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人DNA 聚合酶β 全长cDNA 的克隆、鉴定及真核表达载体的构建
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2002 【目的】克隆人类DNA 聚合酶(pol-β)基因全长cDNA, 构建该基因的真核高效表达载体。【方法】抽提人胚肺纤 维细胞HLF 总RNA 进行RT-PCR 扩增, 用pGEM-T 载体经T/A 克隆、DNA 测序确定后, 用双酶切将pol-β 全长cDNA 定向 克隆到绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1 , 转染大肠杆菌DH5α, 筛选阳性克隆, 双酶切鉴定重组质粒。【结果】经RT-PCR 获 得1.03 kb 的产物, 经DNA 测序, 确定所扩增片段为人类pol-β 基因全长cDNA ...
杜柳涛, 高 昆, 何 云
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Construction of polybutycyanocrylate nanoparticles(PBCA-NPs) loaded P16a gene and expression in Hep-2 cell [PDF]
, 2010 目的制备携带P16A基因的聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒并在喉癌细胞中进行表达。方法选用乳化聚合法制备PbCA-nPS,以激光粒度分析仪及透射电子显微镜分析纳米粒的形态和粒径。用阳离子表面活性剂十六烷基三乙基溴化铵(CTAb)对纳米粒进行表面修饰。构建真核表达载体PIrES2-EgfP-P16A经过酶切鉴定及测序后与PbCA-nPS连接,转染喉癌细胞HEP-2,荧光显微镜检测转染效率,蛋白印迹法检验P16A基因的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果所制PbCA-nPS粒径均匀、zETA电位较高,较为理想 ...
周燚, 赵德安, 骆启聪
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Cdc42-shRNA表达载体的构建及在肝癌细胞株的沉默效果
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建Cdc42-shRNA真核表达载体。方法合成Cdc42的基因干扰序列并定向插入到RNA干扰（RNAi）真核表达载体pGenesil-1质粒,通过测序进行鉴定。干扰质粒经脂质体Lipofectamine2000介导转染肝癌细胞,Westernblot方法检测沉默效率。结果测序证明干扰序列完全正确,Westernblot结果显示Cdc42-shRNA对肝癌细胞株内源性Cdc42有较好的沉默效果。结论成功构建了Cdc42-shRNA真核表达载体,为进一步研究Cdc42在基因治疗中的作用奠定基础。
解英俊 +3 more
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含副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus) Fla I基因真核表达重组质粒的构建 [PDF]
, 2002 用ClaⅠ /EcoRⅠ双酶切带有副溶血弧菌 (Vibrioparahaemolyticus)极鞭毛蛋白FlaI基因的质粒pMD18 FlaI,回收目的基因片段 ,插入到真核细胞表达载体pIRESneo同样经ClaⅠ /EcoRⅠ切开的窗口中 ,成功地将FlaI克隆到pIRESneo中 ,获得有意义的重组质粒pIRESneo FlaI.构建的pIRESneo FlaI真核表达重组质粒 ...
丁少雄 +5 more
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Characterization of a Novel Alternatively Spliced Variant from Human FMR1 Gene and Function of Its Encoded Product [PDF]
, 2017 脆性X智力障碍1基因（fragileXmentalretardation1gene，FMR1）编码一个选择性RNA结合蛋白，称脆性X智力低下蛋白(fragileXmentalretardationprotein，FMRP)。该蛋白表达减少或缺失可导致一种常见的遗传性智力缺陷疾病，称脆性X综合征（fragileXsyndrome，FXS）。FMR1基因的可变剪接与FMRP蛋白表达关系密切。不同的剪接方式会产生不同的转录本，最后导致FMRP蛋白的结构和功能发生改变，且相应的信号通路也受到影响 ...
杨文静
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鼠白细胞介素-2 受体 α 、β链基因反义 RNA 真核表达质粒的构建
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2000 【目的】构建鼠 IL-2R α与β 链基因的反义 RNA 真核表达质粒, 为反义 RNA 基因治疗细胞免疫相关疾病作准备。 【方法】用限制性内切酶从克隆载体上切下鼠 IL-2R α与β 链cDNA 及鼠 IL-2启动子, 克隆入真核表达质粒 pcDNA3 的多克隆 位点上,用酶切或 PCR 法鉴定正反连接。【结果】得到 4 个反向连接的重组质粒: pcAnti-mIL-2Rα , pcAnti-mIL-2Rβ ,pcAntim IL-2Rα β 及 pciAnti-mIL-2Rα β 。前三者由CMV ...
何承伟, 马涧泉
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Recombinant production, antimicrobial and antiviral activities of both Scygonadin from Scylla paramamosain and hybrid peptide Scy-hepc [PDF]
, 2011 抗菌肽（antimicrobialpeptide）是先天性免疫的重要组分，广泛存在于生物界的各个门类，进化上相对保守，具有广谱的抗菌、抗病毒和抗肿瘤等作用。抗菌肽具有可见的应用前景，但直接从动物体提取抗菌肽不适于未来产业化的要求。本研究利用本实验室分离鉴定的拟穴青蟹抗菌肽Scygonadin基因和大黄鱼抗菌肽Hepcidin基因，通过基因工程技术构建了Scygonadin基因及与大黄鱼抗菌肽Hepcidin基因联合的基因工程稳定表达菌株，优化其表达与纯化工艺，研究其基因表达产物的抗菌与抗病毒活性 ...
彭会
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激活素受体相互作用蛋白ARIPzip真核表达载体的构建及表达
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建激活素受体相互作用蛋白（activin receptor interacting protein zip,ARIPzip）真核表达载体,以便进一步探讨其生物学作用。方法从小鼠成纤维细胞3T3中提取RNA,并利用ARIPzip特异性引物通过RT-PCR方法扩增了ARIPzip cDNA,并克隆入pcDNA-Flag载体中,构建重组载体pcDNA-F-ARIPzip。将重组载体转染入HEK293细胞中,并通过免疫印迹方法检测ARIPzip的表达。结果酶切及测序结果显示,重组质粒构建成功 ...
裴颖 +7 more
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, 2016 背景：心房颤动是是指心房的无序激动和无效收缩，是临床上最常见的心律失常。它是多种心脏疾病的独立危险因子，可以导致严重的并发症，包括室性心律失常、心动过速性心肌病、心力衰竭和血栓栓塞等，严重危害公众的健康。房颤的发病机制极其复杂，主要有受环境因素和遗传因素影响。随着生物学技术和电生理膜片钳技术在心血管领域的应用，房颤的分子遗传学研究取得了很大的进展，发现了很多与房颤有关的致病基因。这些基因包括离子通道，自主神经功能调节，心脏发育，心肌重塑等相关基因。心肌细胞正常的功能包括收缩、自律、兴奋、传导 ...
隗楷桢
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的构建卵巢特异启动子-1（ovarian-specific promoter,OSP-1）调控白介素-24基因（Interleukin-24,IL-24）表达的真核表达载体。方法通过RT-PCR方法从人外周血基因组中扩增IL-24基因片段,应用基因重组技术将0SP-1启动子片段插入到pcDNA3.0真核表达载体,替换pcDNA3.0载体的CMV启动子与增强子序列,然后将克隆的IL-24基因片段插入到pcDNA3.0-OSP-1载体的OSP-1启动子的下游,从而构建成由OSP-1启动子调控IL ...
祝贺 +4 more
doaj