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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2002 【目的】研究bcl-2 基因(bcl-2)在PC12 细胞中的表达。【方法】构建真核表达载体pcDNA3-bcl-2 , 采用脂质体介 导将重组质粒导入PC12 细胞, Western blo t 和原位免疫组化检测外源基因表达。【结果】本实验成功构建了真核表达载体 pcDNA3-bcl-2, 并用脂质体介导的方法获得了稳定表达bcl-2 的细胞克隆;Western blo t 显示有26 ku 的蛋白质表达, bcl-2 单克 隆抗体免疫组化染色呈阳性反应。【结论】重组质粒pcDNA3-bcl ...
吴永青
doaj
Expression of the coat protein gene of IHHNV in shrimp in Pichia Pastoris [PDF]
, 2012 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒是“须向OIE申报的甲壳动物重要疾病“之一。将该病毒主要结构蛋白基因克隆至毕赤酵母穿梭表达质粒PPIC9k,构建重组表达载体(命名为PPIC9k-IV),限制性内切酶bglⅡ对其进行酶切线性化,采用电穿孔法转化到毕赤酵母gS115宿主菌。采用PCr方法分析和g418筛选来鉴定重组的毕赤酵母,诱导表达的产物分别进行ElISA分析或WESTErn blOT免疫印迹鉴定,分泌表达产物分子量大小为40ku左右 ...
刘棠 +7 more
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Functional expression of SCN5A mutation R1628Q associated with Brugada syndrome [PDF]
, 2013 目的 体外构建含R1628Q突变的人心脏钠离子通道α亚基真核表达载体pHL-hH1-R1628Q。研究R1628Q突变对钠通道电生理性质的影响，阐明Brugada综合征的发病机制，为疾病的基因诊断和分子治疗提供新的思路。 方法 设计带突变位点的引物，以含有人心脏钠离子通道cDNA的质粒为模板经重叠延伸PCR法体外定点诱变，构建R1628Q突变型人心脏钠离子通道真核表达载体。经酶切和DNA测序验证后与心脏钠离子通道β1亚基质粒pEGFP-N3-SCN1B瞬时共同转染到HEK293 ...
曾志鹏
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2008 目的构建人PTEN基因的真核表达载体并在COS-7细胞中高效表达。方法从人喉粘膜组织中分离总RNA,经逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）得到PTEN全基因。克隆入PTEM-T easy载体上,经过PCR、酶切鉴定为阳性的克隆,进行测序分析。然后将所获得的基因定向克隆入PCI-neo载体中构建表达载体。并将其转入COS-7细胞中进行瞬时表达。结果反转录PCR扩增后的产物,在约1.4 kb处可以看见特异性条带,序列分析表明与GenBank中的PTEN基因序列相同。PCI-PTEN真核载体转染COS ...
陈鸥 +5 more
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Study of hnRNPA1 and TFF3 on the biological function of BGC-823 cells [PDF]
, 2011 胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，肿瘤的形成以及恶变，是一个涉及多种癌基因和抑癌基因参与作用的复杂病理过程。TFF3是三叶因子家族成员之一，是一种小分子粘膜分泌蛋白，其与胃癌的关系以及在粘膜上皮细胞中的重建作用已经成为大家关心和研究的热点之一。hnRNPA1在RNA调节中的作用及其在细胞凋亡和增殖等肿瘤发生、发展机制中的作用，表明其与肿瘤的形成和发展息息相关。本实验首次在胃癌细胞系BGC823中探讨TFF3与hnRNPA1肿瘤细胞生物学功能的影响，并进行二者结合性的初步探讨。 本实验通过构建Myc ...
王海星
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重组HBsAg真核表达载体的构建及其稳定转染H22细胞的筛选
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的构建乙肝表面抗原（HBsAg）基因（678bp）的真核表达质粒（pcDNA3-HBsAg）,转染小鼠乳肝癌细胞（H22）,获得其稳定表达细胞株（H22/HBsAg）。方法用PCR方法从含乙肝病毒（HBV）基因的PUC18-HBV质粒上扩增HBsAg基因序列;经酶切、连接构建pcDNA3-HBsAg;利用改良的阳离子脂质体介导法将其转染入H22细胞,经G418筛选获得阳性克隆细胞株,用RT-PCR法检测阳性细胞株的HBsAg mRNA。结果成功构建了重组HBsAg真核表达载体 ...
周晓晶 +4 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的探讨临床创面组织中生长相关因子c-sis和c-jun的表达变化规律。方法应用免疫组化方法对临床16例烧伤病人创面愈合过程中c-sis和c-jun表达变化进行检测,计算阳性表达细胞数。结果临床创面愈合中c-sis和c-jun有明显的规律性的表达。但二者表达模式不尽相同。c-sis在伤后5天表达量增加,10天达峰值,其阳性颗粒主要分布于真皮层成纤维细胞的胞核中。c-jun的表达在伤后1天达最高值,其阳性颗粒主要分布于表皮基底细胞胞浆及真皮成纤维细胞的胞核内。结论烧伤可以诱导皮肤创面组织原癌基因c ...
隋志甫 +4 more
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Effect of Trefoil factor 1 on induced expression of intercellular adhesion molecule 1 and vascular cell adhesion molecule 1 [PDF]
, 2009 研究目的：探讨肿瘤坏死因子-α（TumorNecrosisFactor-α，TNF-α）刺激后胃黏膜上皮细胞GES-1细胞间粘附分子1(Intercellularadhesionmolecule1，ICAM1)、血管细胞黏附分子1（Vascularcelladhesionmolecule1，VCAM1）表达变化，以及TFF1（Trefoilfactorfamily1，TFF1）过表达对GES-1细胞中TNF-α诱导的ICAM1、VCAM1表达的影响。 研究方法：以永生化的胃黏膜上皮细胞株GES ...
杨晓宁
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绿色荧光蛋白基因 gfp 真核表达载体 pcTKGFP 的构建
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 1999 目的: 构建携带绿色荧光蛋白基因( gfp)的真核表达载体 pcTKGFP,为利用绿色荧光蛋白标记在实验动物体内进 行自杀性基因治疗的研究和转基因动物打靶载体的构建提供基因材料。方法: 采用 PCR 技术从商品质粒 pEGP -C1 中扩增出 gfp( 799 bp) ,PCR 产物用 XbaⅠ和 BamH Ⅰ双酶切后定向克隆至真核表达载体 pcTK, 重组质粒 pcTKGFP 用限制性内切酶和 DNA 序列分析进行鉴定。结果: 部分 DNA 序列分析证明 PCR 产物为 gfp, 成功筛选到携带 ...
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共表达p53及siRNA-VEGF质粒的构建及其在PC-3细胞中的表达
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建可同时表达野生型p53（wt-p53）及siRNA-VEGF的重组真核表达载体用于激素非依赖性前列腺癌的联合基因治疗。方法利用亚克隆、T-A克隆和PCR技术合成并构建pcDNA3.1-p53,siRNA-VEGF,p53/siRNA-VEGF及siRNA-scramble重组质粒。以脂质体法将上述重组质粒转染至PC-3细胞,PCR鉴定p53,VEGF基因的表达。结果克隆出wt-p53全长及带有U6启动子的siRNA-VEGF序列,经DNA测序证实序列正确,通过连接成功构建上述五种真核重组表达载体。
刘亚男 +10 more
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