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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的构建（BbxⅡ）基因真核表达载体,为研究家蚕素Ⅱ在哺乳动物细胞中的生物学作用奠定基础。方法以含有BbxⅡcDNA的PUC57质粒为模板,采用聚合酶链式反应（PCR）扩增BbxⅡcDNA片段。真核表达载体PcD-NA3.1及PCR产物经双酶切后连接,转化大肠杆菌DH-5α感受态菌,获得重组载体PcDNA3.1-Bbx/His,进行酶切鉴定和测序鉴定。结果 PCR获得与预期大小一致约300 bp的特异性DNA,重组载体PcDNA3.1-BbxⅡ/His经双酶切及测序鉴定证实 ...
李洪霞 +5 more
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, 2010 本发明公开了肾上腺素受体激动剂诱导胚胎型珠蛋白的表达及其用途,涉及化合物在医学领域的应用,尤其涉及肾上腺素受体激动剂在治疗贫血病中的应用。本发明将肾上腺素受体激动剂用于诱导胚胎型珠蛋白的表达,因而这些物质可用于治疗β-珠蛋白自身缺陷或表达水平发生缺陷的遗传疾病,如对β型地中海贫血病或镰刀型细胞贫血病的患者进行其胚胎型珠蛋白的诱导 ...
尹乃达, 殷战, 梅芸, 贺江燕
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2008 目的构建人PTEN基因的真核表达载体并在COS-7细胞中高效表达。方法从人喉粘膜组织中分离总RNA,经逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）得到PTEN全基因。克隆入PTEM-T easy载体上,经过PCR、酶切鉴定为阳性的克隆,进行测序分析。然后将所获得的基因定向克隆入PCI-neo载体中构建表达载体。并将其转入COS-7细胞中进行瞬时表达。结果反转录PCR扩增后的产物,在约1.4 kb处可以看见特异性条带,序列分析表明与GenBank中的PTEN基因序列相同。PCI-PTEN真核载体转染COS ...
陈鸥 +5 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的构建mB7-1真核表达载体并检测其在B16细胞中的瞬时表达情况。方法提取小鼠脾细胞mRNA,PCR法获得mB7-1片段,与pcDNA3连接,并进行酶切鉴定及测序。重组质粒经脂质体介导转染鼠B16细胞,检测基因表达情况。结果完成mB7-1-pcDNA3重组载体连接及鉴定,基因测序与Genebank一致,并转染至B16细胞,检测到基因表达。结论成功构建mB7-1-pcDNA3真核表达载体,获得mB7-1表达细胞系,为研究其抗瘤效应奠定了基础。
金洪娟, 王权, 所剑
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融合蛋白TAT-RabGEF1原核表达载体的构建及蛋白表达 [PDF]
, 2018 ： 【目的】构建PET28a-TAT-RabGEF1重组质粒载体，在E.coli Rosetta（DE3）菌株中高效表达并纯化融合 蛋白，研究TAT-RabGEF1融合蛋白对肥大细胞的跨膜转导活性。【方法】以小鼠组织cDNA为模板，设计上游和下游 含有限制性酶切位点和TAT序列的引物，PCR扩增目的片段TAT-RabGEF1，并通过双酶切构建PET28a-TAT-Rab?
方虹仪, 罗晨芳, 邢纪斌
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2013 目的应用RNAi沉默Ezrin基因或表达载体使其过表达以探讨Ezrin基因对脑胶质瘤生长的影响。方法根据GenBank中Ezrin的基因序列,应用Designer3.0（Genepharma）软件设计以Ezrin基因4个位点为靶的shRNADNA oligo,合成并克隆至shRNA载体pGPU6/GFP/Neo;构建其shRNA载体。经BamHⅠ、PstⅠ酶切鉴定和测序分析,再以脂质体LipofectimineTM2000介导转染U87细胞,48h后用RT-PCR和Western blot检测Ezrin
刘乃杰 +6 more
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装载RNA“病毒样”纳米颗粒表面巯基化表达载体的构建及荧光修饰 [PDF]
, 2005 以本实验室构建的能够装载外源RNA片段的MS2噬菌体“病毒样”颗粒表达载体为基础,利用定点突变技术将衣壳蛋白基因的第15位密码子由编码苏氨酸突变为胱氨酸。表达产物在35%蔗糖密度梯度处有一目的产物,目的产物在透射电镜下呈球形,直径大小约为27nm。用马来酰亚胺5′荧光素对表达产物进行化学修饰,经光谱分析、SDSPAGE分析和MALDITOFMS鉴定,证明巯基在表达产物的外表面,并能与马来酰亚胺5′荧光素进行反应 ...
程扬健, 梁基选, 李庆阁
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激活素受体相互作用蛋白ARIPzip真核表达载体的构建及表达
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建激活素受体相互作用蛋白（activin receptor interacting protein zip,ARIPzip）真核表达载体,以便进一步探讨其生物学作用。方法从小鼠成纤维细胞3T3中提取RNA,并利用ARIPzip特异性引物通过RT-PCR方法扩增了ARIPzip cDNA,并克隆入pcDNA-Flag载体中,构建重组载体pcDNA-F-ARIPzip。将重组载体转染入HEK293细胞中,并通过免疫印迹方法检测ARIPzip的表达。结果酶切及测序结果显示,重组质粒构建成功 ...
裴颖 +7 more
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FOXN2通过PI3K/AKT信号通路对肾癌细胞增殖、凋亡的影响
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2021 目的研究FOXN2通过PI3K/AKT信号通路对肾癌增殖、凋亡的影响。方法实验分FOXN2过表达组、空载体对照组、对照组三组;检测FOXN2在人正常肾上皮细胞HK-2和肾癌细胞786-O中的表达;检测FOXN2过表达组、空载体对照组、对照组细胞的增殖情况和凋亡情况;检测FOXN2过表达组、空载体对照组、对照组细胞PI3K、AKT、p-AKT、Bcl-2、Bax、CDK1、CyclinD1蛋白表达水平。结果 (1)与人正常肾上皮细胞HK-2相比,人肾癌细胞786 ...
李秀文, 赵桂香
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, 2004 根据棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(Helicoverpaarmigerasinglenucleocapsidnucleopolyhedrovirus,HaSNPV)fp25k基因的序列,设计引物,引入适当的酶切位点,利用PCR扩增出基因片段。将该基因片段克隆至原核表达载体pProEXHTb,经IPTG诱导,在大肠杆菌DH5α中获得了高效表达,表达产物的大小为32kDa。纯化蛋白产物免疫家兔制备抗血清。该抗血清可与原核表达的GST ...
吴东,邓菲,胡志红,袁丽,孙修炼
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