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重组HBsAg真核表达载体的构建及其稳定转染H22细胞的筛选
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的构建乙肝表面抗原（HBsAg）基因（678bp）的真核表达质粒（pcDNA3-HBsAg）,转染小鼠乳肝癌细胞（H22）,获得其稳定表达细胞株（H22/HBsAg）。方法用PCR方法从含乙肝病毒（HBV）基因的PUC18-HBV质粒上扩增HBsAg基因序列;经酶切、连接构建pcDNA3-HBsAg;利用改良的阳离子脂质体介导法将其转染入H22细胞,经G418筛选获得阳性克隆细胞株,用RT-PCR法检测阳性细胞株的HBsAg mRNA。结果成功构建了重组HBsAg真核表达载体 ...
周晓晶 +4 more
doaj
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的探讨临床创面组织中生长相关因子c-sis和c-jun的表达变化规律。方法应用免疫组化方法对临床16例烧伤病人创面愈合过程中c-sis和c-jun表达变化进行检测,计算阳性表达细胞数。结果临床创面愈合中c-sis和c-jun有明显的规律性的表达。但二者表达模式不尽相同。c-sis在伤后5天表达量增加,10天达峰值,其阳性颗粒主要分布于真皮层成纤维细胞的胞核中。c-jun的表达在伤后1天达最高值,其阳性颗粒主要分布于表皮基底细胞胞浆及真皮成纤维细胞的胞核内。结论烧伤可以诱导皮肤创面组织原癌基因c ...
隋志甫 +4 more
doaj
, 2011 鉴定得到嗜热四膜虫13个含有完整保守结构域的hsp70基因,对其中5个高度相似且无内含子的hsp70基因进行表达分析。在37、39和41℃热激条件下,实时荧光定量PCR结果表明,hsp70-2基因对热激响应最敏感。在四膜虫生长、饥饿和接合生殖这3种生理或发育状态下,Microarray结果显示,hsp70-4基因恒定且高表达;在热激条件下,hsp70-4基因的表达水平随着温度的升高而略微增加,证实hsp70-4基因为热休克相关蛋白hsc70基因;克隆的hsp70-4基因全长2208bp ...
冯立芳, 袁冬霞, 缪炜, 畅悦
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, 2013 基于四膜虫小核rDNA改造得到的pD5H8载体，在转染进接合生殖时期的四膜虫后能发育成9000～10000拷贝的大核rDNA，因此pD5H8载体是四膜虫异源基因表达的研究热点；但其载体上匮乏合适的克隆位点和无启动子结构阻碍了该载体的进一步发展。本研究在四膜虫启动子HSP70—2和终止子HSP70-I之间，通过稀有酶切位点I-SceI导入细菌绿色荧光蛋白NGFP）这一筛选标记，由此组成的DNA片段（HSP70-25’UTR．I-SceI—HGFP．I—SeeI—HSP70-13’UTR）整合进pD5H8 ...
冯立芳, 熊杰, 袁冬霞, 缪炜
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的研制高效表达型T载体用于基因的表达及蛋白功能分析。方法限制性内切酶EcoR V酶切真核表达载体pcDNA3,回收线性化质粒片段与三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTTP）70℃退火,构成T克隆载体并回收纯化。将增强绿色荧光蛋白基因（EGFP）和中国旱獭α干扰素基因（cwIFNA5）分别扩增后直接克隆到新构建的表达型T载体,转化感受态细菌,挑选阳性菌并制备质粒瞬时转染真核细胞,荧光显微镜观察EGFP的表达,病毒保护试验检测中国旱獭α干扰素的生物学活性。结果成功构建了表达型T载体 ...
卢银平, 祝建芳, 刘朝, 董继华
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共表达p53及siRNA-VEGF质粒的构建及其在PC-3细胞中的表达
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建可同时表达野生型p53（wt-p53）及siRNA-VEGF的重组真核表达载体用于激素非依赖性前列腺癌的联合基因治疗。方法利用亚克隆、T-A克隆和PCR技术合成并构建pcDNA3.1-p53,siRNA-VEGF,p53/siRNA-VEGF及siRNA-scramble重组质粒。以脂质体法将上述重组质粒转染至PC-3细胞,PCR鉴定p53,VEGF基因的表达。结果克隆出wt-p53全长及带有U6启动子的siRNA-VEGF序列,经DNA测序证实序列正确,通过连接成功构建上述五种真核重组表达载体。
刘亚男 +10 more
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, 2005 猪传染性胃肠炎病毒纤突蛋白是诱导猪产生特异性中和抗体的主要结构蛋白,包括A,B,C,D4个抗原决定位。为进一步生产TGEV植物转基因疫苗提供可操作性强、具免疫活性的外源基因,以猪传染性胃肠炎华毒弱株(TGEVH)的S基因为基础,扩增并连接4个抗原决定位相应的碱基序列,构建pPROEX-HTa原核表达载体,转化大肠杆菌诱导表达。结果表明,修饰后的S蛋白的表达量为19.8 ...
刘胜旺 +5 more
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, 1997 摘 要 用痘苗病毒作载体,成功构建了高效表达人癌胚抗原( CEA)的CE A-重组痘苗病毒, 用143 TK-细 胞作为宿主细胞,表达的蛋白质只在细胞膜上能检测到,而胞质内和细胞上清液中均未能检测到, 可见所表达 的蛋白质保持了其原有特性,再次证实痘苗病毒是真核表达的有效载体。本结果为进一步研究CE A-重组痘苗 病毒能否激活机体的免疫系统杀伤表达C ...
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2018 目的构建含EGFP标签的人β-神经生长因子（hβ-NGF）的真核表达载体,观察和分析其在HEK293细胞中的定位,为后续基因转移实验奠定基础。方法PCR扩增hβ-NGF基因编码框,连接到pEGFP-N1载体,将HEK293细胞分为对照组（不转染）、空载组（转染pEGFP-N1质粒）和实验组（转染pEGFP-N1-hβ-NGF质粒）,后两组采用脂质体法转染,24h后荧光显微镜下观察EGFP瞬时表达及细胞定位,通过蛋白序列数据库和生物信息学软件进一步分析亚细胞定位。结果经双酶切和测序鉴定,pEGFP-N1 ...
杨智 +5 more
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, 2005 肿瘤坏死因子受体(TNFR)是细胞因子受体家族中的一员,在大DNA病毒的免疫逃避中起着重要的作用。 淋巴囊肿病毒中国株(LCDV-C)是一种大DNA病毒,属于虹彩病毒科。参照已知虹彩病毒TNFR基因设计引物: P1,5′GGATCCAAAACTATGATTAAAATAAAGA 3′;P2:5′ATTACTCGAGAATGTTAAAAATTAAGCTT 3′。以LCDV-C基因组DNA为模板,PCR扩增得到一个834bp的DNA片段,并对该片段进行测序 ...
张奇亚, 黄友华, 孙伟
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