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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的构建卵巢特异启动子-1（ovarian-specific promoter,OSP-1）调控白介素-24基因（Interleukin-24,IL-24）表达的真核表达载体。方法通过RT-PCR方法从人外周血基因组中扩增IL-24基因片段,应用基因重组技术将0SP-1启动子片段插入到pcDNA3.0真核表达载体,替换pcDNA3.0载体的CMV启动子与增强子序列,然后将克隆的IL-24基因片段插入到pcDNA3.0-OSP-1载体的OSP-1启动子的下游,从而构建成由OSP-1启动子调控IL ...
祝贺 +4 more
doaj
, 2012 目的:构建二酰甘油酰基转移酶(DGAT)的微藻真核表达载体。方法:采用RT-PCR从甘蓝型油菜中扩增得到DGAT1和DGAT22个基因cDNA编码区序列,分别连接到载体pMD18-TSimple上,经测序及与已知的DGAT1和DGAT2序列比对,将鉴定正确的基因用于微藻真核表达载体pSV40DGAT1/CaMVBar和pSV40DGAT2/CaMVBar的构建。结果:克隆到的甘蓝型油菜DGAT1和DGAT22个基因长度分别为1512和1026bp,同源性分别为99%和98 ...
张楠楠 +6 more
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, 2003 目的 运用植物转基因技术 ,探索构建表达人类 β-防御素 - 2 ( h BD- 2 )的植物生物反应器的可能性及技术路线。方法 将 C端带 myc和 6x His双标记的重组 h BD- 2基因插入植物真核表达载体 p CAMBIA13 0 4中 ,构建 C端带 m yc和 6x His双标记的重组 h BD- 2植物真核表达载体 rp CAMBIA13 0 4/ h BD- 2 / His。利用此载体转化根癌农杆菌 L BA44 0 4,经卡那霉素进行抗性基因筛选和 PCR检测 ...
杜军 +5 more
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, 2006 【目的】构建丙型肝炎病毒（HCV）包膜蛋白E2基因的重组原核表达质粒，并获得E2蛋白的高效表达。【方法】通过RT-PCR法从HCV RNA阳性的血清标本中扩增出HCVE2区基因595bp，PCR产物分别经BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切后连接到经同样酶切的原核表达载体PET22b（＋）上，转化大肠杆菌DH5α菌株，获得阳性重组质粒PETB，阳性质粒转化BL21（DE3），IPTG诱导表达，表达产物经SDS-PAGE和Westemblot鉴定。【结果】成功地克隆了HCVE2区基因，构建了其原核表达质粒 ...
李刚 +6 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2008 目的构建人PTEN基因的真核表达载体并在COS-7细胞中高效表达。方法从人喉粘膜组织中分离总RNA,经逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）得到PTEN全基因。克隆入PTEM-T easy载体上,经过PCR、酶切鉴定为阳性的克隆,进行测序分析。然后将所获得的基因定向克隆入PCI-neo载体中构建表达载体。并将其转入COS-7细胞中进行瞬时表达。结果反转录PCR扩增后的产物,在约1.4 kb处可以看见特异性条带,序列分析表明与GenBank中的PTEN基因序列相同。PCI-PTEN真核载体转染COS ...
陈鸥 +5 more
doaj
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2007 【目的】构建载有小鼠抵抗素（resistin）基因及其反义核酸的重组真核表达质粒，探讨抵抗素对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响。【方法】用RT-PCR技术从小鼠脂肪组织扩增抵抗素基因cDNA，A／T克隆于pGEM-T载体，再亚克隆于pcDNA3．1（＋）和pcDNA3．1（-）真核表达载体，构建载有小鼠抵抗素（resistin）基因及其反义核酸的重组真核表达质粒pcDNA3．1^（＋）resistin和pcDNA3．1^（-）-resistin^（-）。将pcDNA3．1^（-）resistin^（-
李芳萍 +4 more
doaj
, 2003 探讨人肝癌细胞(SMMC-7721)的同步化方法及粘附分子integrin β_1 在不同周期肝癌细胞上的表达。采用胸腺嘧啶脱氧核苷、秋水仙碱顺序阻断和胸腺嘧啶脱氧核苷双阻断后释放培养的方法分别获得G_1期和S期的肝癌细胞,用流式细胞仪进行周期分析;采用抗体阻断技术和流式细胞仪检测肝癌细胞上integrin β_1的表达。结果发现未同步化肝癌细胞integrin β_1表达的荧光强度为95.70;G_1期和S期细胞的同步率分别为74.09％和98.29％,integrin β_1表达的荧光强度相应为76.
赵彦华 +4 more
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四川大学学报. 自然科学版, 2015 从小鼠脑组织中提取总RNA,RT-PCR扩增PICK1及Orai1的CDS序列,构建原核表达载体GST-PICK1及真核表达载体myc-Orai1,重组质粒经SalⅠ和NotⅠ双酶切鉴定后测序.正确的质粒myc-Orai1在HEK293细胞中表达收获过表达蛋白,GST-PICK1进行原核表达并获得融合蛋白.将纯化后的GST-PICK1蛋白条带切下,进行蛋白质液相质谱分析.后将myc-Orai1蛋白与GST-PICK1蛋白混合,进行GST-pulldown实验,western-blot检测到myc ...
蔡佩玲, 程丽佳, 王婷
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, 1999 采用聚丙烯酰胺凝胶不连续系统电泳方法分析了泥鳅和大鳞副泥鳅不同交配组合、不同核质关系下，胚胎发育阶段（０～１４５ ｈ） 酯酶（ＥＳＴ） 和苹果酸脱氢酶（ＭＤＨ） 同工酶的分化表达谱式。ＥＳＴ 同工酶随细胞质、细胞核不同及胚胎发育各个时期具有不同的个体发育谱式。以泥鳅卵子为细胞质环境的Ⅰ、Ⅱ两组，杂交组（ Ⅱ） 的ＥＳＴ同工酶基因在受精后３ ｍｉｎ 至原肠中期，雄核基因参与表达与调控。以大鳞副泥鳅为细胞质环境的Ⅲ、Ⅳ两组，各酶均以细胞质调控为主。ＭＤＨ 同工酶在各组合及各个发育阶段均未表现出实质性差异 ...
赵振山,吴清江,熊传喜,和法德,高贵琴,罗宇良
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, 2007 本发明涉及一种用于体外药物代谢性质评价的药物代谢酶异源表达系统，具体的说一种共表达CYP和CPR的酵母表达系统，分别带有CPR的DNA片段和CYP的DNA片段的酵母表达载体转导酵母细胞中，这两个表达载体分别以整合型和游离型的方式在酵母细胞中表达，重组的酵母细胞经发酵诱导，得到的酵母细胞制备物即为目的表达系统，其可应用于CYP酶系体外药物代谢性质的评价。所构建成新的酿酒酵母共表达系统可广泛地应用于氧化还原酶体系如细胞色素P450酶系，后者被广泛地应用于涉及ADME/T和药代动力学中药物代谢等的筛选 ...
杨 凌, 程 婕
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