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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2006 目的构建人regucalcin（RGN）全长cDNA的真核表达载体,观察其在人肾皮质近曲小管上皮细胞（HK-2细胞）中表达。方法用RT-PCR技术扩增获得人HK-2细胞RGN全长cNDA,将扩增的产物连接入pMD18-T克隆载体上,将重组质粒转化入大肠杆菌DH5α内并提取质粒,双酶切鉴定、DNA测序鉴定准确,再用双酶切方法将RGN基因定向连接到真核表达载体pEGFP-N1中,构成pEGFP-RGN,将pEGFP-RGN转化入大肠杆菌DH5α内并提取质粒,双酶切鉴定、DNA测序鉴定准确 ...
徐洪 +4 more
doaj
Studies on the regulation of membrane microdomains (lipid rafts) / Flot to mitogen-activated protein kinase signaling pathway and its effect on reversing multidrug resistance of hepatocellular carcinoma cells [PDF]
, 2015 目的： 1.构建耐药肝癌细胞模型。 2.检测Flot下调对ERK1/2信号通路的影响，明确能否通过Flot调控ERK1/2信号通路从而实现肝癌细胞耐药性的逆转。 3.检测脂筏破坏剂甲基-β-环糊精破坏脂筏结构对ERK1/2的影响，探索脂筏与ERK1/2之间的关联。 4.检测下调Flot对耐药肝癌细胞侵袭能力的影响。 5.构建过表达质粒Flot1/pcDNA3.1（+）、Flot2/pcDNA3.1（+），为后续研究工作奠定基础。 方法： 1.用阿霉素大剂量冲击法诱导细胞，Celltiter ...
王亚丽
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建pEGFP-N1/BMP-2真核表达质粒,并进行鉴定。方法利用RT-PCR方法从组织中提取骨形态发生蛋白（BMP-2）的基因片段,与pMD18-T载体连接,构建pMD18-T/BMP-2重组质粒,酶切后与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEGFP-N1/BMP-2真核表达质粒,进行测序、酶切鉴定,表明质粒构建成功。结果通过测序、酶切鉴定,证明pMD18-T/BMP-2质粒构建成功。结论本实验成功构建了pEGFP-N1/BMP-2真核表达质粒,为进一步研究利用BMP ...
张明磊 +4 more
doaj
Study on the immune response patterns, enzymatic properties and apoptosis inducing functions of three cathepsins from Scylla paramamosain [PDF]
, 2017 拟穴青蟹（Scyllaparamamosain）是我国东南沿海地区重要的海水养殖蟹类，具备高营养价值和经济价值，但在养殖过程中容易遭受各种病害侵袭。近几年来，为了更好地进行病害防治，人们对青蟹自身免疫机制的研究逐渐增多。组织蛋白酶是一类溶酶体蛋白酶，广泛参与机体的各种生理过程，包括细胞内蛋白质降解、酶原和激素原的激活、免疫调节、炎症反应、细胞外基质重塑等，因此探索拟穴青蟹组织蛋白酶的功能特性对于深入了解甲壳动物先天性免疫防御机制具有重要意义。目前对于组织蛋白酶的研究多集中于哺乳动物 ...
朱可欣
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Preparation and Application of Soluble Human Squamous Cell Carcinoma Antigen Expressed by Escherichia coli [PDF]
, 2017 旨在建立基于大肠杆菌表达系统的高效可溶性表达人鳞状上皮细胞癌抗原(SCCAg)方法,获得具有较好活性的重组SCCAg抗原并应用于建立抗原检测方法; 。基于pGEX-6P-l载体和大肠杆菌E. coli; ER2566菌株开展重组SCCAg抗原可溶性表达纯化方法研究,评价纯化抗原活性,筛选特异性单克隆抗体,初步建立并评价SCCAg抗原检测方法。结果; 显示,pGEX-6P-l载体和E coli; ER2566菌株可用于建立较高效的可溶性表达和纯化SCCAg抗原的方法 ...
