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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 1991 以表达融合蛋白的载体PUR288以及高效表达载体PBV221作载体,在大肠杆菌内成功地表达了我国克隆的HPV6BVL_I基因,并对表达蛋白进行免疫学鉴定,对两种载体的表达情况进行了讨论。
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以β-淀粉样蛋白为靶的单价及二价真核表达载体的构建和表达 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2006 【目的】构建以β-淀粉样蛋白为靶单价及二价真核表达载体pcDNA3．1-Aβ1-42、pcDNA3．1-AB42x，并在真核细胞中表达目的蛋白。【方法】PCR法扩增编码B一淀粉样蛋白的目的基因，利用基因克隆技术构建单价及二价真核表达载体；应用酶切及测序鉴定真核表达载体构建成功后，用Western blot和细胞免疫组化染色检测其在真核细胞中的表达。【结果】相应的双酶酶切能够获得插入的目的基因片段（分别为137bp和269bp），测序未发现突变；Western blot结果可见两条约为4ku和8ku的条带，
王烈峰 +6 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2007 【目的】构建以基因佐剂hGM-CSF基因为基础的真核表达质粒pIGM-CSF,并在宫颈癌细胞HeLa中表达与鉴定。【方法】采用聚合酶链反应从载体pORF-hGM-CSF中,扩增出hGM-CSF基因,克隆到双顺反子真核表达载体pIRES的多克隆位点B（MCSB）中,构建pIGM-CSF真核表达载体。然后采用脂质体转染法将其转染HeLa细胞,用RT-PCR在RNA水平和ELISA在蛋白水平检测其在真核细胞中的表达。【结果】所克隆hGM-CSF基因片段经测序完全正确;重组质粒转染Hela细胞后,检测有hGM ...
卢燕茹, 江振友
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2004 【目的】构建人resistin基因原核表达载体并观察其表达,为开展对resistin的研究打下实验基础。【方法】酚氯仿一步法从一位2型糖尿病合并胆管癌患者腹壁皮下脂肪组织抽取总RNA,RT-PCR法扩增出re-sistin基因cDNA,经测序后,PCR产物亚克隆入T载体,用EcoRI和KpnI分别酶切重组T质粒和原核表达载体pGENKS,然后resistin基因片段和表达载体通过T4DNA连接酶进行定向连接,用核酸内切酶EcoRI、KpnI酶切和测序方法鉴定出重组表达质粒 ...
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2004 ［目的 l 构建人肝豆状核变性病ATP7B基因野生型及常见突变型的小鼠肝脏特异性表达载体 ALB-ATP7B, 为制备转基因小鼠及相关基因治疗作准备。【方法】定点突变法获取人群中常见的Arg778Leu及 Hisl069Gln两种ATP7B基因突变体，定向克隆将小鼠白蛋白启动子ALB序列及野生和突变的ATP7B基因亚克 隆至真核表达载体kbpala上， 得到可在小鼠肝脏特异性表达的人ATP7B基因正常及突变型真核表达载体 ALB-ATP7B。【结果】经测序及酶切鉴定证实， 真核表达载体ALB ...
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人 CD134L 基因原核表达载体的构建、鉴定及序列分析 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2002 【目的】克隆人 CD134L 的 cDNA,构建人 CD134L 的原核表达载体 pGEX-4T-1/hCD134L,并进行序列分析。【方法】以 EB 病毒 转化健康人外周血 B 淋巴细胞,从激活的EB 病毒转化的 B细胞中提取总 RNA,采用 RT-PCR 方法扩增出人CD134L cDNA,经 BamHⅠ和 Sal Ⅰ双酶切后,克隆入原核表达载体 pGEX-4T-1,构建高效表达载体 pGEX-4T-1/CD134L,经限制性内切酶酶切分析和 cDNA 序列分析鉴定重组质粒。【结果】人CD134L ...
张 强 +3 more
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人类Foxm1b基因的原核表达、抗体制备及其对肝癌细胞中Foxm1b蛋白的识别 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2007 【目的】构建人类Foxm1b基因的原核表达载体，表达并纯化蛋白，制备多克隆抗体，并用此抗体检测肝癌细胞中Foxm1b基因的表达，为进一步研究Foxm1b基因的功能奠定基础。【方法】从GenBank中下载人类Foxm1b基因全长cDNA序列并用Pegene软件分析其可能的抗原表位，设计引物．应用RT—PCR获得含抗原表位的Foxm1b基因片段，重组人原核表达载体pET-28a，在大肠杆菌BL-21（DE31中诱导表达，应用亲和层析法获得纯度较高的原核表达蛋白并免疫大鼠制备多克隆抗体 ...
唐保东 +4 more
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蛋白酶体β5亚单位过表达对氧化环境下人晶状体上皮细胞的影响 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2007 【目的】探讨蛋白酶体筇亚单位（PSMB5）基因过表达对氧化条件下晶状体上皮细胞的影响。【方法】构建重组质粒pcDNA3．1-PSMB5并将其转染人人晶状体上皮细胞株SRAO1／04中，形成稳定表达，同时设pcDNA3．1空载体为对照组。RT—PCR法及Western blot法分别检测PSMB5基因及蛋白的表达情况。H2O2分别作用PSMB5转染细胞及空载体转染细胞，MTT法检测细胞增殖能力的变化。【结果】转染后用G418筛选3周后，获得PSMB5转染及空载体转染的G418抗性的细胞克隆 ...
张铁英 +3 more
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人DNA 聚合酶β 全长cDNA 的克隆、鉴定及真核表达载体的构建 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2002 【目的】克隆人类DNA 聚合酶(pol-β)基因全长cDNA, 构建该基因的真核高效表达载体。【方法】抽提人胚肺纤 维细胞HLF 总RNA 进行RT-PCR 扩增, 用pGEM-T 载体经T/A 克隆、DNA 测序确定后, 用双酶切将pol-β 全长cDNA 定向 克隆到绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1 , 转染大肠杆菌DH5α, 筛选阳性克隆, 双酶切鉴定重组质粒。【结果】经RT-PCR 获 得1.03 kb 的产物, 经DNA 测序, 确定所扩增片段为人类pol-β 基因全长cDNA ...
杜柳涛, 高 昆, 何 云
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绿色荧光蛋白基因 gfp 真核表达载体 pcTKGFP 的构建 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 1999 目的: 构建携带绿色荧光蛋白基因( gfp)的真核表达载体 pcTKGFP,为利用绿色荧光蛋白标记在实验动物体内进 行自杀性基因治疗的研究和转基因动物打靶载体的构建提供基因材料。方法: 采用 PCR 技术从商品质粒 pEGP -C1 中扩增出 gfp( 799 bp) ,PCR 产物用 XbaⅠ和 BamH Ⅰ双酶切后定向克隆至真核表达载体 pcTK, 重组质粒 pcTKGFP 用限制性内切酶和 DNA 序列分析进行鉴定。结果: 部分 DNA 序列分析证明 PCR 产物为 gfp, 成功筛选到携带 ...
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