Results 81 to 90 of about 991,523 (156)
小鼠Neuronatin基因真核表达载体构建及其蛋白产物的检测
, 2008 【目的】 构建基因Nnat的真核表达载体pEGFP*9鄄N1/Nnat并在真核细胞中表达目的蛋白65377; 【方法】 RT*9鄄PCR法扩增Nnat基因编码区(ORF),利用基因克隆技术构建真核表达载体,酶切及测序进行鉴定;载体构建成功后转染HepG2细胞,观察融合蛋白在细胞中的定位,Western blot检测其在真核细胞中的表达65377;【结果】 RT*9鄄PCR法扩增出Nnat基因的两种亚型,相应的双酶切能够获得插入的目的基因片断,测序分析未发现突变 ...
core
Bcl-xL和BDDFⅧ在CHO-DG44细胞中共表达及抗凋亡能力分析
四川大学学报. 自然科学版, 2015 在CMV启动子控制下构建含有B区缺失型FⅧ基因(BDDFⅧ)和Bcl-xL基因编码序列的真核表达载体pF8B和只含B区缺失的FⅧ基因(BDDFⅧ)的真核表达载体pF8,通过双酶切和测序验证重组真核表达载体构建的正确性;经过MTX压力筛选得到稳定表达BDDFⅧ活性的CHO-F8B和CHO-F8细胞株.在相同可控培养参数下进行发酵培养,Bcl-xL基因过表达赋予CHO-F8B细胞较强的抗调亡能力和更高的BDDFⅧ表达活性,BDDFⅧ的表达活性后者是前者的5倍多.
王继超 +5 more
doaj
BnGID1基因过量表达对甘蓝型油菜矮化突变体NDF-1株高的恢复
, 2010 在正常株高油菜中克隆了与拟南芥矮化突变相关基因AtGID1同源的BnGID1基因全长cDNA目的片段,将其正向插入表达载体pFGC5941上的CaMV35S启动子下游,构成该基因过量表达载体pFGC5941-BnGID1.经根癌农杆菌介导,导入甘蓝型油菜矮化突变体NDF-1基因组,通过PCR及半定量RT-PCR检测,确定得到抗性转基因植株23株.移至大田生长,观察结果显示,转基因植株明显高于对照矮化突变体NDF-1,平均高出49.05cm.结果表明 ...
李华鹏 +4 more
core
pcDNA3.1-flag-pygo2真核表达载体的构建及在C6细胞中的表达
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2008 目的构建pcDNA3.1-flag-pygo2真核表达载体并在C6细胞中进行表达。方法从小鼠脑胶质细胞中提取总RNA,RT-PCR法反转录合成c DNA,设计引物,调取目的片段,与pcDNA3.1-flag载体连接后转化大肠杆菌DH5α,LB平板筛选菌落,提取质粒。重组质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经过酶切鉴定及测序后,阳离子脂质体法转染C6细胞并经免疫细胞化学染色及蛋白印迹检测重组体的表达。结果重构质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经限制性核酸内切酶EcoRⅠ ...
王海东 +5 more
doaj
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2006 目的构建人regucalcin（RGN）全长cDNA的真核表达载体,观察其在人肾皮质近曲小管上皮细胞（HK-2细胞）中表达。方法用RT-PCR技术扩增获得人HK-2细胞RGN全长cNDA,将扩增的产物连接入pMD18-T克隆载体上,将重组质粒转化入大肠杆菌DH5α内并提取质粒,双酶切鉴定、DNA测序鉴定准确,再用双酶切方法将RGN基因定向连接到真核表达载体pEGFP-N1中,构成pEGFP-RGN,将pEGFP-RGN转化入大肠杆菌DH5α内并提取质粒,双酶切鉴定、DNA测序鉴定准确 ...
徐洪 +4 more
doaj
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2009 【目的】 构建携带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的逆转录病毒载体,观察GFP的表达情况以及对靶细胞生物特性的影响65377; 【方法】 以质粒pEGFP-C1为模板进行PCR反应,获得完整保留pEGFP-C1载体多克隆酶切位点(MCS)的EGFP基因片段,定向插入逆转录病毒载体pLXSN,筛选出正确的重组逆转录病毒载体pLXSN-EGFP,转染PA317包装细胞后获得具有感染能力的病毒颗粒,转染人多型性脑胶质瘤细胞SW038-C2,通过荧光显微镜和流式细胞仪(FACS ...
doaj
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建核转录因子κB抑制蛋白激酶（inhibitor of kappa B kinase,IKK）β真核表达载体,以便进一步探讨其生物学作用。方法从人正常肝细胞L02中提取RNA,并利用IKKβ特异性引物通过RT-PCR方法扩增了IKKβcD-NA,并克隆入pcDNA3载体中,构建重组载体pcDNA3-IKKβ。将重组载体转染入HEK293细胞中,并通过免疫印迹方法检测IKKβ的表达。结果酶切及测序结果显示,重组质粒构建成功;免疫印迹结果显示 ...
张冬梅 +6 more
doaj
, 2009 本发明涉及一种外切菊粉酶的真核表达方法。其主要步骤是：首先将马克斯克鲁维酵母的外切菊粉酶的核苷酸序列(如SEQ ID No：1所示)通过限制性内切酶位点与毕赤酵母表达质粒pPICZαA连接获得重组表达载体，然后将重组表达载体导入毕赤巴斯德酵母宿主菌X-33或SMD1168中经诱导发酵表达目的蛋白(马克斯克鲁维酵母外切菊粉酶)。本发明为开发具有工业应用价值的外切菊粉酶奠定了基础 ...
赵宗保, 张素芳, 杨 帆
core
四川大学学报. 自然科学版, 2000 :限制性内切酶酶切含两拷贝乙肝病毒 (HBV)全基因组的 pBR32 2质粒 ,得到含X基因 894bpDNA片段与载体 pcDNA3.1连接 ,构成中间载体 .以此中间载体为模板 ,PCR扩增X基因序列 ,与载体 pcDNA3连接 ,构建成X基因真核表达载体 .用脂质体转染法 ,在体外转染正常小鼠胎肝细胞 (FL)、人肝癌细胞 (SMMC 772 1)和人宫颈癌细胞 (HeLa) .以免疫组化染色法检测细胞中X蛋白表达 .结果显示 ,细胞中X蛋白表达呈低水平 .同时 ...
李丹, 姚玉成, 胡火珍, 胡以平
doaj
野生动物学报, 2013 目的:确定毕赤酵母表达东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST基因的最佳诱导表达条件。方法:本研究将PCR合成的dybowskin-1ST基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建pPIC9K-dybowskin-1ST诱导型表达载体。表达载体经线性化后转化巴斯德毕赤酵母GS115,应用BMMY培养基诱导表达。采用单一变量法及正交试验法,对甲醇诱导的浓度、时间和温度进行了优化,通过SDS-PAGE电泳分析和体外抑菌试验检测目的肽表达丰度。结果:最佳诱导条件:甲醇终浓度为0.5%、诱导时间为72 ...
崔绍鹏 +4 more
doaj