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pcDNA3.1-flag-pygo2真核表达载体的构建及在C6细胞中的表达
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2008 目的构建pcDNA3.1-flag-pygo2真核表达载体并在C6细胞中进行表达。方法从小鼠脑胶质细胞中提取总RNA,RT-PCR法反转录合成c DNA,设计引物,调取目的片段,与pcDNA3.1-flag载体连接后转化大肠杆菌DH5α,LB平板筛选菌落,提取质粒。重组质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经过酶切鉴定及测序后,阳离子脂质体法转染C6细胞并经免疫细胞化学染色及蛋白印迹检测重组体的表达。结果重构质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经限制性核酸内切酶EcoRⅠ ...
王海东 +5 more
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小鼠Neuronatin基因真核表达载体构建及其蛋白产物的检测
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2008 【目的】 构建基因Nnat的真核表达载体pEGFP*9鄄N1/Nnat并在真核细胞中表达目的蛋白65377; 【方法】 RT*9鄄PCR法扩增Nnat基因编码区(ORF),利用基因克隆技术构建真核表达载体,酶切及测序进行鉴定;载体构建成功后转染HepG2细胞,观察融合蛋白在细胞中的定位,Western blot检测其在真核细胞中的表达65377;【结果】 RT*9鄄PCR法扩增出Nnat基因的两种亚型,相应的双酶切能够获得插入的目的基因片断,测序分析未发现突变 ...
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2007 目的探讨PAI的发卡样siRNA真核表达载体PAI siRNA对人肝癌HpG2细胞VEGF表达的影响。方法设计短发夹状PAI siRNA的寡核苷酸链,将其插入到真核细胞表达载体pSilencerTM 2.1-U6 neo载体中,构建的重组载体后;采用脂质体转染方法将构建的重组载体导入人肝癌细胞HpG2中,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、westernblot法分别检测转染细胞PAI mRNA和蛋白的表达变化以及对VEGF表达的影响。结果经测序证明PAI siRNA序列正确;转染PAI ...
杜建时, 赵晴, 张静菊, 王嘉桔
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的构建（BbxⅡ）基因真核表达载体,为研究家蚕素Ⅱ在哺乳动物细胞中的生物学作用奠定基础。方法以含有BbxⅡcDNA的PUC57质粒为模板,采用聚合酶链式反应（PCR）扩增BbxⅡcDNA片段。真核表达载体PcD-NA3.1及PCR产物经双酶切后连接,转化大肠杆菌DH-5α感受态菌,获得重组载体PcDNA3.1-Bbx/His,进行酶切鉴定和测序鉴定。结果 PCR获得与预期大小一致约300 bp的特异性DNA,重组载体PcDNA3.1-BbxⅡ/His经双酶切及测序鉴定证实 ...
李洪霞 +5 more
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两种不同来源的EBV LMP1 基因在Balb/c 3T3 细胞中的表达
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2000 【目的】研究来源于鼻咽癌细胞株SUNE1 及EBV 标准株B95 -8 细胞中两种EBV LMP1 基因在真核细胞Balb/c 3T3 中的表达, 为进一步研究EBV LMP1 基因的核酸疫苗打基础。【方法】将两种不同来源EBV LMP1 基因的真核表达质粒, 经 脂质体法转染Balb/ c 3T3 细胞后, 用Western blot、免疫组化及PCR 的方法检测不同转染细胞中EBV LMP1 蛋白的表达及核酸片 段。【结果】PCR 结果表明在两种不同来源LMP1 转染细胞中均有EBV LMP1
陈 元 +3 more
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Construction of eukaryotic vector pcDNA3.1-flag-pygo2 and expression in C6 cell [PDF]
, 2008 目的构建pcDNA3.1-flag-pygo2真核表达载体并在C6细胞中进行表达。方法从小鼠脑胶质细胞中提取总RNA,RT-PCR法反转录合成c DNA,设计引物,调取目的片段,与pcDNA3.1-flag载体连接后转化大肠杆菌DH5α,LB平板筛选菌落,提取质粒。重组质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经过酶切鉴定及测序后,阳离子脂质体法转染C6细胞并经免疫细胞化学染色及蛋白印迹检测重组体的表达。结果重构质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经限制性核酸内切酶EcoRⅠ ...
王占祥 +5 more
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皱纹盘鲍HdhTPX2基因在毕赤酵母中的表达及抗氧化活性研究 [PDF]
, 2019 为研究皱纹盘鲍Haliotis discus hannai Ino硫氧还蛋白过氧化物酶（TPX2）蛋白的抗氧化活性,将HdhTPX2基因克隆至pPIC9K载体,通过电击转化至毕赤酵母GS115菌株中,获得重组表达质粒pPIC9K-HdhTPX2,经甲醇诱导及亲和层析纯化得到重组HdhTPX2蛋白,并进行质谱鉴定及体外抗氧化功能检测。结果表明:本研究中成功构建了重组毕赤酵母菌株GS115/pPIC9K-HdhTPX2,经表达条件的优化,在pH为7的培养基中用0.5%甲醇诱导表达72 h ...
乔琨 +9 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建MYCT-1（myc target）基因真核表达载体,观察其转染胃粘膜GES-1细胞系后的表达。方法用RT-PCR法合成MYCT-1 cDNA,克隆至表达载体pcDNA3.1上,测序验证无突变发生。将表达载体转染GES-1细胞,用RT-PCR和Western blot检测MYCT-1基因的表达。结果限制性内切酶酶切和DNA测序证实成功克隆了MYCT-1 cD-NA全长并正确插入了表达载体,在GES-1细胞中检测到MYCT-1 mRNA和蛋白。结论成功构建了MYCT-1真核表达载体,可在GES ...
梅旭, 刘政, 邱广斌
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Optimizing condition of efficient high-expression of lipase B in Pichia pastoris and enzymatic kinetic study [PDF]
, 2015 脂肪酶B是一种用途较为广泛的脂肪酶，能够催化甘油三酯酯键的断裂。除此之外，脂肪酶B还具有多种酶活性，对非水溶性和水溶性物质都有很强的催化活性。因其催化功能的多样性及作为一种生物催化剂的优越性，脂肪酶B在许多领域中具有广泛的应用。随着基因工程和发酵工程等生物技术的不断发展，微生物脂肪酶在各行各业中都得到了广泛应用。而毕赤酵母作为一种能够高效表达外源蛋白的真核表达系统，可以高效表达外源脂肪酶，为其工业化生产提供了基础。本论文以重组毕赤酵母表达脂肪酶B为研究目标 ...
魏常锦
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建核转录因子κB抑制蛋白激酶（inhibitor of kappa B kinase,IKK）β真核表达载体,以便进一步探讨其生物学作用。方法从人正常肝细胞L02中提取RNA,并利用IKKβ特异性引物通过RT-PCR方法扩增了IKKβcD-NA,并克隆入pcDNA3载体中,构建重组载体pcDNA3-IKKβ。将重组载体转染入HEK293细胞中,并通过免疫印迹方法检测IKKβ的表达。结果酶切及测序结果显示,重组质粒构建成功;免疫印迹结果显示 ...
张冬梅 +6 more
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