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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的将真核表达质粒pEGFP-ActivinA以脂质体介导转染人皮肤微血管内皮细胞,观察能否在细胞内表达,为进一步研究其作用奠定基础。方法pEGFP-ActivinA扩增和酶切鉴定;原代培养人皮肤微血管内皮细胞,以脂质体介导将真核表达质粒pEGFP-ActivinA转染该细胞,于一定时间内在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,MTT法检测基因转染对人皮肤微血管内皮细胞增殖的影响。结果转染后48h在荧光显微镜下人皮肤微血管内皮细胞可见发出绿色荧光,72h发出绿色荧光的细胞增多,强度增强 ...
裴颖, 左玲, 栾永昕, 苏冠方
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SARA低表达对Activin A/Smads环路活性的影响
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2019 目的探讨下调Smad锚捉蛋白(SARA)表达对Activin A/Smads环路活性的影响。方法利用RNA干扰技术,设计靶向大鼠SARA基因的短发卡RNA(shRNA),瞬时转染激活素A(ActA)高表达的大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞。转染48h后倒置荧光显微镜观察转染效率,实时定量PCR、Western blot检测SARA基因的表达情况。对阳性转染组及阴性转染组细胞换液3h后,Western blot检测Smad3总蛋白及磷酸化蛋白的表达。结果靶向SARA基因的SARA-shRNA及对照NC ...
石晓花 +8 more
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野生动物学报电穿孔转染（电转染）是一种高效、低毒、操作方便的细胞转染技术，但在鹿茸原代细胞中还没有应用的先例。为探索电转染过程中影响鹿茸原代细胞电转染效率和细胞存活率的关键参数，以293T细胞系为平行实验组，将pCMV-C-EGFP质粒电转入马鹿（Cervus elaphus）鹿茸前软骨和软骨原代细胞中。结果显示：（1）在方波条件下，鹿茸前软骨细胞电转染电压500 ~ 700 V，脉冲长度0.4 ~ 1.4 ms，脉冲次数优选1或2次；而软骨细胞电转染电压500 V，脉冲长度0.2 ~ 1.3 ms ...
金庆梅 +6 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2004 【目的】 用流式细胞仪(FCM)快速检测外源性血管内皮生长因子基因(VEGF基因)在大鼠原代培养肝细胞转染表达,根据结果优化其转染表达条件?【方法】 以加强型黄色荧光素蛋白(EYFP)为标记,用FCM快速检测重组质粒pIRES-EYFP/VEGF121在大鼠原代培养肝细胞中转染表达,根据结果优化pIRES-EYFP/VEGF121转染表达条件?【结果】 pIRES-EYFP/VEGF121得以成功构建,并转染大鼠原代培养肝细胞;优化的转染表达条件:在细胞数密度0.1×106/mL,质粒孵育时间30 ...
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2013 目的构建人Shh基因过表达慢病毒载体,转染293T细胞,建立稳定转染人Shh基因的293T的细胞系。方法设计引物引入AgeⅠ酶切位点,使用PCR方法从质粒中扩增Shh基因的编码区序列,对所扩增出的目的片段回收纯化。将AgeⅠ内切酶消化后目的片段交换连接入pGC-FU载体,构建Shh慢病毒表达载体pGC-FU-Shh。酶切验证并测序正确后,将质粒pGC-FU-Shh与携带GFP的慢病毒辅助包装载体共转染293T细胞,荧光显微镜检测慢病毒载体转染细胞的结果,重组质粒pGC-FU-Shh的测序,Western
边学海 +6 more
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绿色荧光蛋白基因转染人骨髓间充质干细胞体外成脂肪诱导分化的研究
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的以逆病毒为载体将绿色荧光蛋白基因（EGFP）转染人骨髓间充质干细胞（hMSC）,研究对其成脂肪诱导分化的影响。方法以逆病毒为载体将EGFP基因转染hMSC,流式细胞仪检测转染后hMSC的表面标记,并对转染EGFP的hMSC进行成脂肪诱导分化培养。结果转EGFP基因的hMSC/EGFP细胞与未转基因的hMSC在细胞形态及生长特点上无差异。转基因的hMSC细胞仍高表达CD29、CD44、CD105抗原,传代培养后可诱导形成脂肪细胞。结论转染EGFP基因对hMSC在体外成脂肪诱导能力无明显影响 ...
陈晓 +4 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的探讨肿瘤转移抑制基因KiSS-1对膀胱癌细胞T24的生物学影响。方法将构建好的含771 bp大小的基因片段的真核表达质粒pcDNA3.1（+）/KiSS-1及空载体pcDNA3.1（+）用阳离子脂质体介导采用基因转染技术转染膀胱癌细胞T24,观察KiSS-1mRNA的表达、细胞生长能力、增殖情况及细胞侵袭力的变化。结果pcDNA3.1（+）/KiSS-1成功转染T24细胞,KiSS-1 mRNA表达阳性,而正常细胞和空载体组为阴性;转染目的基因后细胞生长曲线 ...
袁子杰, 杨杰
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2023 目的 通过基因沉默技术构建质粒成功转染原代星形胶质细胞(Ast)抑制IL-17表达，探讨IL-17的功能。方法 在制备原代Ast基础上，应用IL-17基因沉默质粒pGenesil-1A和B,用Lipofectamine 2000转染Ast,通过荧光分析法、RT-PCR法、Western Blotting法观察IL-17基因沉默后效果。结果 携带pGenesil-1B和A的IL-17基因沉默质粒制备成功后，免疫荧光携带pGenesil-1B转染效果明显高于pGenesil-1A,其转染率可高达56.72%;
沈笑然 +4 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 1999 目的: 构建 p53 表达质粒, 研究 p53基因对白血病细胞 K562 细胞生长的抑制作用。方法: 以 T4 连接酶把 2 160 bp 的 p53 cDNA 片段插入 pRc/CMV 质粒, 重组构建 pRc/p53 表达质粒,以 Lipofectin 介导pRc/p53 质粒转染K562 细胞,以甲 基纤维素半固体培养方法作 K562 细胞体外克隆培养, 观察转染 p53 基因后 K562 细胞克隆形成改变。结果: p53 cDNA 质粒 转染的 K562 细胞, 体外培养克隆形成能力明显减低 ...
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2008 目的探讨p16基因转染对大肠癌细胞生长及对放射敏感性的作用。方法以脂质体介导外源性P16基因转染大肠癌SWWC细胞系,照射后MTT法测定OD值,计算细胞生长抑制率。结果p16基因转染大肠癌SWWC细胞发生周期阻滞,照射后转染组细胞生长抑制率增加,与对照组有明显差异。结论p16基因转染对大肠癌SWWC细胞具有明显抑制作用,可提高大肠癌细胞对放射的敏感性。
梁显军 +4 more
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