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, 2006 在本研究中，我们利用两种实验鱼——斑马鱼和稀有鮈鲫，通过核移植技术将前者的细胞核植入后者的去核卵，形成异种间克隆胚胎。我们利用该模型开展了关于细胞质和细胞核间的相互作用及克隆胚胎中细胞核再程序化机制的研究。1.利用克隆出的稀有鮈鲫的COXI基因，构建进化树，结果确定斑马鱼和稀有鮈鲫间的克隆关系为亚科间的克隆。另外，克隆出斑马鱼的GAPDH，并证明GAPDH 基因可以作为鱼类亚科间克隆胚胎转录分析的良好内参。2.利用斑马鱼和稀有鮈鲫的克隆胚胎模型，结合抑制性消减杂交差异显示技术，建立了正向 ...
裴得胜
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2005 目的 构建表达反义血管内皮生长因子165（VEGF165）的真核表达载体,观察其对人乳腺癌细胞MCF- 7的影响,探讨反义基因治疗乳腺癌的可行性。方法 应用基因重组技术,将人VEGF165cDNA反向克隆入pcDNA3真核表达载体中,构建VEGF165反义基因的真核表达载体,将此表达载体转染人乳腺癌细胞MCF -7,观察转染前后MCF 7的VEGF165表达及细胞生长周期。结果 成功构建出VEGF165反义RNA真核表达载体,反义质粒转染后MCF -7细胞VEGF165表达下降,G1期细胞增加 ...
李国栋, 宋燕, 刘力华, 段秀梅
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, 2004 VP2 8是对虾白斑综合症病毒 (Whitespotsyndromevirus ,WSSV)的一个重要的囊膜蛋白。为了便于研究VP2 8在和宿主细胞相互作用过程中扮演的角色 ,将VP2 8基因克隆到一个原核表达系统 ,对原核表达的VP2 8的特性进行了研究 ,并制备了抗VP2 8的多克隆抗体和单链抗体 ,对原核表达的和天然病毒的VP2 8蛋白免疫原性进行了比较。结果表示 ,原核表达的VP2 ...
赵新颜,魏聪,戴玲芬,高宏,戴和平
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四川大学学报. 自然科学版, 2001 将猪囊尾蚴抗原基因ＴＳ７６亚克隆至ＶＲ１０２０真核表达载体中，用菌落原位杂交法筛选重组质粒，将其转染Ｃｏｓ７细胞，用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ鉴定插入片段的ｍＲＮＡ转录；用ＥＬＩＳＡ检测其表达产物．结果发现： ＶＴＳ７６在真核细胞中能够转录ＴＳ７６基因；表达产物被兔抗猪囊尾蚴高免血清所识别，在转染真核细胞后２４ｈ，即可检测到正确表达的猪囊尾蚴抗原蛋白．
孟民杰 +9 more
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pcDNA3.1-flag-pygo2真核表达载体的构建及在C6细胞中的表达
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2008 目的构建pcDNA3.1-flag-pygo2真核表达载体并在C6细胞中进行表达。方法从小鼠脑胶质细胞中提取总RNA,RT-PCR法反转录合成c DNA,设计引物,调取目的片段,与pcDNA3.1-flag载体连接后转化大肠杆菌DH5α,LB平板筛选菌落,提取质粒。重组质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经过酶切鉴定及测序后,阳离子脂质体法转染C6细胞并经免疫细胞化学染色及蛋白印迹检测重组体的表达。结果重构质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经限制性核酸内切酶EcoRⅠ ...
王海东 +5 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2007 目的探讨PAI的发卡样siRNA真核表达载体PAI siRNA对人肝癌HpG2细胞VEGF表达的影响。方法设计短发夹状PAI siRNA的寡核苷酸链,将其插入到真核细胞表达载体pSilencerTM 2.1-U6 neo载体中,构建的重组载体后;采用脂质体转染方法将构建的重组载体导入人肝癌细胞HpG2中,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、westernblot法分别检测转染细胞PAI mRNA和蛋白的表达变化以及对VEGF表达的影响。结果经测序证明PAI siRNA序列正确;转染PAI ...
杜建时, 赵晴, 张静菊, 王嘉桔
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, 2009 本发明涉及一种外切菊粉酶的真核表达方法。其主要步骤是：首先将马克斯克鲁维酵母的外切菊粉酶的核苷酸序列(如SEQ ID No：1所示)通过限制性内切酶位点与毕赤酵母表达质粒pPICZαA连接获得重组表达载体，然后将重组表达载体导入毕赤巴斯德酵母宿主菌X-33或SMD1168中经诱导发酵表达目的蛋白(马克斯克鲁维酵母外切菊粉酶)。本发明为开发具有工业应用价值的外切菊粉酶奠定了基础 ...
赵宗保, 张素芳, 杨 帆
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的构建（BbxⅡ）基因真核表达载体,为研究家蚕素Ⅱ在哺乳动物细胞中的生物学作用奠定基础。方法以含有BbxⅡcDNA的PUC57质粒为模板,采用聚合酶链式反应（PCR）扩增BbxⅡcDNA片段。真核表达载体PcD-NA3.1及PCR产物经双酶切后连接,转化大肠杆菌DH-5α感受态菌,获得重组载体PcDNA3.1-Bbx/His,进行酶切鉴定和测序鉴定。结果 PCR获得与预期大小一致约300 bp的特异性DNA,重组载体PcDNA3.1-BbxⅡ/His经双酶切及测序鉴定证实 ...
李洪霞 +5 more
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产甲烷菌Methanosarcina barkeri 在不同底物下的基因表达差异
, 2016 产甲烷菌产生的甲烷约占全球甲烷排放量的74%，其对生物燃气生产有着重要的意义。通过对产甲烷生理生化的大量研究，虽已初步构建出生物产甲烷代谢过程，但是对于产甲烷菌产甲烷过程中，基因的整体表达情况尚未有研究。本文利用最新的RNA-seq技术，以Methanosarcina barkeri MS作为研究材料，研究产甲烷菌利用不同类型的底物时转录组的差异。通过研究，主要获得以下结果：第一，通过M.
方晓瑜
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建MYCT-1（myc target）基因真核表达载体,观察其转染胃粘膜GES-1细胞系后的表达。方法用RT-PCR法合成MYCT-1 cDNA,克隆至表达载体pcDNA3.1上,测序验证无突变发生。将表达载体转染GES-1细胞,用RT-PCR和Western blot检测MYCT-1基因的表达。结果限制性内切酶酶切和DNA测序证实成功克隆了MYCT-1 cD-NA全长并正确插入了表达载体,在GES-1细胞中检测到MYCT-1 mRNA和蛋白。结论成功构建了MYCT-1真核表达载体,可在GES ...
梅旭, 刘政, 邱广斌
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