刘剑 +9 more
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丙肝核心抗原-CD40L胞外段真核表达载体的构建及其免疫原性分析
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2013 目的构建丙肝核心抗原-CD40L胞外段融合蛋白真核表达载体,并探讨其免疫原性。方法应用基因重组技术在原有载体的基础上构建真核表达载体pcDNA3.1-core-CD40L并加以鉴定。该表达质粒肌肉内注射免疫小鼠,ELISA法检测小鼠外周血中抗丙肝核心抗体,流式细胞仪检测小鼠外周血T淋巴细胞亚型,real time PCR法检测外周血单个核细胞内细胞因子,CTL杀伤实验检测小鼠脾淋巴细胞的杀伤活性。结果构建了真核表达载体pcD-NA3.1-core-CD40L ...
陈佳玉 +4 more
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The mechanism and function of extracellular matrix protein Mindin in the colon cancer progression [PDF]
, 2015 在世界范围内，结直肠癌是临床上常见的恶性肿瘤之一。结肠癌的发病机制也在不断细致、深入的研究。然而结肠癌这种实体肿瘤不像单纯的肠癌细胞系。相反，它是由多种类型的细胞和细胞外基质组成的功能失调的器官。细胞外基质是肿瘤微环境的重要组成部分，包含各种各样的细胞因子和代谢产物，具有向细胞传导各种环境信号的作用。这些信号对于细胞生命过程的方方面面都必不可少，包括增殖、分化和死亡等。然而，细胞外基质蛋白在结肠癌发生发展的演变过程中的作用尚未完全明确。 分泌型的细胞外基质蛋白Mindin作为Mindin-F ...
肖传兴
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建人紧密连接蛋白claudin-6的cDNA真核表达载体。方法应用RT-PCR、T-A克隆、限制性内切酶切及亚克隆等技术将claudin-6基因全长克隆入真核表达载体pcDNA3.1（+）质粒中。结果酶切鉴定、PCR扩增以及序列分析表明已经将claudin-6基因全长序列克隆入真核表达载体pcDNA3.1（+）质粒中。结论获得了人claudin-6基因的全长cDNA片段,构建了claudin-6原核克隆载体和真核表达载体。实验中发现,中国人claudin-6基因的461位点碱基为A ...
吴琼 +7 more
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Constructhion and Eukaryotic Expression of FBXW7α and Effects On Migrationof Cholangiocarcinoma Cell [PDF]
, 2015 胆管癌是起源于胆管上皮的一种恶性肿瘤，近年来在全球的发病率逐年升 高，目前占据消化道肿瘤的3%,胆管癌患者5年生存率不足5%；并且这一状况 30年未曾改变。由于起病隐匿，发现比较困难，手术效果并不理想；为此我们 寄希望于采取新一代的基因诊断提高发现率；有人对人类多种肿瘤做了基因突变 测定，发现FBXW7在胆管癌中突变率较高。FBXW7有三种亚型，分别为FBXW7 α、FBXW7β和FBXW7γ；FBXW7α含有一个F-box基序，该基序直接与Skp 蛋白结合构成完整的SCF(Skp-cullin-F ...
翁中海
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2005 目的 构建表达反义血管内皮生长因子165（VEGF165）的真核表达载体,观察其对人乳腺癌细胞MCF- 7的影响,探讨反义基因治疗乳腺癌的可行性。方法 应用基因重组技术,将人VEGF165cDNA反向克隆入pcDNA3真核表达载体中,构建VEGF165反义基因的真核表达载体,将此表达载体转染人乳腺癌细胞MCF -7,观察转染前后MCF 7的VEGF165表达及细胞生长周期。结果 成功构建出VEGF165反义RNA真核表达载体,反义质粒转染后MCF -7细胞VEGF165表达下降,G1期细胞增加 ...
李国栋, 宋燕, 刘力华, 段秀梅
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