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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建小鼠分泌型γ干扰素（IFN-γ）原核表达载体pFLAG-IFN-γ。方法利用分子生物学方法,从pcD-NA3.1-Egr1-IFN-γ质粒上将IFN-γ切下,然后连接到原核表达载体pFLAG-shift12TM上,构建成pFLAG-IFN-γ表达载体,进行PCR、酶切鉴定。结果经鉴定,所构建的质粒pFLAG-IFN-γ的鉴定结果与预期的一致。结论成功地构建了带有分泌信号的原核表达载体pFLAG-IFN-γ。
刘林林 +5 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2005 目的 构建表达反义血管内皮生长因子165（VEGF165）的真核表达载体,观察其对人乳腺癌细胞MCF- 7的影响,探讨反义基因治疗乳腺癌的可行性。方法 应用基因重组技术,将人VEGF165cDNA反向克隆入pcDNA3真核表达载体中,构建VEGF165反义基因的真核表达载体,将此表达载体转染人乳腺癌细胞MCF -7,观察转染前后MCF 7的VEGF165表达及细胞生长周期。结果 成功构建出VEGF165反义RNA真核表达载体,反义质粒转染后MCF -7细胞VEGF165表达下降,G1期细胞增加 ...
李国栋, 宋燕, 刘力华, 段秀梅
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, 2007 本发明涉及一种用于体外药物代谢性质评价的药物代谢酶异源表达系统，具体的说一种共表达CYP和CPR的酵母表达系统，分别带有CPR的DNA片段和CYP的DNA片段的酵母表达载体转导酵母细胞中，这两个表达载体分别以整合型和游离型的方式在酵母细胞中表达，重组的酵母细胞经发酵诱导，得到的酵母细胞制备物即为目的表达系统，其可应用于CYP酶系体外药物代谢性质的评价。所构建成新的酿酒酵母共表达系统可广泛地应用于氧化还原酶体系如细胞色素P450酶系，后者被广泛地应用于涉及ADME/T和药代动力学中药物代谢等的筛选 ...
杨 凌, 程 婕
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, 2018 2A肽(P2A)介导的多基因表达载体具有高裂解活性且上、下游基因等摩尔表达等优点,已广泛应用于动物转基因研究.文昌鱼(amphioxus)作为一种新兴的模式动物,尚无应用这种表达载体的报道,为此在pXT7转录系统基础上构建一个P2A介导的多基因表达载体.将体外转录的P2A介导的mRNA注入文昌鱼卵细胞并受精后,经激光共聚焦显微镜和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测表明,该mRNA在文昌鱼胚胎中能够高效地翻译和剪切,并且在信号肽的作用下eGFP蛋白定位于细胞核中 ...
李光, 华俊豪, 王义权
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HBsAg及 B7-1 双表达重组逆转录病毒载体的构建 [PDF]
, 2000 【目的】为探索共刺激分子 B7-1 增强 HBsAg 真核表达载体基因免疫的效果,并用于消除乙肝免疫耐受。【方法】 用高保真 PCR 法扩增目的基因片段 B7-1 及带接头和启动子的 IRES-HBs 基因片段,亚克隆到 pBluescript KS+载体中测序,再 克隆到逆转录病毒载体 PLXSN 中。【结果】所扩增的目的基因片段经测序证实, 未发现序列有改变。先将 B7-1 通过 EcoR Ⅰ 、Xho Ⅰ插入 plxsn 中,构建成 plxsn-B7-1, 再用 Xho Ⅰ 、 BamHⅠ将 ...
周 智 +4 more
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小鼠分泌型内皮抑素原核表达载体pFLAG-ssEndostatin的构建
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建带有小鼠分泌型内皮抑素（ssEndostatin）的原核表达载体pFLAG-ssEndostatin。方法利用分子生物学方法,采用Kpn I内切酶将ssEndostatin从pcDNA3.1-Egr1-ssEndostatin质粒上切下,然后连接到pFLAG表达载体上,构建成原核表达载体pFLAG-ssEndostatin,并对其进行PCR、酶切鉴定。结果经酶切、PCR鉴定,所构建的原核表达质粒pFLAG-ssEndostatin与预测的一致 ...
杨志广 +4 more
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干扰烟草GA 20-氧化酶siRNA植物表达载体的构建及矮化烟草的产生
, 2008 根据烟草(Nicotiana tabacum)GA 20-氧化酶基因序列,设计2对分别含有特定酶切位点的特异引物,以烟草基因组DNA为模板,扩增目的基因(约250bp)片段.将正、反向目的片段分别插入中间载体的内含子两侧,再经BamHI和SacI双酶切回收约700bp的目的片段,插入到双元载体质粒p2355中,成功构建了含GA20-氧化酶基因片段的反向重复序列植物表达载体p23700,其转录产物能形成发夹RNA(hpRNA),产生小分子干扰RNA,干扰目的基因的表达 ...
乔定君, 谈心, 杨宏, 马欣荣
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人FOXC2真核表达载体的构建及稳定转染C-33A细胞系的建立
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建人FOXC2真核表达载体,并转染人宫颈癌C-33A细胞,建立稳定转染的细胞系。方法应用PCR方法从人FOXC2克隆中扩增其cDNA编码区序列,并将其构建于pcDNA3.1（-）真核表达载体。经PCR和测序鉴定后,利用脂质体进行宫颈癌C-33A细胞的转染,应用G418筛选出稳定表达FOXC2的细胞系,通过RT-PCR及Westernblot法检测FOXC2的表达情况。结果成功构建pcDNA3.1（-）/FOXC2真核表达载体,建立稳定转染FOXC2的C-33A细胞系,并鉴定了FOXC2目的基因在C-
成荣杰, 付艳
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, 2014 目的构建PHD2基因原核表达载体pET43.1b(+)-PHD2,实现Nus-PHD2融合蛋白在大肠埃希菌中的可溶性表达。方法用Sac I酶切pET43.1b(+)制备线性化载体,设计与线性化载体两端具有至少15个同源序列的特异性引物,以真核重组质粒pCMV6-Entry-EGLNl为模板,PCR法扩增PHD2目的基因。采用In-Fusion技术构建原核表达载体pET-43.1b(+)-PHD2,并将其导入大肠埃希菌BL21 (DE3)中诱导表达。用SDS-PAGE和Western ...
许国旺 +4 more
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, 2012 以产褐藻胶裂解酶的紫色链霉菌（Streptomyces violaceoruber）为出发菌株,应用基因工程技术,将褐藻胶裂解酶aly基因进行克隆,并构建了该基因的重组表达载体pET23b（＋）-aly.通过表达条件的初步优化,实现了aly基因在大肠杆菌Escherichia coli BL21（DE3）中的成功表达.在IPTG诱导浓度为0.1mmol/L,诱导时间为8h,诱导温度为16℃的条件下,细胞破壁后上清中ALY粗酶液活力为6U/mg ...
杜昱光 +5 more
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