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丙肝核心抗原-CD40L胞外段真核表达载体的构建及其免疫原性分析
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2013 目的构建丙肝核心抗原-CD40L胞外段融合蛋白真核表达载体,并探讨其免疫原性。方法应用基因重组技术在原有载体的基础上构建真核表达载体pcDNA3.1-core-CD40L并加以鉴定。该表达质粒肌肉内注射免疫小鼠,ELISA法检测小鼠外周血中抗丙肝核心抗体,流式细胞仪检测小鼠外周血T淋巴细胞亚型,real time PCR法检测外周血单个核细胞内细胞因子,CTL杀伤实验检测小鼠脾淋巴细胞的杀伤活性。结果构建了真核表达载体pcD-NA3.1-core-CD40L ...
陈佳玉 +4 more
doaj
小鼠β2m 正义与反义RNA 表达载体的构建及鉴定 [PDF]
, 2001 【目的】构建小鼠β2 微球蛋白基因(β2 microglobulin gene, β2 m)正义及反义RNA 表达载体, 为研究降低细胞 MHC Ⅰ 类分子的表达作准备。【方法】从小鼠基因组获得的β2 m 克隆中以β2m-pSV2ΔHXgpt 为模板, 合成两对引物, 采用常 规PCR 方法分别扩增出β2m 引导区及其下游主要编码区, 即外显子1 及部分外显子2, 然后利用重叠延伸法将两条片段拼 接起来, 再将其分别正向、反向插入载体pcDNA3, 并进行限制性内切酶酶切鉴定及序列分析。【结果 ...
黄绍良 +3 more
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野生型与突变型PS1真核表达载体的构建及其在SH-SY5Y细胞中的表达
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2005 目的为了对我们发现的中国人家族性阿尔茨海默病早老素-1（presenilin1,PS1）基因新的点突变进行蛋白功能研究,分别构建野生型和突变型PS1（G289T）与绿色荧光蛋白（EGFP）共表达载体,并检测其在SHSY5Y细胞内的表达。方法利用含人全长PS1cDNA的pcDNA3·1（zeo+）,采用定点突变技术,构建PS1（G289T）-pcDNA3·1（zeo+）载体。采用基因重组技术构建野生型和突变型PS1与绿色荧光蛋白共表达载体。应用脂质体将携带野生型和突变型PS1的质粒转染至SH-SY5Y细胞,
邵延坤 +5 more
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一种特异性识别斑马鱼卵黄蛋白原的噬菌体展示单链抗体的可溶性表达方案
, 2011 为了实现特异性识别斑马鱼卵黄蛋白原的噬菌体展示单链抗体的可溶性表达,将不能以可溶性蛋白形式表达的、只能以噬菌体展示形式特异性识别斑马鱼卵黄蛋白原的单链抗体F5的基因,克隆到pET 32a载体并转化入大肠杆菌ori DE3中。结果表明,通过诱导表达,可获得可溶性的并且仍特异性识别斑马鱼卵黄蛋白原的单链抗体32a-F5。噬菌体展示单链抗体不能可溶性表达是噬菌体展示技术应用中常见的问题 ...
戴和平 +4 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的构建调控人核心蛋白聚糖基因特异性在肺癌细胞A549内表达的基因表达载体,为进一步应用该基因进行肺癌靶向治疗的研究奠定实验基础。方法应用PCR技术从人外周血基因组中扩增肺癌细胞特异性表达的人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂的启动子,利用基因重组技术将该启动子插入真核细胞表达载体pcDNA3.1（+）,替换该载体的CMV启动子与增强子序列,从而构建成由人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂基因的启动子启动基因表达的基因表达载体。将人核心蛋白聚糖基因通过基因重组技术插入到上述载体人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂基因启动子的下游 ...
吕俊锋 +3 more
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Epstein-Barr 病毒DNA 多聚酶基因扩增和表达载体构建 [PDF]
, 2000 【目的】扩增Epstein-Barr 病毒(EBV)DNA 多聚酶基因, 构建高效表达载体。【方法】根据EBV 全基因序列, 在 EBV DNA 多聚酶基因的3′、5′端设计一对附加EcoRⅠ 和Hind Ⅲ 酶切位点的特异性引物, 以B95-8细胞DNA 为模板, 采用改良 PCR 方法扩增出EBV DNA 多聚酶基因(3 044 bp)。用EcoRⅠ 和Hind Ⅲ 酶切该基因片断并克隆至表达载体pMAL-p2, 采用 蓝白斑试验筛选阳性菌落。EcoRⅠ 和Hin dⅢ 酶切分析 ...
谢民强, 杨 林
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空肠弯曲菌penner o:19 cjaA基因的克隆表达 [PDF]
, 2011 目的克隆空肠弯曲菌penner o:19 cjaA基因,构建其原核表达载体,诱导表达及纯化蛋白,为基因工程疫苗的研制打下基础。方法扩增空肠弯曲菌penner o:19 cjaA基因,构建pGEM-T-cjaA克隆载体,以EcoRI和XhoI为酶切位点构建pGEX-4T-1-cjaA原核表达载体。表达载体转化E.coli BL21后诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物,用Glutathione Sepharose4B纯化重组蛋白。结果成功构建pGEX-4T-1-cjaA表达载体,并获得浓度为10μg ...
李鑫 +8 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建人紧密连接蛋白claudin-6的cDNA真核表达载体。方法应用RT-PCR、T-A克隆、限制性内切酶切及亚克隆等技术将claudin-6基因全长克隆入真核表达载体pcDNA3.1（+）质粒中。结果酶切鉴定、PCR扩增以及序列分析表明已经将claudin-6基因全长序列克隆入真核表达载体pcDNA3.1（+）质粒中。结论获得了人claudin-6基因的全长cDNA片段,构建了claudin-6原核克隆载体和真核表达载体。实验中发现,中国人claudin-6基因的461位点碱基为A ...
吴琼 +7 more
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, 2010 穗发芽严重影响作物的产量和品质,种子休眠性弱是穗发芽形成的主要原因之一.ABA是维持胚休眠抑制萌发的重要激素,大麦HvABA8′OH-1基因编码控制内源ABA主要分解代谢途径的关键酶.以双元载体pGreenⅡ为骨架载体,分别选取HvABA8′OH-1的保守区序列(293bp)和特异区序列(474bp),水稻胚乳特异性启动子pGlub,成功构建了种子特异性RNA干扰表达载体pOHC和pOHS.利用农杆菌介导法将载体转入水稻,获得植株50株.经鉴定,其中18株为转基因阳性植株 ...
郑寒 +5 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建HSV-TK单基因和TK/hIL12融合基因的真核表达载体。方法 PCR扩增质粒pGT60-hIL12中HSV-TK与hIL12治疗基因片段,同时引入pcDNA3.1（+）多克隆酶切位点,构建HSV-TK单基因及其与hIL12融合基因的真核表达载体。结果 DNA测序分析、限制性双酶切鉴定证实构建的真核表达载体中治疗基因的序列、大小和方向正确。结论成功构建了pcDNA3.1-TK和pcDNA3.1-TK/hIL12真核表达载体,为进一步探索HSV-TK与hIL12基因的协同抗瘤作用提供实验基础。
杜晓媛 +5 more
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