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小鼠Neuronatin基因真核表达载体构建及其蛋白产物的检测
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2008 【目的】 构建基因Nnat的真核表达载体pEGFP*9鄄N1/Nnat并在真核细胞中表达目的蛋白65377; 【方法】 RT*9鄄PCR法扩增Nnat基因编码区(ORF),利用基因克隆技术构建真核表达载体,酶切及测序进行鉴定;载体构建成功后转染HepG2细胞,观察融合蛋白在细胞中的定位,Western blot检测其在真核细胞中的表达65377;【结果】 RT*9鄄PCR法扩增出Nnat基因的两种亚型,相应的双酶切能够获得插入的目的基因片断,测序分析未发现突变 ...
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人DNA 聚合酶β 全长cDNA 的克隆、鉴定及真核表达载体的构建 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2002 【目的】克隆人类DNA 聚合酶(pol-β)基因全长cDNA, 构建该基因的真核高效表达载体。【方法】抽提人胚肺纤 维细胞HLF 总RNA 进行RT-PCR 扩增, 用pGEM-T 载体经T/A 克隆、DNA 测序确定后, 用双酶切将pol-β 全长cDNA 定向 克隆到绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1 , 转染大肠杆菌DH5α, 筛选阳性克隆, 双酶切鉴定重组质粒。【结果】经RT-PCR 获 得1.03 kb 的产物, 经DNA 测序, 确定所扩增片段为人类pol-β 基因全长cDNA ...
杜柳涛, 高 昆, 何 云
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2004 ［目的 l 构建人肝豆状核变性病ATP7B基因野生型及常见突变型的小鼠肝脏特异性表达载体 ALB-ATP7B, 为制备转基因小鼠及相关基因治疗作准备。【方法】定点突变法获取人群中常见的Arg778Leu及 Hisl069Gln两种ATP7B基因突变体，定向克隆将小鼠白蛋白启动子ALB序列及野生和突变的ATP7B基因亚克 隆至真核表达载体kbpala上， 得到可在小鼠肝脏特异性表达的人ATP7B基因正常及突变型真核表达载体 ALB-ATP7B。【结果】经测序及酶切鉴定证实， 真核表达载体ALB ...
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绿色荧光蛋白基因 gfp 真核表达载体 pcTKGFP 的构建 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 1999 目的: 构建携带绿色荧光蛋白基因( gfp)的真核表达载体 pcTKGFP,为利用绿色荧光蛋白标记在实验动物体内进 行自杀性基因治疗的研究和转基因动物打靶载体的构建提供基因材料。方法: 采用 PCR 技术从商品质粒 pEGP -C1 中扩增出 gfp( 799 bp) ,PCR 产物用 XbaⅠ和 BamH Ⅰ双酶切后定向克隆至真核表达载体 pcTK, 重组质粒 pcTKGFP 用限制性内切酶和 DNA 序列分析进行鉴定。结果: 部分 DNA 序列分析证明 PCR 产物为 gfp, 成功筛选到携带 ...
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鼠白细胞介素-2 受体 α 、β链基因反义 RNA 真核表达质粒的构建 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2000 【目的】构建鼠 IL-2R α与β 链基因的反义 RNA 真核表达质粒, 为反义 RNA 基因治疗细胞免疫相关疾病作准备。 【方法】用限制性内切酶从克隆载体上切下鼠 IL-2R α与β 链cDNA 及鼠 IL-2启动子, 克隆入真核表达质粒 pcDNA3 的多克隆 位点上,用酶切或 PCR 法鉴定正反连接。【结果】得到 4 个反向连接的重组质粒: pcAnti-mIL-2Rα , pcAnti-mIL-2Rβ ,pcAntim IL-2Rα β 及 pciAnti-mIL-2Rα β 。前三者由CMV ...
何承伟, 马涧泉
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两种不同来源的EBV LMP1 基因在Balb/c 3T3 细胞中的表达 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2000 【目的】研究来源于鼻咽癌细胞株SUNE1 及EBV 标准株B95 -8 细胞中两种EBV LMP1 基因在真核细胞Balb/c 3T3 中的表达, 为进一步研究EBV LMP1 基因的核酸疫苗打基础。【方法】将两种不同来源EBV LMP1 基因的真核表达质粒, 经 脂质体法转染Balb/ c 3T3 细胞后, 用Western blot、免疫组化及PCR 的方法检测不同转染细胞中EBV LMP1 蛋白的表达及核酸片 段。【结果】PCR 结果表明在两种不同来源LMP1 转染细胞中均有EBV LMP1
陈 元 +3 more
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bcl-2 基因克隆、转染及其在PC12 细胞中的表达 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2002 【目的】研究bcl-2 基因(bcl-2)在PC12 细胞中的表达。【方法】构建真核表达载体pcDNA3-bcl-2 , 采用脂质体介 导将重组质粒导入PC12 细胞, Western blo t 和原位免疫组化检测外源基因表达。【结果】本实验成功构建了真核表达载体 pcDNA3-bcl-2, 并用脂质体介导的方法获得了稳定表达bcl-2 的细胞克隆;Western blo t 显示有26 ku 的蛋白质表达, bcl-2 单克 隆抗体免疫组化染色呈阳性反应。【结论】重组质粒pcDNA3-bcl ...
吴永青
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牛pcDNA3-bFGF 真核表达重组体的构建与鉴定 [PDF]
, 2002 【目的】构建并鉴定牛碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因真核表达质粒。【方法】设计含EcoRⅠ 和Xho Ⅰ 酶 切位点的bFGF cDNA 引物, 采用PCR 法从原核pET3c-bFGF 中扩增bFGF cDNA 片段, 纯化PCR 产物, EcoR Ⅰ 和Xho Ⅰ 双酶 切并连接至pcDNA3 , 转化感受态大肠杆菌DH5α, 酶切鉴定阳性重组子, 并进行序列测定。【结果】经PCR 能扩增出483 bp 的片段, 与预期片段大小相符, 构建的重组体经酶切鉴定能切出插入片段 ...
曹开源, 徐 霖
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人FOXC2真核表达载体的构建及稳定转染C-33A细胞系的建立
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建人FOXC2真核表达载体,并转染人宫颈癌C-33A细胞,建立稳定转染的细胞系。方法应用PCR方法从人FOXC2克隆中扩增其cDNA编码区序列,并将其构建于pcDNA3.1（-）真核表达载体。经PCR和测序鉴定后,利用脂质体进行宫颈癌C-33A细胞的转染,应用G418筛选出稳定表达FOXC2的细胞系,通过RT-PCR及Westernblot法检测FOXC2的表达情况。结果成功构建pcDNA3.1（-）/FOXC2真核表达载体,建立稳定转染FOXC2的C-33A细胞系,并鉴定了FOXC2目的基因在C-
成荣杰, 付艳
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miR-18a过表达及抑制表达人鼻咽癌细胞株的构建 [PDF]
, 2018 【目的】建立稳定miR-18a过表达及表达的人鼻咽癌细胞系，为研究miR-18a在鼻咽癌发生发展中 的功能奠定基础。【方法】将miR-18a前体的编码基因片段及miR-18a反义寡核苷酸克隆到慢病毒载体中，DNA 测序鉴定；将构建好的载体转染293T细胞，获得重组miR-18a过表达及抑制表达的慢病毒载体，感染人鼻咽癌细 胞CNE1和CNE2，嘌呤霉素筛选获得稳定干扰miR-18a表达及过表达miR-18a的细胞系，PCR及western blot鉴 定。【结果】成功构建真核表达的慢病毒miR ...
陈晓红 +5 more
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