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【目的】探讨C-Myc/Fas基因BcaCD885细胞裸鼠移植瘤内转染的抑瘤效果,了解分子机制。【方法】构建人颊癌BcaCD885细胞裸鼠移植瘤模型,实验动物分3组,每组16只。分别瘤内注射脂质体、脂质体,pBK-fas、以及脂质体/pBK-Fas/pcDNA3-C-Myc共聚物,观测移植瘤增殖,绘制生长曲线。转染72h后每组处死6只动物,RT-PCR检测移植瘤细胞FasmRNA表达。流式细胞术(Flowcytometry,FCM)检测Fas蛋白表达和移植瘤细胞凋亡、增殖水平。【结果】Fas转染、C ...
侯劲松 +4 more
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目的将全长外源多药耐药基因转入间充质干细胞使其外源基因得以表达。方法从胎盘组织中分离培养间充质干细胞,构建携带全长外源多药耐药基因的逆转录病毒,将此逆转录病毒转染间充质干细胞,绿色荧光显微镜检测外源基因的表达,western blot检测MDR1基因表达产物。结果绿色荧光显微镜可观测到转染后间充质干细胞有绿色荧光蛋白的表达,western blot检测到全长多药耐药基因编码的p-糖蛋白的表达。结论mdr1逆转录病毒载体可有效转染人胎盘源MSC,转染的外源基因可充分表达。
王博蔚 +3 more
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多药耐药基因转染人骨髓间充质干细胞及对其化疗保护作用的实验研究
目的探讨逆转录病毒介导多药耐药基因(mdr1)体外转染人骨髓间充质干细胞(MSCs)能否提高其对化疗药物的耐受性。方法采用percoll密度梯度离心法自骨髓中分离MSC并进行纯化和扩增;脂质体转染法将携带有mdr1基因的逆转录病毒载体导入293T包装细胞,获得的病毒上清感染MSC,流式细胞术测定mdr1基因编码产物P-糖蛋白(P-g170)的表达水平;罗丹明(Rh123)排泌试验检测P-g170的功能活性;MTT法测定转染MSC对化疗药物耐受性。结果mdr1基因导入骨髓MSC后稳定表达P ...
叶明珠, 韩丽英, 岳鑫, 李荷莲
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目的探讨逆转录病毒介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转染人骨髓间充质干细胞(hBM-MSC)的可行性。方法携带EGFP的重组逆转录病毒载体(EGFP-RV)转染体外培养扩增的hBM-MSC,嘌呤霉素筛选,获得表达EGFP的hBM-MSC/EGFP,以未转染的hBM-MSC为对照组,观察两组细胞的形态、生长特性、表面分子表达及向脂肪细胞、成骨细胞分化的潜能。结果EGFP-RV转染hBM-MSC后,获得稳定表达EGFP的hBM-MSC/EGFP;hBM-MSC/EGFP的细胞形态、生长特性 ...
马俐君 +4 more
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放疗增强对转染pAdKDR/CD/TK自杀基因系统的SW480大肠癌细胞的杀伤作用
目的研究γ射线照射对含KDR启动子双自杀基因大肠癌细胞SW480的杀伤协同作用,和自杀基因及前药的放射增敏作用。方法重组腺病毒pAdKDR-TK、pAdKDR-CD和pAdKDR-TK/CD转染SW480细胞,观察γ射线对SW480细胞基因转染率的增强作用和对前药GCV、5-FC、GCV+5-FC杀伤SW480细胞的放射增敏效应,以及前药GCV、5-FC、GCV+5-FC对γ射线杀伤SW480细胞的协同增效作用。结果转染双自杀基因的大肠癌细胞射线组比对照组转染率有明显升高 ...
刘志毅, 金虎, 翟春亮, 刘明
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目的观察单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)丙氧鸟苷(GCV)自杀基因系统联合IL-12基因对人宫颈癌hela细胞系体外杀伤作用。方法采用脂质体转染法将HSV-TK及IL-12联合基因转染hela细胞,并将其用于体外实验,观察GCV对转染联合基因的Hela的杀伤作用及旁观者效应等。结果加入GCV后体外培养联合基因转染的Hela细胞,24 h后细胞明显发生形态上改变,正常对照组细胞生长旺盛;随着GCV剂量的加大,转染联合基因的Hela细胞的存活率呈逐渐下降的趋势 ...
李楷滨, 王立岩, 盛敏佳
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miR-23b-3p靶向PALM3对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子表达的影响
目的研究miR-23b-3p对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症的作用及机制。方法将肺泡上皮细胞A549细胞分为对照组、感染组、转染组、感染组+转染组;对照组A549细胞常规培养,感染组用1×108 CFU/mL肺炎链球菌培养A549细胞,转染组转染不同载体,感染组+转染组在A549细胞被肺炎链球菌处理前48h进行转染。qRT-PCR检测细胞中miR-23b-3p和paralemmin-3(PALM3)mRNA的水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中PALM3 ...
戴彩同, 张少锋, 黄玉洁
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【目的】研究丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV-C)对肝门部胆管癌细胞(QBC939)细胞凋亡及细胞周期的影响。【方法】将包含HCV-C基因的真核表达质粒pcDNAHCV-C和空载体,利用脂质体介导将其转染QBC939,经G418筛选获得稳定转染HCV-C的QBC939细胞(QBC939HCV-C+),RT-PCR和免疫荧光法检测HCV-C蛋白表达,MTT法检测QBC939HCV-C+细胞、空白质粒转染QBC939(QBC939pcDNA)细胞和未转染QBC939细胞生长增生率;流式细胞术(FACS ...
李志花
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目的建立Smad7稳定转染胶质母细胞瘤细胞株,并观测Smad7表达对U251细胞增殖的影响。方法应用脂质体将真核细胞表达质粒pCDNA3.0-Smad7和空载质粒pCDNA3.0转染入胶质母细胞瘤细胞,并在转染后绘制生长曲线以观测细胞增殖。结果RT-PCR和westernblot证实Smad7在转录和蛋白翻译水平上均呈高表达。Smad7转染后,细胞增殖速度减慢。结论Smad7稳定转染胶质母细胞瘤细胞株已成功建立,Smad7高表达可抑制胶质母细胞瘤细胞株的增殖。
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腺病毒载体介导人BMP-2与VEGF-165对骨髓间充质干细胞形态特征及增殖能力影响的实验研究
目的探讨携带骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)与血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor 165,VEGF-165)双基因的腺病毒载体转染骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)后对细胞形态特征及增殖能力的影响。方法选取4只新西兰大白兔抽取骨髓液,分离鉴定获得第3代BMSCs做为实验对象,实验分成4组:Ad-BMP-2-VEGF ...
张聪 +5 more
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