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目的观察特异的小干扰RNAs(small interfering RNAs,siRNAs)对胃癌细胞胰岛素样生长因子-Ⅰ受体(In-sulin-like growth factor-Ⅰ receptor,IGF-ⅠR)基因表达的抑制作用,研究其对肿瘤增殖的影响。方法设计并体外合成2条靶向IGF-ⅠR的siRNAs,脂质体法瞬时转染MGC803细胞,转染前后均使用WesternBlot法检测IGF-ⅠR的表达水平,MTT法检测细胞增殖,细胞计数并描记生长曲线。结果MGC803细胞中有IGF-ⅠR的强烈表达。
牛海静 +4 more
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The structural analysis and functional study of the interaction between Hepatitis B virus X protein BH3-like domain and Bcl-xL protein [PDF]
乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus,HBV)感染是全球性的医疗难题,慢性HBV感染可大大增加感染者罹患原发性肝细胞癌(HCC)的风险。HBx蛋白是HBV基因组表达的一种多功能蛋白,在HBV的生命周期及其致HCC过程中发挥重要作用。此前研究表明,HBx可通过其序列中的BH3基序结构域与宿主细胞的Bcl-2/Bcl-XL蛋白相互作用,导致细胞凋亡,并同时提高细胞内Ca2+浓度,进而增强HBV复制,提示这一相互作用可能是HBx发挥功能效应的重要机制。本研究主要对HBx蛋白BH3结构域与Bcl ...
张莹
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慢病毒携带shRNA抑制CR-1基因表达对 CNE-2细胞特性的影响
【目的】 应用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)技术,有效沉默鼻咽癌细胞CNE-2的CR-1基因表达,研究CR-1对鼻咽癌细胞生物学行为的影响65377; 【方法】 构建针对CR-1的siRNA慢病毒表达载体[含H1启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]65377;利用包装细胞293FT生产慢病毒,感染鼻咽癌细胞CNE-2, 流式筛选GFP阳性细胞65377;应用荧光定量PCR65380;Western blot检测病毒感染后CNE-2细胞中CR-1基因的mRNA和蛋白表达,获得干扰CR ...
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RNA干扰(RNAi),又名RNA沉默,是指由双链DNA(dsRNA)引起的特异性基因抑制现象。目前,RNAi已经成为了一种非常强大的实验方法,用于大规模的基础和临床研究。虽然体外RNAi效果很好,但它在应用于体内仍有挑战性,这也是临床应用RNAi技术的难点 ...
张清 +7 more
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Screening the Drug Sensitivity Genes Related to GEM and CDDP in the Lung Cancer Cell-lines [PDF]
Background and objective Screening of small-cell lung cancer (SCLC) and non-small cell lung cancer (NSCLC) cell lines with gemcitabine hydrochloride (GEM) and cisplatin (CDDP) related to drug sensitivity gene might clarify the action mechanism of anti ...
Chunyu YANG +3 more
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【目的】 通过RNA干扰技术(RNAi)建立稳定性BIRC7基因沉默的Jurkat实验细胞模型。 【方法】应用pSilencer 4.1-CMV neo 构建BIRC7 shRNA 表达载体,采用脂质体将载体导入Jurkat 细胞,利用G418筛选出稳定表达shRNA 细胞后,行RT-PCR 和Western blot 等技术检测细胞BIRC7表达水平。 【结果】成功筛选出分别携带二种重组shRNA表达的Jurkat细胞系。与对照组细胞相比,转染BIRC7 shRNA的细胞BIRC7 mRNA表达下降约>
吴红阳 +5 more
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EFNA4 Effecting On EphA2 Regulates Cell Adhesion And Metastasis In Breast Cancer [PDF]
实验背景:肿瘤细胞对临近组织和器官的侵袭与远端转移,一直是肿瘤研究的热点。酪氨酸受体蛋白及其配体家族Ephs和Ephrins之间的作用被证实能够调控多种肿瘤细胞的形态,细胞骨架,进而影响细胞的迁移与转移。前期通过荧光定量RT-PCR,我们发现相对于正常组织来源的细胞系,EFNA4在乳腺癌和肝癌细胞系中表达较低。同时在建立的高低侵袭ZR-75-30乳腺癌细胞系中,EFNA4具有表达差异,而EFNA4在肿瘤中的作用鲜有报道。 实验方法与结果:在体外实验中 ...
王恒
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慢病毒载体介导siRNA对裸鼠移植人肺腺癌A549抑瘤作用的实验研究
目的研究慢病毒载体介导siRNA抑制survivin基因表达后对人肺腺癌A549细胞体内增殖能力的影响以及对裸鼠移植人肺腺癌的抑瘤活性。方法应用裸鼠成瘤实验测定致瘤能力的改变,采用RT-PCR和Western-blot测定干扰后survivin基因及其蛋白的表达水平;流式细胞术检测肺癌细胞凋亡指数和增殖指数。结果靶向survivin基因的siRNA可以有效抑制survivin基因的表达,使survivin-mRNA表达减少50%-80%,蛋白表达减少60%;流式细胞术检测细胞凋亡率明显提高 ...
赵岐刚, 田小侠, 李鹏, 司磊
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RNA interference inhibits hepatitis B virus gene expression and replication in HepG_2-N10 cells [PDF]
目的:评估以U6启动子作为启动序列(pSilencer2.0-U6)载体介导的小RNA干扰片段在培养细胞株中抑制HBV复制的效应.方法:将针对HBV基因组不同区域(S,X及C区)的核苷酸序列插入至pSilencer载体中,并将重组后的pSilencer质粒(分别为pS,pX及pC)载体转染入HepG2-N10细胞株(可稳定表达HBsAg、HBeAg及adw2亚型Dane颗粒)中.以ELISA法检测病毒抗原,以逆转录-聚合酶链反应法(reversetranscription ...
任建林 +5 more
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目的探讨RNA干扰技术沉默STAT3基因表达诱导人前列腺癌细胞凋亡的机制。方法针对人STAT3mRNA序列设计合成编码干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pSilencer 2.1-U6-STAT3-siRNA重组质粒,转染人前列腺癌细胞株PC3,采用Western blot、Northern blot观察STAT3基因表达抑制后Bcl-2,C-Myc与Cyclin D1表达的变化,并用流式细胞技术及吖啶橙染色方法观察细胞凋亡。结果成功构建pSilencer 2.1-U6-STAT3 ...
于浩, 张灵, 高丽芳, 赵雪俭
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