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以β-淀粉样蛋白为靶的单价及二价真核表达载体的构建和表达 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2006 【目的】构建以β-淀粉样蛋白为靶单价及二价真核表达载体pcDNA3．1-Aβ1-42、pcDNA3．1-AB42x，并在真核细胞中表达目的蛋白。【方法】PCR法扩增编码B一淀粉样蛋白的目的基因，利用基因克隆技术构建单价及二价真核表达载体；应用酶切及测序鉴定真核表达载体构建成功后，用Western blot和细胞免疫组化染色检测其在真核细胞中的表达。【结果】相应的双酶酶切能够获得插入的目的基因片段（分别为137bp和269bp），测序未发现突变；Western blot结果可见两条约为4ku和8ku的条带，
王烈峰 +6 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2007 【目的】构建以基因佐剂hGM-CSF基因为基础的真核表达质粒pIGM-CSF,并在宫颈癌细胞HeLa中表达与鉴定。【方法】采用聚合酶链反应从载体pORF-hGM-CSF中,扩增出hGM-CSF基因,克隆到双顺反子真核表达载体pIRES的多克隆位点B（MCSB）中,构建pIGM-CSF真核表达载体。然后采用脂质体转染法将其转染HeLa细胞,用RT-PCR在RNA水平和ELISA在蛋白水平检测其在真核细胞中的表达。【结果】所克隆hGM-CSF基因片段经测序完全正确;重组质粒转染Hela细胞后,检测有hGM ...
卢燕茹, 江振友
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Effect and mechanism of microRNAs on various diabetic wound local cells microRNA对各种糖尿病创面局部细胞的作用及机制
Journal of Diabetes, Volume 15, Issue 11, Page 955-967, November 2023., 2023 Highlights For the first time, we have examined the impact of microRNA on diabetic wounds at a cellular level. We have analyzed how a particular microRNA influences different types of cells, uncovering its function and mechanism. This study furthers the discovery of the clinical potential of diverse microRNAs by evaluating their distinct effects and ...
Hongjie Li, Shengyu Jing, Hongbo Xu
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Developmental Medicine &Child Neurology, Volume 61, Issue 3, Page E1-E35, March 2019., 2019 目的 本国际临床指南由欧洲残疾儿童学会（the European Academy of Childhood Disability，EACD）牵头制定，旨在解决发育性协调障碍（developmental coordination disorder，DCD）的定义、诊断、评估、干预以及与社会心理方面的临床应用关键问题。 方法 本指南针对五个领域的关键问题，通过文献综述和专家团队的正式讨论达成共识。为保证指南的循证基础，以“机制”、“评估”和“干预”为检索词, 对2012年更新以来提出的最新建议以及新增的“社会心理问题”和“青少年/成人”为检索词进行检索。根据牛津大学循证医学中心证据等级 (证据水平 [level of evidence, LOE]1–4) 将结果进行分类，最终转化为指南建议。并由国际 ...
Jing Hua +6 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2012 目的构建人类GPC3重组真核表达载体。方法以人类肝脏cDNA文库为模板扩增出GPC3基因序列,应用T克隆载体及pcDNA真核表达载体重构,将质粒转化进入HLE人肝癌细胞系,进行荧光免疫方法检测。结果 测序结果序列正确,荧光染色转染质粒的HLE细胞可见细胞浆和细胞膜上有GPC3的表达。结论成功构建真核表达载体pcDNA-GPC3,并在真核细胞中可以表达。
李莉 +4 more
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真核表达质粒PcDNA3.1（+）-带有白蛋白信号肽的Vasostatin（120-180aa）的构建及其在体内外细胞中的表达
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的构建真核表达质粒PcDNA3.1（+）-带有白蛋白信号肽的Vasostatin（120-180aa）并了解其在体内外真核细胞中的表达。方法将带有白蛋白信号肽的Vasostatin（120-180aa）的逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）产物克隆至pcDNA3.1（+）真核表达载体上,经酶切鉴定及测序分析证明构建成功后,以脂质体介导法转染体外培养的真核293T细胞及注射入鼠骨骼肌细胞中,了解其在体内外真核细胞中的表达情况。结果我们获取了包含带有白蛋白信号肽的Vasostatin（120-180aa ...
刘建巨 +6 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建靶向人SSH1L的siRNA真核表达载体（pSUPER-SSH1L）。方法将设计好的SSH1L的siRNA的寡聚脱氧核苷酸链与真核表达载体pSUPER连接,构建重组pSUPER-SSH1L真核表达载体。对该重组表达载体进行酶切鉴定及DNA测序;通过Western blot检测SSH1L蛋白的表达。结果酶切鉴定、DNA测序以及Western blot检测结果证实表达质粒构建成功,无碱基突变。结论成功构建了靶向人SSH1L基因表达的siRNA干扰质粒载体pSUPER-SSH1L ...
邢志军, 赵建武, 王岩, 高忠礼
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建pEGFP-N1/VEGF真核表达质粒,并进行鉴定。方法利用RT-PCR方法从组织中提取VEGF的基因片段,与pMD18-T载体连接,构建pMD18-T/VEGF重组质粒,酶切后与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEGFP-N1/VEGF真核表达质粒,进行测序、酶切鉴定,表明质粒构建成功。结果本实验成功构建了pEGFP-N1/VEGF真核表达质粒。结论为进一步研究利用VEGF基因修饰骨组织工程骨,促进血管再生提供实验基础。
张明磊 +4 more
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人乳头瘤病毒18型E6蛋白真核表达载体的构建及其在子宫颈癌细胞株Hela细胞中的表达
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建并鉴定p3×flag-myc-CMV-24-HPV18E6真核表达载体,并转染Hela细胞后,检测其在Hela细胞中的表达。方法用RT-PCR法从Hela细胞中扩增出带HindⅢ、SalⅠ酶切位点的HPV18E6基因片段,将HPV18E6基因片段连接到pMD-18T载体上,通过限制性内切酶HindⅢ、SalⅠ酶切,T4连接酶连接到含有上述酶切位点的p3×flag-myc-CMV-24真核表达载体上,通过脂质体将p3×flag-myc-CMV-24-HPV18E6转染入Hela细胞48h后 ...
卫莹 +7 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2007 目的构建HBsAg真核表达载体,转染CHO细胞并检测其表达。方法通过PCR法扩增出乙肝表面抗原的S基因和dhfr基因,分别克隆到T载体上,然后分别将S基因和dhfr基因克隆到pCI载体上,将pCI载体的CMV启动子替换为hEF-1α启动子。对新构建的pEF1-αS-dhfr真核表达载体进行酶切和测序鉴定。用脂质体法转染CHO（dhfr-）细胞,并用ELISA法检测HBsAg表达。结果hEF-1α启动子、S基因和dhfr基因经测序与Genbank报道一致。真核表达载体pEF1-αS ...
张艳, 时成波, 郭丽, 范洪学
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