用,从而对机体起到保护作用[1]。
王欣琦 +5 more
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目的近些年来,发生过很多因饮用假酒致甲醇中毒的事件。本研究旨在探讨甲酸钠诱导视网膜光感受器细胞(661W细胞)损伤过程中对细胞自噬水平的影响。方法将15和30mM浓度的甲酸钠分别加入661W细胞培养基作用24h后,用MDC荧光染色来检测细胞自噬水平改变,透射电镜观察661W细胞自噬体的形成,Western blotting法检测LC3、p-mTOR、Beclin 1及JNK、p-JNK蛋白的表达,流式细胞仪分析检测细胞内活性氧的变化。结果与对照组比较,15或30mM甲酸钠处理661W细胞后 ...
金艳玲 +5 more
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目的研究姜黄素诱导自噬对K562细胞增殖的影响。方法采用1、5、10、20和40μM/L姜黄素及自噬抑制剂3-MA作用于K562细胞24h,采用MTT实验观察K562细胞增殖变化情况,随后采用Western-blot检测自噬标志蛋白LC3-II/LC3-I变化水平;同时Western blot分析p53,p21和p27表达变化。结果姜黄素能以时间、剂量依赖性方式抑制K562细胞增殖,与3-MA对照组相比,LC3-II/LC3-I比值显著上升,姜黄素诱导K562细胞周期停滞,上调p53 ...
于波海, 于鑫, 王鑫, 滕旭
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目的观察分离培养的哮喘病人外周血CD4+T淋巴细胞的自噬现象。方法密度梯度离心法、尼龙棉柱法及磁分离法分离哮喘病人外周血CD4+T淋巴细胞,分空白组及地塞米松(DXM)组,培养72 h后用流式细胞仪检测自噬细胞比例变化。结果DXM组与空白组72 h自噬细胞发生率有显著性差异。结论DXM可诱导哮喘病人外周血CD4+T淋巴细胞自噬。
孟宪明, 黄勤欢, 黄瑾
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自噬是一种高度保守的细胞自我调节机制,主要发生在哺乳动物和酵母细胞的溶酶体或液泡中,对维持生命活动及物质代谢的平衡至关重要。当细胞处于应激状态(如营养缺乏、物理化学刺激、感染、氧化应激等),或细胞质中积累了老化或受损的细胞器,自噬过程就会被激活,通过降解并循环利用受损的蛋白质和细胞器,清除潜在的有害物质,将降解产物用于能量供应和大分子的再合成,从而帮助细胞维持稳态。自噬激活剂是指能够促进细胞自清除过程的化合物或药物(如mTOR抑制剂、AMPK激动剂、SIRT1激活剂、溶酶体增强剂等 ...
侯宇, 赵英鹏
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Ghrelin通过诱导细胞自噬加剧H9c2细胞缺氧-复氧损伤
用CoCl2诱导H9c2细胞缺氧损伤24 h后,再将培养基换成新鲜培养基,以模拟心肌细胞体外缺血-再灌模型,并在此基础上通过ghrelin对细胞自噬的调节来评价ghrelin对心肌细胞缺氧-复氧损伤的调节作用.用流式细胞技术和LDH活性检测细胞凋亡和坏死.WST-1检测细胞活力;DCFH2-DA探针评估细胞内活性氧水平;用Western blotting检测细胞自噬.研究结果表明ghrelin处理的缺氧-复氧损伤细胞活力降低、LDH活性、细胞凋亡、ROS含量及自噬增加,用3MA处理后可明显抑制细胞自噬 ...
童芯锌, 蒋维, 吴丹, 张义正
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【目的】 探讨登革病毒2型(DV2)感染人静脉血管内皮细胞株EAhy926对细胞自噬的影响。【方法】 同一批EAhy926细胞分成对照组和感染组,感染组在DV2感染EAhy926细胞后12、24、36、48 h分别收集细胞,用流式细胞仪检测发生自噬的细胞百分率与酸性自噬泡的平均荧光密度,对照组相应时间点收集细胞做同样处理作为对照。实验重复5次,用方差分析和配对t检验进行统计分析。 【结果】 感染组4个时间点自噬的细胞百分率和酸性自噬泡的平均荧光密度较对照组相应时间点均有升高(P < 0.05)。48 ...
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【目的】获得可递呈抗低分化和未分化癌细胞单克隆抗体(BAC5 单抗)抗原表位的M13噬菌体克隆系。【方法】以 BAC5 单抗为靶抗体, 对由M13噬菌体构建的随机12 肽文库进行生物淘洗。用抗体竞争方法从阳性克隆中选出与BAC5 单抗结 合率较高的克隆系。通过ELISA 方法检测BAC5 单抗对上述克隆的选择性识别。【结果】经过3 轮淘洗, 获得的阳性克隆率为 77 %(35/ 45)。来自C2、C17 和C29 号克隆的噬菌体对外加BAC5 单抗的结合率分别为71.6 %、49.4 %和64.0%
肖锡宾 +5 more
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目的探讨人参皂苷(Ginsenoside)影响宫颈癌HeLa细胞自噬与凋亡状况。方法本研究利用CCK-8法考察人参皂苷对细胞活力的作用;借助Annexin V/FITC-PI双染法检测人参皂苷对HeLa细胞凋亡情况;借助WB(Western blot)技术对凋亡相关蛋白的表达水平进行检测;利用AO染色检测自噬发生程度。结果 CCK-8法显示了人参皂苷Rh2和Rg3显著抑制了宫颈癌细胞的增殖,经细胞流式仪测定发现,对于细胞凋亡,Rh2与Rg3具促进作用 ...
秦瑞 +5 more
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β-淀粉样蛋白Aβ25-35诱导HT22细胞自噬及其对V-ATPase表达的影响
【目的】 探讨β-淀粉样蛋白Aβ25-35诱导HT22细胞产生自噬及与V-ATPase 变化的关系?【方法】 将HT22细胞分为对照组?无血清培养组?Aβ处理组和Aβ + Bafilomycin A1组,不同浓度的Aβ25-35作用于HT22细胞24 h,用CCK8测定细胞活力变化,免疫细胞荧光检测自噬斑点变化,及Western blot检测LC3?V-ATPase蛋白变化?【结果】 Aβ可以诱导HT22细胞出现明显的自噬现象,且这种自噬同Aβ的浓度以及作用时间具有一定的相关性?V ...
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